周露露，陳燕，徐衛(wèi)益

(1．浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江省臨床體外診斷技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州310003；2．紹興文理學(xué)院，浙江紹興312000)

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞間的過(guò)渡細(xì)胞，是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)，對(duì)貧血的診斷、鑒別診斷有一定臨床意義，并且可作為早期評(píng)估骨髓造血功能和貧血性疾病治療效果的指標(biāo)[1，2]。隨著自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，傳統(tǒng)手工鏡檢因繁瑣、耗時(shí)久、易受染色溫度、時(shí)間、涂片厚薄、主觀判斷等因素影響，已逐漸被儀器法所替代[3]。有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)參考區(qū)間建立，但不同血液分析儀檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果存在一定的差異[4]，因此需要實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間；另外，文獻(xiàn)報(bào)道不同品牌的儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞與手工法比較不盡相同，有文獻(xiàn)表明Mindray BC6900檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果與手工法有更好的相關(guān)性[5]，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本 儀器法參考區(qū)間建立的標(biāo)本主要選取本院健康體檢者390例的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝的靜脈血 1～2ml，其中男性 180 例，中位年齡49歲，女性210例，中位年齡46歲。實(shí)驗(yàn)對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)為內(nèi)科、外科、心電圖、肺部CT平掃、B超檢查等體格檢查無(wú)明顯異常，血常規(guī)檢測(cè)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)及血紅蛋白指標(biāo)正常。方法學(xué)比較留取標(biāo)本為73例臨床患者的EDTA-K2抗凝靜脈血1～2ml，其中男性40例，中位年齡46歲，女性33例，中位年齡49歲。

1．2 儀器與試劑

1．2．1 儀器法使用國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)血液分析儀Mindray BC6900及其原裝配套試劑，每日運(yùn)行3水平的室內(nèi)質(zhì)量控制；儀器進(jìn)行定期校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證。

1．2．2 手工鏡檢法采用新亞甲藍(lán)活體染色液，OLYMPUS CX31電子顯微鏡，采用Miller窺盤(pán)法進(jìn)行手工法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1．3 方法 儀器法采集靜脈血1～2ml于EDTA-K2抗凝管中混勻，用Mindray BC6900全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)RET相關(guān)參數(shù)，參考區(qū)間的建立依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)C28-A3[6]文件推薦方法；手工法用新亞甲藍(lán)活體染色液進(jìn)行全血活體染色，依據(jù)SOP文件操作指南，染色25～30min，涂片、干燥、鏡檢。手工計(jì)數(shù)RET的百分比與血液分析儀測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較分析。所有檢測(cè)在標(biāo)本采集后2h內(nèi)完成。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)為偏正態(tài)分布，男、女組間采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，用百分位數(shù)(P2．5，P97．5)來(lái)確定網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間；方法學(xué)比較采用邏輯回歸分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2．1 儀器法參考區(qū)間的建立 390例健康體檢者M(jìn)indray BC6900全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及其他相關(guān)參數(shù)。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯示，RET相關(guān)參數(shù)呈偏態(tài)分布，采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果如表1所示。RET%、IRF%、LFR%、MFR%檢測(cè)結(jié)果男女間存在顯著差異，而RET#、HFR%檢測(cè)結(jié)果男女無(wú)差異。

表1 不同性別RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間及比較

2．2 儀器Mindray BC6900全自動(dòng)血液分析儀與手工鏡檢法的方法學(xué)比較 將儀器法檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)（RET%）與手工染色鏡檢法的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果如表2所示。相關(guān)性散點(diǎn)圖見(jiàn)圖1。手工染色鏡檢法 （X軸）與儀器Mindray BC6900（Y軸）檢測(cè)結(jié)果通過(guò)線性回歸分析，得出回歸方程為 Y=0．911X+0．540。 兩種方法比較，相關(guān)系數(shù) r=0．965，相關(guān)性良好。

