魏靜，沈才娟

(揚州市醫(yī)學檢驗中心，江蘇 揚州 225000)

本實驗室于2010年購買了美國貝克曼DXC800型全自動生化分析儀，隨著體檢業(yè)務(wù)的不斷增加，到了2013年又購進日本日立7600-020型全自動生化分析儀。雖然兩臺生化儀所用試劑基本相同，但是同一標本在不同儀器上測定其結(jié)果可能存在一定的差異，ISO15189要求當同樣的檢驗應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點進行，或以上各項均不同時，應(yīng)有確切機制以驗證在整個臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗結(jié)果的可比性[1]。本文按照美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)頒布的EP9-A2文件[2]的要求，對兩臺生化檢測系統(tǒng)14個項目進行比對分析和偏倚評估，以探討兩種生化檢測系統(tǒng)對同一標本的測定結(jié)果是否有顯著差異，其差異能否達到臨床要求。

1 資料和方法

1．1 一般資料 隨機選取本單位體檢中心患者40例，使用黃色促凝管采集血液，濃度范圍涵蓋整個方法的可報告范圍。

1．2 儀器與試劑 貝克曼DXC800全自動生化分析儀為參比系統(tǒng)，日立7600-020全自動生化分析儀為試驗系統(tǒng)。兩種生化檢測系統(tǒng)除了HDL-C和LDL-C使用的是寧波普瑞柏生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒，其余項目均使用中山標佳生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒。貝克曼DXC800全自動生化分析儀參加衛(wèi)生部、江蘇省室間質(zhì)評成績優(yōu)良，性能穩(wěn)定，故將其作為參比系統(tǒng)，進行系統(tǒng)間的比對分析。

1．3 校準品與質(zhì)控品 日立7600-020全自動生化分析儀使用校準品是英國RANDOX復(fù)合校準液，批號為CAL2351；貝克曼DXC800全自動生化分析除了 GLU、CREA、BUN、TP、ALB 使用的校準品是Beckman原廠離子定標液，批號為471288、471291和471294，其它項目均使用英國RANDOX復(fù)合校準液，批號為CAL2351；兩臺儀器使用的質(zhì)控品都是Beckman多項復(fù)合質(zhì)控品（低、中和高值三個水平），批號為 M607701、M607702、M607703。

1．4 方法

1．4．1 比對項目 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（CHOL）、肌酐（CREA）、葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）

1．4．2 比對試驗 按照實驗室制定的SOP文件對兩臺儀器進行每日、每周、每月的維護保養(yǎng)。根據(jù)廠家要求定期進行校準，并堅持每天做室內(nèi)質(zhì)控，保證所有項目在控。按照EP9-A2文件的要求，每天隨機選取8例體檢患者的新鮮血清，確保無溶血，無乳糜血。在兩臺儀器上進行雙份測定，第一次先按1→8順序檢測，第二次按8→1反序檢測，連續(xù)測量5d，最終取平均值作為測定結(jié)果。

1．5 統(tǒng)計學處理

1．5．1 離群值檢驗 根據(jù)EP9-A2文件的要求，對兩個檢測系統(tǒng)分別進行儀器內(nèi)離群值檢驗和儀器間離群值檢驗，繪制相應(yīng)散點圖查找離群點。若只有1個離群點，可以刪除，繼續(xù)分析。若有2個或2個以上離群點，則需查找原因，重新測定樣品替換離群數(shù)據(jù)，或重新分析所有數(shù)據(jù)[3]。

1．5．2 使用 Microsoft Excel 2007 與 SPSS13．0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。先將檢測數(shù)據(jù)進行F檢驗方差分析，再將參比系統(tǒng)的檢測結(jié)果作為X軸，試驗系統(tǒng)的檢測結(jié)果作為Y軸，計算出相關(guān)系數(shù)(r)和線性回歸方程Y=bX+a。按照EP9-A2文件規(guī)定，若 r≥0．975（即 r2＞0．95）時即可將各個比對項目給定的醫(yī)學決定水平濃度（Xc）代入回歸方程計算出Yc，求出系統(tǒng)誤差(SE=｜Yc-Xc｜)和相對偏差(SE%=｜Yc-Xc｜/Xc*100%)，以美國臨床實驗室修正法規(guī)CLIA’88規(guī)定的相對偏差SE%小于CLIA’88規(guī)定的室間質(zhì)量評價標準(Ea)的1/2為臨床可接受誤差[4]，即兩種生化檢測系統(tǒng)的測定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié)果

2．1 離群值檢驗結(jié)果 對40例樣本進行方法內(nèi)、方法間的離群值檢查，未發(fā)現(xiàn)有離群值，所有數(shù)據(jù)均可用于實驗統(tǒng)計處理。

2．2 相關(guān)性分析結(jié)果 r2≥0．95(即 r≥0．975)表明 X取值范圍合適，應(yīng)用回歸方程計算得到斜率和截距較為可靠；F檢驗方差分析P＞0．05表示差異無統(tǒng)計學意義，兩種生化檢測系統(tǒng)對同一標本的測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 兩種生化檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果相關(guān)性分析

