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        中性粒細(xì)胞CD64聯(lián)合血清MCP-1、IL-8、IL-10水平檢測對新生兒敗血癥診斷效能的影響評價(jià)

        2019-07-31 08:07:04王洪建劉小慧劉燕飛李智全武欣
        關(guān)鍵詞:敗血癥中性粒細(xì)胞

        王洪建,劉小慧,劉燕飛,李智全,武欣

        (濮陽市人民醫(yī)院血液病研究所,河南 濮陽 457000)

        敗血癥是由條件致病菌或致病菌侵入血液,在血循環(huán)中產(chǎn)生毒素并不斷繁殖生長而引發(fā)的急性全身感染,為導(dǎo)致新生兒死亡的第三大病因[1,2]。及早診斷并給予針對性治療,可降低敗血癥新生兒病死率;但新生兒敗血癥并無典型性臨床表現(xiàn),診斷難度大,當(dāng)其常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果及血培養(yǎng)結(jié)果為陰性時(shí)需結(jié)合多項(xiàng)臨床指標(biāo)進(jìn)行評估,以提高診斷準(zhǔn)確率[3]。中性粒細(xì)胞CD64為反映敗血癥患兒體內(nèi)炎癥狀態(tài)及感染狀態(tài)的敏感指標(biāo),有學(xué)者指出IL-8等炎性細(xì)胞因子水平與機(jī)體病原菌感染關(guān)系密切,為臨床評估膿毒癥敏感指標(biāo);此外趨化因子MCP-1可參與調(diào)控白細(xì)胞的遷移,參與炎癥反應(yīng),進(jìn)而參與機(jī)體感染過程,與感染性疾病的發(fā)生關(guān)系緊密[4-6]?;诖吮狙芯繉ξ以?1例敗血癥新生兒及30例非敗血癥感染新生兒、30例健康新生兒進(jìn)行中性粒細(xì)胞CD64及血清IL-8、IL-10、MCP-1水平檢測,探討各指標(biāo)聯(lián)合檢測對新生兒敗血癥診斷效能的影響。結(jié)果如下。

        1 對象與方法

        1.1 研究對象 選取我院2016年5月-2018年4月收治的31例敗血癥新生兒為觀察組,女11例,男 20 例;胎齡 38~41 周,平均(39.40±1.20)周;出生體質(zhì)量 2500~4000g,平均(3290.50±431.50)g;5 min Apgar評分 8~10 分,平均(8.90±0.50)分。 另取同期收治的30例非敗血癥感染患兒作為對照組,女 10 例,男 20 例;胎齡 38~41 周,平均(39.50±1.30)周;出生體質(zhì)量 2510~4000g,平均(3294.60±430.30)g;5min Apgar評分 8~10 分, 平均 (8.80±0.60)分。并取30例健康新生兒作為健康對照組,女 11 例,男 19 例;胎齡 37~41 周,平均(39.70±1.15)周;出生體質(zhì)量 2511~4010g,平均(3292.40±429.40)g;5min Apgar評分 8~10 分, 平均 (8.70±0.60)分。對比各組基線資料,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)。

        1.2 敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)《新生兒敗血癥診療方案》制定敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn):⑴無菌體腔培養(yǎng)出致病菌或血培養(yǎng)培養(yǎng)出致病菌;⑵血培養(yǎng)標(biāo)本培養(yǎng)出條件致病菌,且與另份血或?qū)Ч芏嘶驘o菌體腔內(nèi)培養(yǎng)出同種細(xì)菌。符合以上任一條且具備以下任一表現(xiàn):⑴血標(biāo)本病原菌抗原或DNA檢測陽性;⑵非特異性檢測異常2條或2條以上[7]。

        1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴觀察組符合以上敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn);⑵采血時(shí)間均為出生后28h內(nèi);⑶新生兒家屬知曉本研究并自愿簽署知情同意書。

        1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴觀察組出現(xiàn)敗血癥嚴(yán)重并發(fā)癥者;⑵對照組胎膜早破、羊水污染或母體孕期罹患感染性疾患;⑶染色體異常新生兒;⑷先天畸形或伴有遺傳代謝病或出現(xiàn)窒息患兒;⑸出現(xiàn)HIV感染或其他免疫缺陷患兒;⑹入院前采用抗生素治療者;⑺心、肝、腎等重要臟器功能不全者。

