趙志勇，蘇建民，程治強(qiáng)，宋詩(shī)偉

(河南省省直第一醫(yī)院外科，河南 鄭州 450000)

胃癌主要通過(guò)淋巴結(jié)進(jìn)行轉(zhuǎn)移，這也是影響患者預(yù)后的最關(guān)鍵的因素，現(xiàn)階段淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞相對(duì)特異性標(biāo)記物和有關(guān)淋巴管生成的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路已成為惡性腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要方向[1]。近年來(lái)，部分作用于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性生長(zhǎng)因子不斷被發(fā)現(xiàn)并為胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的研究提供了新的思路。

Sox2轉(zhuǎn)錄因子的蛋白同雞Sox2蛋白有95%的同源[2]，同鼠 Sox2蛋白有 98%的相似[3]，研究[4]已證實(shí)其與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移和維持腫瘤干細(xì)胞自我更新具有密切聯(lián)系并提示在人類胃黏膜上皮細(xì)胞的分化過(guò)程中具有重要作用。相關(guān)研究[5]也在肺癌、前列腺癌、腺癌、胃癌、及卵巢癌等腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了Sox2的異常表達(dá)。目前，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體是重要的淋巴管調(diào)節(jié)因子，其既可以調(diào)節(jié)成熟淋巴管的生理功能還可調(diào)節(jié)胚胎組織淋巴管生成，但目前淋巴管生理功能調(diào)節(jié)因子與胃癌轉(zhuǎn)移的作用研究資料相對(duì)缺乏。故此，本研究探討干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2、VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取 2016年 2月至 2017年 4月我院病理科保存的胃癌組織標(biāo)本52例，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理組織學(xué)確診；⑵患者臨床資料保存完整；⑶術(shù)前未行放療、化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他原發(fā)性惡性腫瘤者；⑵未分化癌或特殊類型胃癌。同時(shí)選取正常胃粘膜組織34例、慢性萎縮性胃炎組織40例、萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組織33例作為對(duì)照，各組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），見(jiàn)表 1。

表1 各組一般資料比較

1．2 實(shí)驗(yàn)方法 采用SP免疫組化法檢測(cè)Sox2和VEGF-C蛋白表達(dá)：脫蠟及水化；蒸餾水沖洗，5min PBS溶液洗滌；抗原修復(fù)；H2O2室溫孵育10min，3次PBS洗滌；滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃溫箱30min孵育，4℃孵育過(guò)夜；滴加二抗后37℃溫箱30min孵育，3次PBS洗滌；DAB顯色，蘇木素復(fù)染后樹(shù)膠封片顯微鏡觀察。已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，代替一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照充分顯色，終止反應(yīng)[6]。

1．3結(jié)果判斷 SOX2陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿及細(xì)胞膜，VEGF-C陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色顆粒狀，隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，對(duì)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分，染色強(qiáng)度：無(wú)色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例：＜5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為 2分，51%～75%為 3分，＞75%為4分。最終得分為染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例得分之積，≥5分為陽(yáng)性表達(dá)，≤4分為陰性表達(dá)[7]。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 19．0軟件，計(jì)量資料采用（x±s）表示，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組 Sox2、VEGF-C蛋白表達(dá)比較 胃癌組Sox2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常胃粘膜組和慢性萎縮性胃炎組（P＜0．05），而 VEGF-C 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常胃粘膜組和慢性萎縮性胃炎組（P＜0．05）；胃癌組和萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組Sox2和VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。 見(jiàn)表 2。

表2 各組Sox2、VEGF-C蛋白表達(dá)比較

2．2 Sox2蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系Sox2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與胃癌組織學(xué)類型、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān) （P＜0．05）， 與患者年齡、性別及浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)（P＞0．05），見(jiàn)表 3。

2．3 VEGF-C蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系 VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0．05），與患者年齡、性別、組織學(xué)類型、TNM 分期和分化程度無(wú)關(guān)（P＞0．05），見(jiàn)表4。

表3 Sox2蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系

表4 VEGF-C蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系

2．4 Sox2與VEGF-C蛋白表達(dá)相關(guān)性 胃癌組織Sox2蛋白表達(dá)與VEGF-C蛋白表達(dá)無(wú)相關(guān)性 （P＞0．05），見(jiàn)表 5。

