何俊秋，董華凰，張志勝，馬 超，李迎童，白 潔，張 明，劉敏芳，張 曼

（1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100038；2.北京市化工職業(yè)病防治院檢驗(yàn)科，北京100093；3.尿液細(xì)胞分子診斷北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100038）

正己烷是一種具有高揮發(fā)性、高脂溶性的有機(jī)溶劑，在化工領(lǐng)域內(nèi)被廣泛應(yīng)用于制鞋、印刷、電子、粘合劑、除污、植物油提取、制藥、清洗及家具制造等行業(yè)［1］。作業(yè)工人長(zhǎng)期低濃度接觸正己烷會(huì)導(dǎo)致中毒性神經(jīng)病變，輕者表現(xiàn)為頭痛、眩暈、肢體麻木、手腳無力等慢性中毒癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)癱瘓、昏迷、腫瘤，甚至死亡［2］。正己烷的生物轉(zhuǎn)化在肝臟，代謝產(chǎn)物主要是2，5-己醇和2，5-己二酮（2，5-HD），經(jīng)腎由尿液排出，尿中2，5-HD水平可作為接觸正己烷的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)［3］。2，5-HD會(huì)與賴氨酸中的ε-氨基進(jìn)一步反應(yīng)生成櫻紅色的吡咯加合物，這也是正己烷導(dǎo)致機(jī)體中毒的機(jī)制所在［4］。有研究［5］結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)大鼠染毒于不同劑量的正己烷后，表現(xiàn)出的神經(jīng)病變也有不同程度的差異，步態(tài)評(píng)分與血清和尿液中吡咯加合物水平存在明顯正相關(guān)，癱瘓時(shí)間與血清和尿液中吡咯加合物水平存在負(fù)相關(guān)，預(yù)示血清和尿液中的吡咯加合物可作為正己烷暴露的生物標(biāo)志物。本研究重點(diǎn)探討尿吡咯加合物作為生物指標(biāo)應(yīng)用于職業(yè)暴露人群的可行性，正己烷職業(yè)暴露人群功能指標(biāo)之間的相關(guān)性，以期能夠站在更高的角度將這些不同系統(tǒng)的功能指標(biāo)聯(lián)系起來，發(fā)現(xiàn)其中的規(guī)律，為正己烷神經(jīng)損傷篩選提供可能的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)，為正己烷神經(jīng)損傷診斷提供依據(jù)。

材料和方法

1 一般資料

選擇北京市某醫(yī)藥制造廠接觸正己烷作業(yè)的86名工人為正己烷職業(yè)接觸組，其中男性77人、女性9人，年齡24～42歲，平均30.7±4.3歲；工齡1～12年，平均工齡4.6±3.1年，對(duì)照組選同廠其他車間未接觸正己烷作業(yè)的工人61人，其中男性54人、女性7人，年齡22～46歲 平均31.0±6.6歲；工齡0.6～10年，平均工齡4.9±3.3年。兩組人群生活習(xí)慣、工作強(qiáng)度、吸煙飲酒等情況基本相同。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝0.403，P＝0.688）工齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝0.580，P＝0.563）。

入組標(biāo)準(zhǔn)：接觸組及對(duì)照組均無嚴(yán)重的肝腎疾病和其他器質(zhì)性疾病，半年內(nèi)未進(jìn)行過任何醫(yī)學(xué)診斷和治療；對(duì)照組人員從未從事過正己烷工作，未接觸過有毒有害化學(xué)物質(zhì)，女性為非月經(jīng)期。

2 儀器與方法

2.1 工作場(chǎng)所空氣中正己烷濃度檢測(cè) 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《工作場(chǎng)所空氣中有害物質(zhì)監(jiān)測(cè)的采樣規(guī)范》（GBZl59-2004）中規(guī)定對(duì)職業(yè)接觸組和對(duì)照組兩組工作場(chǎng)所進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)采樣，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《工作場(chǎng)所空氣有毒物質(zhì)測(cè)定第60部分：戊烷、己烷、庚烷、辛烷和壬烷》（GBZ/T300.60-2017），用溶劑解吸氣相色譜法對(duì)所有樣本進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 尿液中吡咯加合物檢測(cè) 選定的兩組人員在正常班后留取清潔中段尿5mL于預(yù)先準(zhǔn)備好的試管中，經(jīng)離心機(jī)1500r/min取上清尿液（相對(duì)離心力430g），按照酶標(biāo)儀比色法［6］測(cè)定尿液中吡咯加合物，每份樣品在MK-Ⅲ酶標(biāo)儀上重復(fù)檢測(cè)3次取吸光度平均值。

