蔡宇雨，鄒良強，劉 娜

（首都醫(yī)科大學附屬北京世紀壇醫(yī)院醫(yī)學檢驗科北京大學第九臨床醫(yī)學院醫(yī)學檢驗科尿液細胞分子診斷北京市重點實驗室，北京100038）

尿液生化檢測作為一項無創(chuàng)的檢查，對于尿路結(jié)石、腎臟疾病早期的診斷及治療有著至關重要的作用。尿液生化檢測方便、快速、靈敏、準確，是腎病變早期發(fā)現(xiàn)、初步定位評估和病情監(jiān)測的良好選擇，且多項尿液生化聯(lián)合檢查，對腎病變部位及程度的評估更為全面［1］。但實踐中受到留取條件的限制，許多患者對正確留取24 h尿液的方法依從性較差，如沒有專用的冷藏保存箱、尿液生化聯(lián)合檢查時要根據(jù)不同項目的保存條件多次留尿送檢，以及患者難以嚴格按照規(guī)定添加防腐劑等。如果不能按照正確方式留取尿液，則會對檢測結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響，干擾臨床醫(yī)生對病情的正確判斷，所以既要確保送檢尿液符合要求又要減少患者留尿時的不便則成了一個亟需解決的問題。目前臨床上主要根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程第四版》以及《尿液標本的收集劑處理指南》推薦的留取方式對24 h尿液進行保存，首選方法為冷藏保存，無冷藏條件則可以添加防腐劑（硼酸、濃鹽酸）保存［2-3］。既往研究表明，24 h尿液在常溫條件下保存對總蛋白、肌酐等項目結(jié)果無顯著影響，但研究項目和保存方式較為局限［4-6］。本研究旨在研究尿液分別在常溫、添加濃鹽酸以及硼酸保存條件下與冷藏保存相比，檢測結(jié)果是否存在差異，探尋一種不影響尿液生化檢測結(jié)果且留取安全簡便的保存方式。

材料和方法

1 儀器和試劑

使用貝克曼庫爾特AU5800系列全自動生化分析儀及配套試劑檢測。

2 方法

在同一時間收集來自志愿者的隨機尿20份，每份尿液10mL，混勻后取0.5mL進行細菌培養(yǎng)，將剩余尿液分成四份，每份2mL。四份尿液分別進行下列處理：①放置在2～8℃冷藏不添加防腐劑；②常溫不添加防腐劑；③常溫添加濃鹽酸20μL；④常溫添加分析純級別硼酸0.02g。處理后的樣本保存24 h后進行細菌培養(yǎng)以及生化項目的檢測，包含：總蛋白（total protein，TP）、鉀（potassium，K+）、鈉（sodium，Na+）、氯（chloride，Cl-）、鈣（calcium，Ca）、磷（inorganic phosphorus，IP）、尿素（Urea）、尿酸（uric acid，UA）及肌酐（creatinine，Cr）。

3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行分析。所有變量均按Shapiro-W ilk進行正態(tài)驗證，正態(tài)變量以均值±標準差表示，非正態(tài)變量用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）［M（X75%-X25%）］表示，正態(tài)資料兩組間差異比較采用單因素方差分析，非正態(tài)資料組間比較采用W ilcoxon檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

將冷藏保存作為標準，常溫保存、濃鹽酸保存以及硼酸保存分別與之進行比較。常溫保存與冷藏保存相比各項生化檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；使用濃鹽酸保存與冷藏保存相比，Cr、UA、K+、Cl-、Urea及TP結(jié)果差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Na+、Ca和IP差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；使用硼酸保存與冷藏保相比，Cr、UA、K+及Urea結(jié)果差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05），TP、Na+、Cl-、Ca及IP差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同方式保存尿液后檢測結(jié)果見表1、表2和表3。

表1 常溫與冷藏保存各生化項目檢測結(jié)果比較

表2 添加濃鹽酸與冷藏保存各生化項目檢測結(jié)果比較

討 論

24 h尿液生化的檢測在臨床上應用較廣泛，對于尿路結(jié)石、鈣磷代謝、甲狀旁腺功能以及腎臟疾病的早期診斷、治療效果、預后判斷等起著非常重要的作用。24 h尿液正確留取與及時送檢是保證檢驗結(jié)果準確的前提，不能及時送檢時應根據(jù)不同項目要求合理保存。尿液的保存方法一般有冷藏法和化學防腐劑法［7］。然而不論使用哪種方法保存，對尿液留取方式或防腐劑的添加量均有嚴格限制，患者很難掌握規(guī)范的操作方式，導致留取樣本的依從性較差。當多個尿液生化項目聯(lián)合檢測時，不同項目需按照各自推薦的方式保存，并需要多次留尿，給患者造成諸多不便。另外，使用防腐劑時還要注意其毒性、腐蝕性等安全隱患。因此目前迫切需要找出一種既不影響檢測結(jié)果又安全簡便的尿液保存方法。