表5 胃癌組織Sox2與VEGF-C蛋白表達(dá)相關(guān)性

3 討論

研究[8]發(fā)現(xiàn)胃癌的發(fā)展過(guò)程可從正常胃粘膜-慢性萎縮性胃炎-不典型增生-胃癌的依次進(jìn)展。若對(duì)不典型增生和慢性非萎縮性胃炎患者的病情及時(shí)干預(yù)、及時(shí)治療，便可有效避免疾病發(fā)展為成胃癌，進(jìn)而從源頭上提高預(yù)后效果。最新的研究[9]也對(duì)胃癌的分子機(jī)制和相關(guān)因子之間的聯(lián)系進(jìn)行了探討。

研究[10]證實(shí)腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程與胚胎干細(xì)胞關(guān)系密切，干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2(sex determining region Y-box2)屬于SOX家族，被稱為胃特異性轉(zhuǎn)錄因子，具有調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的作用而Sox2還可表達(dá)于人類消化道并存在于胃底和幽門粘膜等胃上皮細(xì)胞中，但結(jié)腸中不表達(dá)。此外，Sox2對(duì)胃粘膜上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物MUC5AC的表達(dá)和胃蛋白酶具有重要調(diào)節(jié)作用。因?yàn)镾ox2在維持正常胃表型和功能及胃的胚胎發(fā)育、分化過(guò)程中作用顯著，故而，研究者推測(cè)其與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系[11]。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一種特異性促進(jìn)細(xì)胞增殖的有絲分裂源，亦稱血管調(diào)理素或血管通透因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、分裂和誘導(dǎo)血管生成，并可增加微靜脈和小靜脈的通透性。VEGF-C被稱為淋巴管生成因子，是VEGF家族新發(fā)現(xiàn)成員，可與VEGFR-2或VEGFR-3特異性受體結(jié)合分別發(fā)揮促進(jìn)血管及淋巴管的生成的作用；VEGF-C可通過(guò)旁分泌作用于VEGFR-3促進(jìn)自身的分泌并介導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和淋巴管的增生，調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分化，故而VEGF-C常被認(rèn)為是重要的淋巴管生成因子[12]。但目前淋巴管生理功能調(diào)節(jié)因子與胃癌轉(zhuǎn)移的作用研究資料相對(duì)缺乏。故此，本研究探討干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2、VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義。

本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組Sox2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為57．69%，明顯低于正常胃粘膜組94．12%和慢性萎縮性胃炎組82．50%，而VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為75．00%，明顯高于正常胃粘膜組20．59%和慢性萎縮性胃炎組45．00%；胃癌組和萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組Sox2和VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。上述結(jié)果提示Sox2和VEGF-C可維持胃粘膜上皮細(xì)胞的正常表型和功能，其異常表達(dá)可能與胃癌的發(fā)生和發(fā)展具有密切聯(lián)系。Sox2是胃癌細(xì)胞保留胃腺體細(xì)胞表型的重要條件，可能屬于胃癌發(fā)生過(guò)程中的一類抑癌基因；VEGF-3與其特異性受體結(jié)合后可激活酪氨酸激酶信號(hào)系統(tǒng)導(dǎo)致淋巴管擴(kuò)張和增生[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)粘液腺癌、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Sox2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為 25．00%、28．57%、30．77%和 48．65%，明顯低于非粘液腺癌、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0．05）；侵及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為88．00%和89．19%，明顯高于未侵及漿膜、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0．05）。 上述結(jié)果說(shuō)明 Sox2 和 VEGF-C 蛋白與胃癌的臨床病理特征有一定關(guān)系，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。相關(guān)文獻(xiàn)[14]發(fā)現(xiàn)胃癌組織中Sox2甲基化可下調(diào)Sox2的表達(dá)，使胃癌細(xì)胞無(wú)法正常凋亡而無(wú)限增殖，認(rèn)為Sox2蛋白表達(dá)下調(diào)與胃癌的早期發(fā)生、腫瘤分化、胃癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力增加密切相關(guān)。VEGF-C可增加淋巴結(jié)通透性和淋巴管外組織間壓力進(jìn)而牽拉內(nèi)皮細(xì)胞增加淋巴管腔致使胃癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)疏松細(xì)胞而進(jìn)而轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織Sox2蛋白表達(dá)與VEGF-C 蛋白表達(dá)無(wú)相關(guān)性（P＞0．05）。 這說(shuō)明兩種蛋白為影響胃癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，胃癌組織Sox2蛋白呈低表達(dá)，而VEGF-C蛋白呈高表達(dá)，與患者臨床病理特征有一定關(guān)系，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。