2.3 血液生化指標(biāo)檢測(cè) 選定的兩組人員于清晨空腹采集不加抗凝劑的靜脈血5mL，分離血清；美國(guó)貝克曼AU581全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、尿素（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LDH）、α羥丁酸（α-HBDH）、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、膽堿酯酶（CHE）、總膽汁酸（TBA）、鉀（K+）、堿性磷酸酶（ALP）的檢測(cè)。

2.4 全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析 兩組實(shí)驗(yàn)人員同時(shí)采集乙二胺四乙酸二鉀抗凝血2mL；用希森美康2000i全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比容（HCT）、血小板（PLT）、大血小板比例（P-LCR）、平均紅細(xì)胞容積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW-CV）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值（LYM）、單核細(xì)胞絕對(duì)值（MONO）、中性粒細(xì)胞絕對(duì)值（NEU）、嗜堿性粒細(xì)胞絕對(duì)值（BASO）、嗜酸性粒細(xì)胞絕對(duì)值（EOS）的檢測(cè)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS20.0軟件，正態(tài)分布的連續(xù)性數(shù)據(jù)用用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)分布的連續(xù)性數(shù)據(jù)用中位數(shù)（四分位數(shù)范圍）［M（P25～P75）］表示。用t檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)進(jìn)行均數(shù)比較、雙變量Pearson相關(guān)分析。用χ2檢驗(yàn)精確概率分析指標(biāo)陽性例數(shù)的組間差異。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 工作場(chǎng)所空氣中正己烷接觸濃度

接觸組和對(duì)照組各選定28例采樣樣本。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，兩組工作場(chǎng)所的正己烷濃度雖然均符合正己烷職業(yè)接觸限值標(biāo)準(zhǔn)（TWA ＜100 mg/m3，STEL＜180mg/m3）；但正己烷接觸組的濃度顯著高于對(duì)照組，經(jīng)非參數(shù)秩和檢驗(yàn)分析，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z＝-6.922，P＜0.05）。見表1。

表1 工作場(chǎng)所空氣中正己烷接觸濃度（mg/m3）

2 尿液中吡咯加合物檢測(cè)

采集兩組工人正常班后尿液，用酶標(biāo)儀比色法檢測(cè)尿液中吡咯加合物水平。結(jié)果顯示接觸組吡咯加合物水平均值高于正常對(duì)照組，經(jīng)非參數(shù)秩和檢驗(yàn)分析，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z＝-5.174，P＜0.05）。見表2。

表2 班后尿液中吡咯加合物檢測(cè)結(jié)果［nmol/mL，M（P25～P75）］

3 工作場(chǎng)所空氣中正己烷接觸濃度與尿液中吡咯加合物檢測(cè)關(guān)系

將空氣中正己烷濃度TWA的檢測(cè)結(jié)果從高到低進(jìn)行分組（分組依據(jù)按照低于檢測(cè)限、低、中、高濃度四組），與其對(duì)應(yīng)尿液中吡咯加合物水平均值進(jìn)行雙變量相關(guān)分析，其P＜0.05，相關(guān)系數(shù)r＝0.962（TWA），表明工作場(chǎng)所空氣中正己烷濃度與接觸者尿液中吡咯加合物水平有明顯正相關(guān)，見表3。

表3 工作場(chǎng)所空氣中正己烷濃度水平與接觸者尿液中吡咯加合物的相關(guān)性

4 血液生化指標(biāo)檢測(cè)

按照檢驗(yàn)前質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，采集兩組工人靜脈血，在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行血清生化指標(biāo)檢測(cè)。由表4可見，兩組ALT、AST、ALP、GGT、TP、ALB、GLB、TBIL、DBIL、IBIL、BUN、CRE、UA、CK、LDH、K+、CHE、α-HBDH、TBA水平均值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但接觸組的TBIL、IBIL、ALP水平均值都高于對(duì)照組；K+水平低于對(duì)照組，經(jīng)獨(dú)立樣本間均數(shù)t檢驗(yàn)，P＜0.05，表明上述生化指標(biāo)在兩組人群中有顯著性差異。

表4 血液中生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

5 外周全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析

從兩組工人的外周全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，接觸組MCHC、P-LCR、EOS、MONO，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中接觸組MCHC、MONO指標(biāo)低于對(duì)照組；P-LCR、EOS指標(biāo)高于對(duì)照組，見表5。

表5 兩組工人全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析結(jié)果

6 正己烷接觸組尿液中吡咯加合物水平與生化檢測(cè)指標(biāo)間的關(guān)系分析

將接觸組尿液中吡咯加合物水平與TBIL、IBIL、ALP、K+進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)分別為r＝0.577、P＜0.001（TBIL），r＝0.566、P＜0.001（IBIL），r＝0.431、P＝0.003（ALP），r＝-0.345、P＝0.001（K+）。對(duì)兩組人群中的TBIL、IBIL、ALP檢測(cè)結(jié)果超過實(shí)驗(yàn)室參考上限的例數(shù)和K+結(jié)果低于實(shí)驗(yàn)室參考下限的例數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后做χ2檢驗(yàn)精確概率法（fisher）分析，見表6。