24 h尿蛋白的檢測結(jié)果可反映每天排泄的尿蛋白量，有助于診斷腎臟病變，評估治療及預后效果。既往對24 h尿蛋白的保存方式研究較多，可以冷藏保存，也可以常溫或添加二甲苯等防腐劑保存，不同保存方式對結(jié)果無明顯影響［5-6］。本研究中，常溫和硼酸與冷藏保存相比，TP結(jié)果無明顯差異，但使用濃鹽酸保存防腐會影響TP的檢測結(jié)果，這與指南推薦的方式相符［3］。因此，檢測TP時可以在常溫和硼酸保存方式下留取尿液，而不建議使用濃鹽酸進行防腐。

尿Cr排出量晝夜相對恒定，受干擾的因素較少，是校正尿量不同及個體差異的重要方法，在臨床上應用非常廣泛［8］。本研究中常溫與冷藏保存相比，Cr結(jié)果無明顯差異，但使用濃鹽酸或硼酸防腐會影響Cr檢測結(jié)果，與指南推薦的方式不符［3］?？赡茉驗楸緦嶒炇褻r檢測方法為肌氨酸氧化酶法，該項目在檢測過程中濃鹽酸或硼酸消耗了反應中產(chǎn)生的過氧化氫，減少了進一步生成藍色色素的反應，使檢測結(jié)果偏低。因此，檢測Cr時可以在常溫條件下保存尿液，而不推薦使用濃鹽酸和硼酸進行防腐。

尿K+、Na+、Ca、IP及UA在結(jié)石形成中起重要作用，可用于尿路結(jié)石病人的實驗室檢查［9］。本研究結(jié)果提示常溫保存尿液對以上生化檢測結(jié)果無明顯差異。使用濃鹽酸和硼酸保存尿液對K+和UA的檢測結(jié)果有影響，可能原因為酸性物質(zhì)對電極造成干擾導致K+結(jié)果發(fā)生變化，使用濃鹽酸和硼酸保存尿液后，UA結(jié)果較冷藏保存結(jié)果偏低，考慮原因為UA在酸性條件下不穩(wěn)定而導致結(jié)果偏低［10］。指南上不推薦使用硼酸保存的尿液檢測Ca和IP，但研究結(jié)果顯示硼酸保存的尿液對Ca和IP檢測無明顯影響，與指南中有差異［3］，但《全國臨床檢驗操作規(guī)程第四版》中并未明確指出Ca和IP不能使用硼酸保存［2］，可能因為添加硼酸保存的尿液在檢測Ca和IP時并不是最佳保存方式，尿液檢測Ca和IP時也可使用硼酸保存。所以，檢測K+、Na+、Ca、IP及UA時可用在常溫條件下保存尿液，而檢測K+和UA的尿液不推薦使用濃鹽酸或硼酸進行保存。

本研究中還對不同方式保存的尿液進行了細菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示常溫和添加濃鹽酸與冷藏保存在細菌數(shù)量上差異有統(tǒng)計學意義。常溫保存較冷藏保存細菌數(shù)量上明顯升高，但對于各項尿液生化結(jié)果并未產(chǎn)生影響，這可能是細菌增長的數(shù)量不足以影響生化項目檢測。使用濃鹽酸進行尿液防腐有明顯的抑菌作用，細菌生長被抑制，但由于濃鹽酸酸性較強，會對Cr、UA、Na+、K+、Cl-、Urea及TP檢測產(chǎn)生影響。以上結(jié)果提示，細菌增長不是影響尿液生化檢測結(jié)果的決定性因素。

總之，本研究提示24 h尿液在常溫條件下保存對生化項目檢測無明顯影響，而添加濃鹽酸、硼酸進行防腐會對某些項目造成不同程度的影響。因此在實際臨床工作中，如患者沒有冷藏保存條件，可將24h尿液常溫保存。