3 討論

網(wǎng)織紅細(xì)胞是介于晚幼紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之間的未完全成熟的紅細(xì)胞，可反映骨髓紅系的增生情況，對(duì)疾病的診斷、鑒別診斷、預(yù)后及療效觀察有著重要的輔助作用。隨著血細(xì)胞分析儀自動(dòng)化分析技術(shù)的不斷發(fā)展，采用熒光染色和半導(dǎo)體激光技術(shù)測(cè)定原理來(lái)檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞已在臨床實(shí)驗(yàn)室普遍開(kāi)展，其最大優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)效率高、重復(fù)性好、提供的參數(shù)多，解決了臨床快速、準(zhǔn)確、多參數(shù)獲取網(wǎng)織紅細(xì)胞檢驗(yàn)報(bào)告的需求。截止目前臨床使用的成人RET各參數(shù)參考區(qū)間并不完善，臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)教科書(shū)（第5版）[7]、臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（第4版）[8]還是采用手工法參考區(qū)間。李小龍等[9]建立了溫州地區(qū)成人網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間，但和金碩等[10]報(bào)道的結(jié)果存在較大差異，兩者使用的檢測(cè)儀器均為Sysmex XE-2100，主要表現(xiàn)在男女RET%和RET#的低限前者異常低，與臨床不太符合，可能與選取的實(shí)驗(yàn)對(duì)象不同有關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)得出的Mindray BC6900網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)參考區(qū)間與金碩等報(bào)道的較為一致。因此，不同品牌、不同型號(hào)的血液分析儀檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)的參考區(qū)間結(jié)果不一定存在較大差異，需要通過(guò)各實(shí)驗(yàn)室加以驗(yàn)證，當(dāng)存在差異時(shí)，尤其是實(shí)驗(yàn)室有不同品牌儀器時(shí)應(yīng)進(jìn)行儀器間比對(duì)或建立各自的參考區(qū)間，以方便臨床正確判斷。

表2 儀器法與手工法檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果比較

圖1 儀器法與手工法檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果比較散點(diǎn)圖

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，網(wǎng)織紅細(xì)胞的各項(xiàng)參數(shù) （除RET#）RET%、IRF%、LFR%、MFR%及 HFR%指標(biāo)，男性參考區(qū)間均稍大于女性，這與男女之間不同生理因素有著重要關(guān)系，與男性紅細(xì)胞數(shù)高于女性情況一致。同時(shí)在收集健康體檢者血常規(guī)標(biāo)本時(shí)，標(biāo)本量較多，無(wú)法完全控制變量，導(dǎo)致在收集標(biāo)本時(shí)很難從健康體檢指標(biāo)中判斷出采血近期是否有體育鍛煉、是否服用補(bǔ)品以及女性生理期情況等影響因素。這些影響因素對(duì)于網(wǎng)織紅細(xì)胞各參數(shù)參考區(qū)間的建立有一定的影響。

方法學(xué)比較儀器法與手工法計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)據(jù)分析，73例樣本中，儀器法結(jié)果均值高于手工法，標(biāo)準(zhǔn)差低于手工法，說(shuō)明儀器法所檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞的結(jié)果高于手工法的檢測(cè)結(jié)果且有很好的重復(fù)性，原因主要為儀器法檢測(cè)對(duì)點(diǎn)粒型網(wǎng)織紅細(xì)胞敏感性?xún)?yōu)于手工法。兩種方法相關(guān)性良好，P＜0．05，驗(yàn)證了相關(guān)文獻(xiàn)關(guān)于比較不同型號(hào)全自動(dòng)血液分析儀報(bào)道表明Mindray全自動(dòng)血液分析儀與手工法相關(guān)性較好的分析[11，12]。

本實(shí)驗(yàn)關(guān)于參考區(qū)間的建立，將性別作為一個(gè)分組指標(biāo)，從而建立男、女不同網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間。但由于標(biāo)本數(shù)量的關(guān)系，本次實(shí)驗(yàn)未進(jìn)行各年齡段的檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，參考金碩等文獻(xiàn)報(bào)道RET參數(shù)RET%和RET#各年齡組之間無(wú)明顯差異，因此本次實(shí)驗(yàn)沒(méi)有將年齡作為分組指標(biāo)。同時(shí)，儀器法檢測(cè)都存在一定的影響因素，例如，嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞、瘧原蟲(chóng)感染紅細(xì)胞、H-J小體、Pappenheimer bodies(帕彭海默氏小體)等存在情況下，儀器法檢測(cè)出的結(jié)果可能偏高，需要用手工法加以驗(yàn)證。

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，Mindray BC6900儀器網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)性能較好，與手工法具有良好的相關(guān)性，檢測(cè)所使用的樣本量很少，準(zhǔn)確度高、檢測(cè)效率高，能夠廣泛運(yùn)用于臨床。