2．3 相對偏倚評估 將各個比對項目3個醫(yī)學決定水平濃度（Xc）代入回歸方程計算出Yc，求出相對偏差 （SE%），再與1/2Ea比較判斷臨床可接受性，見表2。除了尿素氮的低濃度相對偏倚大于1/2美國臨床實驗室改進修正法案（CLIA’88）最大允許誤差（Ea），其余的均小于1/2 CLIA’88最大允許誤差，可被臨床接受。

表2 兩種生化檢測系統(tǒng)比對項目的相對偏倚評估

3 討論

實驗室認可準則ISO/15189（醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力的專用要求）對檢驗結(jié)果的溯源性和可比性提出了明確要求，強調(diào)方法學比對試驗是實現(xiàn)準確度溯源和病人標本檢驗結(jié)果可比性的重要途徑[5]。完成一個項目檢測涉及的儀器、試劑、校準品、操作程序以及操作人員的組合被稱為檢測系統(tǒng)。國際上推薦使用封閉的或配套的生化檢測系統(tǒng)來保證檢驗結(jié)果的溯源性和準確性，而我國的現(xiàn)狀是大多數(shù)實驗室使用儀器、試劑和校準品均不配套的開放系統(tǒng)[6]。一般來說，開放系統(tǒng)測定結(jié)果的溯源性一般可以通過廠家提供的試劑和校準品的溯源性報告得到驗證[7]，本實驗室使用的兩種生化檢測系統(tǒng)就屬于開放系統(tǒng)，其中中山標佳和寧波普瑞柏兩個試劑廠家都有詳細的溯源性分析報告，朗道校準品的溯源性也是有據(jù)可循的，并且試劑盒的方法學性能驗證能滿足臨床的要求，這與沙瑤等報道的一致[8]。不同的生化檢測系統(tǒng)，特別是開放系統(tǒng)，對同一項目的檢測結(jié)果一般會造成不同程度的差異，這個不少國內(nèi)學者都有研究報道過[9-13]。那么如何保證檢驗結(jié)果的的準確性呢？由此筆者參考CLSI頒布的EP9-A2文件，以貝克曼DXC800全自動生化分析儀為參比系統(tǒng)，日立7600-020全自動生化分析儀為試驗系統(tǒng)，對兩者進行14項指標的比對分析和偏倚評估，來探討兩臺生化檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的一致性、準確性和相關(guān)性。

本研究顯示，兩臺儀器所測的14個項目相關(guān)系數(shù) r2＞0．95（即 r＞0．975），P＞0．05，表明應(yīng)用回歸方程計算得到斜率和截距較為可靠，樣本數(shù)據(jù)取值范圍合理，兩種生化檢測系統(tǒng)的相關(guān)性良好，便于進一步分析兩者的系統(tǒng)誤差。系統(tǒng)誤差可分為恒定系統(tǒng)誤差和比例系統(tǒng)誤差，恒定系統(tǒng)誤差和比例體統(tǒng)誤差分別可以通過線性回歸方程Y=bX+a中的斜率b和截距a反映出來，當b越接近1，a越接近0，說明2種方法結(jié)果之間存在的系統(tǒng)誤差越小。從表2中看出，CREA和UA的a相對比較大，說明干擾物的影響較大，存在一定的恒定系統(tǒng)誤差，可能是由于兩臺儀器使用年限不同，比色杯清洗能力不同而導(dǎo)致本底不同造成的；除LDL外，其余指標b均大于0．9437，說明當LDL濃度越高，其比例系統(tǒng)誤差會越明顯，但在醫(yī)學決定水平濃度的范圍內(nèi)這兩個誤差并不影響最終臨床可接受性。由表3可以看出，除了尿素氮的低濃度相對偏倚大于1/2美國臨床實驗室改進修正法案（CLIA’88）最大允許誤差（Ea），不被臨床接受，其余檢測結(jié)果均具有可比性。對于兩臺生化檢測系統(tǒng)的尿素氮在低濃度水平檢測不一致，其原因可能是檢測方法不同造成的。貝克曼DXC800采用電極法，而日立7600-020則采用酶偶聯(lián)速率法，前者是通過電導(dǎo)率改變來檢測尿素氮的含量，而后者是基于吸光度的變化與尿素氮含量成正比，若及時給予維護和校正則可以避免，這與呂慧、賴戰(zhàn)峰等報道的一致[14]。

一個實驗室一般只能有一臺比較先進的檢測系統(tǒng)參加室間質(zhì)評，如果不進行各實驗室儀器之間的自身比對，就會使檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，從而給臨床造成了誤解[15]。保證不同檢測系統(tǒng)產(chǎn)生的實驗結(jié)果的可比性是實驗室質(zhì)量管理中的重要環(huán)節(jié)，生化檢測對于一個實驗室來說是至關(guān)重要的，定期利用新鮮血清對不同生化檢測系統(tǒng)進行比對分析，既可以反映結(jié)果的一致性，還可以了解誤差的來源，及時進行校準和保養(yǎng)，從而確保檢測結(jié)果的可靠性。