表6 血液中生化指標(biāo)超過臨床參考值上限的數(shù)據(jù)分析表

7 正己烷接觸者尿液中吡咯加合物與全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析的關(guān)系

對(duì)尿液中吡咯加合物檢測(cè)結(jié)果與其全血細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行雙變量Pearson分析發(fā)現(xiàn)，接觸組工人尿液中吡咯加合物水平與MCHC、MONO、P-LCR、EOS有相關(guān)性，其中吡咯加合物與MONO、MCHC呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r＝-0.303、P＝0.005（MONO），r＝-0.433、P＝0.002（MCHC）；而與P-LCR、EOS呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別r＝0.380、P＜0.001（P-LCR），r＝0.517、P＝0.002（EOS）。

討 論

通過t檢驗(yàn)和雙變量關(guān)系分析，對(duì)接觸組和對(duì)照組工作場(chǎng)所中正己烷濃度和尿液中的吡咯加合物水平分析，結(jié)果顯示兩組間存在顯著性差異和相關(guān)性。通過血液生化指標(biāo)篩選，發(fā)現(xiàn)接觸者的大多數(shù)生化指標(biāo)與對(duì)照組無差異，但在TBIL、IBIL、ALP這三項(xiàng)指標(biāo)上，職業(yè)接觸組高于對(duì)照組，與尿液中吡咯加合物水平有相關(guān)關(guān)系，其中職業(yè)接觸組中TBIL、IBIL指標(biāo)超過實(shí)驗(yàn)室參考范圍上限的例數(shù)也明顯高于對(duì)照組，表明正己烷職業(yè)接觸者存在肝功能損傷的情況［7］，而TBIL、IBIL、ALP是監(jiān)測(cè)指標(biāo)中相對(duì)特異的指標(biāo)，需要重點(diǎn)關(guān)注。有文獻(xiàn)報(bào)道正己烷慢性接觸人群血清TBA水平會(huì)發(fā)生變化，ALT和TBIL水平變化不大［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正己烷慢性接觸者，可能因?yàn)槲談┝考按x因素的差異，TBA、ALT與對(duì)照組無明顯變化。本研究中K+水平在兩組之間有差異，與尿吡咯加合物之間相關(guān)關(guān)系不高，不能說明兩者有相關(guān)性，但是提示我們長(zhǎng)期接觸正己烷的工人和正己烷中毒患者可能會(huì)影響血清K+水平，有待進(jìn)一步探索。

通過對(duì)常見的全血細(xì)胞指標(biāo)進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)接觸組大多數(shù)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果（如WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、RDW、NEU、LYM、BASO）與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MCHC和MONO接觸組計(jì)數(shù)低于對(duì)照組；而P-LCR、EOS接觸組計(jì)數(shù)高于對(duì)照組；接觸組尿液中吡咯加合物水平與紅細(xì)胞參數(shù)指標(biāo)MCHC呈負(fù)相關(guān)；上述結(jié)果顯示在正己烷職業(yè)接觸者中血紅細(xì)胞內(nèi)平均血紅蛋白水平發(fā)生變化，而白細(xì)胞分類中占少數(shù)部分的EOS、MONO絕對(duì)數(shù)發(fā)生變化，提示正己烷接觸人群可能由于長(zhǎng)期慢性呼吸道和消化道刺激，導(dǎo)致呼吸道和消化道處于高敏感狀態(tài)，下一步應(yīng)結(jié)合人群職業(yè)接觸狀況和其他體征調(diào)查。

目前，國(guó)內(nèi)外仍將尿液中2，5-HD作為正己烷的生物標(biāo)志，但其測(cè)定受到尿樣酸化處理的影響，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確［9］，加上氣相色譜儀器昂貴，2，5-HD半衰期短，在脫離了正己烷環(huán)境7 d后，尿中2，5-HD水平近乎微量［10］。因此，2，5-HD僅適合作為近期接觸程度的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，并不能很好反映慢性正己烷的神經(jīng)毒性及體內(nèi)2，5-HD的累計(jì)劑量。本研究表明：吡咯加合物與各項(xiàng)生化代謝指標(biāo)和血液指標(biāo)存在一定相關(guān)性，能夠反映累積暴露水平，尿液中吡咯加合物可以作為正己烷職業(yè)接觸人群的生物標(biāo)志物，便于早期發(fā)現(xiàn)正己烷職業(yè)暴露人群的功能損傷，及時(shí)做好防護(hù)措施和健康監(jiān)護(hù)。