黃子忠 潘凌霄 鄭文博

【摘要】目的：探討單次照射后早期乳腺癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)和增殖能力的改變。方法：采用Intrabeam放療設(shè)備對MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行單次照射。實驗組照射劑量為2Gy至6Gy，對照組為0，放療后24h進(jìn)行CCK-8實驗；持續(xù)觀察細(xì)胞在4Gy照射后的形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果：照射后的細(xì)胞生長變慢，大部分出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變。中低劑量單次照射后24h細(xì)胞的增殖能力降低，照射劑量越大其抑制效應(yīng)越明顯。結(jié)論：Intrabeam單次中低劑量照射后早期，細(xì)胞增殖速度減慢且形態(tài)異?；?。

【關(guān)鍵詞】乳腺癌；MDA-MB-231；放療；形態(tài)學(xué)；增殖

【中圖分類號】R28

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】

1005-0019（2019）16-043-01

乳腺癌是影響全球女性健康的常見惡性腫瘤之一。美國癌癥協(xié)會預(yù)計2018年美國新增乳腺癌病例266萬，乳腺癌死亡病例4萬[1]。術(shù)中放療作為放療模式之一，近年來在乳腺癌治療中的應(yīng)用逐漸增多。其特點包括：術(shù)中單次照射；照射野??；照射劑量高；對照射靶區(qū)以外的組織影響小。本研究旨在初步探討人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞接受術(shù)中放療設(shè)備單次照射后早期的增殖能力和形態(tài)學(xué)改變。

1材料與方法

11材料和細(xì)胞培養(yǎng)

MDA-MB-231細(xì)胞株購自中國科學(xué)院上海生物學(xué)研究所。胎牛血清，胰蛋白酶，RPMI 1640培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)瓶（T25）購自賽默飛世爾科技公司。96孔細(xì)胞板購自康寧公司，Cell Counting Kit-8 （CCK-8）試劑盒購自英格恩公司（型號為EC008）。完全培養(yǎng)基由90% RPMI 1640培養(yǎng)基+10%胎牛血清配成。細(xì)胞在37℃，95%O2+5%CO2，飽和濕度條件下孵箱中培養(yǎng)。

12放療設(shè)備及細(xì)胞處理

使用廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院現(xiàn)有的術(shù)中放療設(shè)備（Intrabeam，型號PRS 500，卡爾蔡司公司，德國）并選用直徑為60mm的配套平板施源器。將細(xì)胞培養(yǎng)瓶平放在平板施源器表面進(jìn)行照射（50kV的X射線）。將距離施源器表面12mm處的照射劑量設(shè)定為靶區(qū)（即細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞部位）照射劑量，對應(yīng)的靶區(qū)照射劑量率為148Gy/h。

13細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

細(xì)胞計數(shù)后，每個細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入1000個細(xì)胞（培養(yǎng)基量為25ml）。待細(xì)胞貼壁后（4h）每瓶加入5ml完全培養(yǎng)基并立即給予Intrabeam照射（照射劑量分別為0Gy，4Gy）。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞并觀察其形態(tài)學(xué)變化。

14細(xì)胞增殖實驗

細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后更換培養(yǎng)基，并于12h后給予單次照射。對照組的照射劑量為0，實驗組分別為2Gy，4Gy，6Gy。每個劑量組重復(fù)3次。細(xì)胞照射后24h進(jìn)行CCK-8實驗。采用酶標(biāo)儀測定各孔在450nm波長處的光密度值。

15統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS190統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，通過單向方差分析（One-Way ANOVA），對Ρ<005者認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

圖1提示：對照組細(xì)胞成對數(shù)生長，生長速度快，細(xì)胞與細(xì)胞之間互相交聯(lián)緊密并呈集落樣生長；4Gy組細(xì)胞生長速度變慢，絕大部分出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核增大，細(xì)胞膜邊界不清，細(xì)胞群落呈分散狀生長。

3討論

放療是臨床上腫瘤局部治療的常用手段之一。腫瘤細(xì)胞在放療后會發(fā)生不同程度的凋亡，壞死，老化等一系列生物學(xué)改變[2-3]。Intrabeam是目前國際上常用的術(shù)中放療設(shè)備，其通過低能X射線作用于照射靶區(qū)，具有劑量衰減迅速的特點。本研究發(fā)現(xiàn)，MDA-MB-231細(xì)胞在接受Intrabeam單次照射（4Gy）后細(xì)胞生長速度變慢，細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞之間交聯(lián)的緊密度明顯降低。CCK-8實驗進(jìn)一步提示：單次照射（2Gy-6Gy）后24h，MDA-MB-231細(xì)胞已發(fā)生活性降低，增殖速度減慢的變化，且照射劑量越大其抑制效應(yīng)越明顯。綜上所述，Intrabeam單次中低劑量照射后的早期，細(xì)胞增殖速度減慢，細(xì)胞形態(tài)異常化。

參考文獻(xiàn)

[1]Siegel RL， Miller KD， Jemal A. Cancer statistics， 2018 CA Cancer J Clin. 2018；68（1）：7-30

[2]Li Q， Liu J， Meng X， et al. MicroRNA-454 may function as an oncogene via targeting AKT in triple negative breast cancer. J Biol Res （Thessalon）. 2017；24：10

[3]Croker AK， Rodriguez-Torres M， Xia Y， et al. Differential Functional Roles of ALDH1A1 and ALDH1A3 in Mediating Metastatic Behavior andTherapy Resistance of Human Breast Cancer Cells. Int J Mol Sci. 2017；18（10）：2039