        1.5 方法 未行任何治療前取 6ml靜脈血,以1500r/min離心10~15min,分離上清液保存于-80℃冰箱中待檢,采用日本日立全自動生化分析儀(7180型),以酶聯(lián)免疫吸附法測定血清MCP-1、IL-8、IL-10水平,血清MCP-1測定試劑盒購自上海盈公酶聯(lián)檢測試劑有限公司,血清IL-8及IL-10試劑盒購自上海心語生物科技有限公司,所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。采用NAVIOS三激光十色流式細(xì)胞儀 (美國Beckman Coulter公司)及配套專用試劑盒測定新生兒全血CD64:將異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD64鼠抗人單克隆抗體CD64分別加入每支流式專用試管中(10μl/支),再加入60μl全血,混勻避光15min,上機(jī)檢測;檢測時(shí)依據(jù)側(cè)向角、前向角散射光信號圖顯示的形態(tài)學(xué)特征確定中性粒細(xì)胞群,測定CD64平均熒光強(qiáng)度(MFI);每次上機(jī)檢測均采用600mV電壓。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過 SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以(x±s)表示計(jì)量資料,t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,多重比較采用LSD-t檢驗(yàn),n(%)表示計(jì)數(shù)資料,χ2檢驗(yàn),P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 中性粒細(xì)胞 CD64 及血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平 觀察組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平高于對照組及健康對照組,且對照組高于健康對照組(P<0.05)。 見表 1。

        2.2 診斷效能 中性粒細(xì)胞CD64聯(lián)合血清MCP-1、IL-8、IL-10水平對新生兒敗血癥診斷敏感度高于各指標(biāo)單一診斷,漏診率低于各指標(biāo)單一診斷(P<0.05)。 見表 2、表 3。

        3 討論

        血培養(yǎng)、桿狀核粒細(xì)胞/中性粒細(xì)胞、C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及降鈣素原等為目前臨床診斷新生兒敗血癥的常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。其中血培養(yǎng)仍為目前臨床診斷新生兒感染性疾患的 “金標(biāo)準(zhǔn)”,具有較高檢出率,但其培養(yǎng)時(shí)間長,早期診斷敏感度低,導(dǎo)致部分患兒因無法及時(shí)確診而延誤治療時(shí)機(jī);降鈣素原為診斷新生兒敗血癥的特異性指標(biāo),但患兒出生3d內(nèi)存在生理高峰,需建立日齡依賴性參考值,存在一定局限性;而C反應(yīng)蛋白雖與機(jī)體感染密切相關(guān),但其早期敏感度低,需連續(xù)多次檢測方可獲取最佳診斷數(shù)據(jù),導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受限[8,9]。因此臨床亟待尋找可靠的標(biāo)志物以準(zhǔn)確評估新生兒是否患有敗血癥。

        表1 對比各組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

        表1 對比各組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

        注:與健康對照組相比,aP<0.05;與對照組相比,bP<0.05。

        CD64(MFI) IL-8(pg/ml) IL-10(ng/L) MCP-1(ng/L)66.70±23.80ab 40.30±13.77a 25.10±4.90 51.411 0.000 187.70±26.70ab 85.40±25.42a 36.10±21.60 300.025 0.000 72.20±22.80ab 19.10±4.10a 8.65±2.01 193.302 0.000 62.50±21.81ab 48.20±20.80a 38.40±20.60 10.094 0.000組別 例數(shù)觀察組對照組健康對照組FP 31 30 30

        表2 診斷四格表[n(%)]

        表3 對比不同指標(biāo)診斷效能[n(%)]

        有學(xué)者指出中性粒細(xì)胞CD64為臨床診斷小腸結(jié)腸炎及晚發(fā)性膿毒癥重要的生物標(biāo)志物,可在感染發(fā)生4~6h后呈高表達(dá)[10]。此外國外學(xué)者Lam HS等[11]指出CD64對敗血癥新生兒的診斷敏感度高達(dá)89%,特異度更是高至98%。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組CD64高于對照組及健康對照組,且對照組高于健康對照組(P<0.05),可見中性粒細(xì)胞 CD64可作為臨床診斷評估新生兒是否發(fā)生敗血癥的有效指標(biāo);但本研究發(fā)現(xiàn)CD64對新生兒敗血癥敏感度為70.97%,這可能與新生兒敗血癥的發(fā)生不僅是感染導(dǎo)致的免疫防御反應(yīng),且是和能量、代謝、免疫相結(jié)合的病、生理過程,而發(fā)病早期細(xì)胞因子風(fēng)暴消耗能量大,致使后期能量供應(yīng)不足有關(guān);因此僅測定CD64存在一定的誤診、漏診率。

        MCP-1為調(diào)節(jié)單核巨噬細(xì)胞浸潤、遷移的重要趨化因子,可參與多種疾病的細(xì)胞凋亡,學(xué)者嚴(yán)爭等[12]研究發(fā)現(xiàn)MCP-1在敗血癥新生兒中呈高表達(dá)狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清MCP-1水平高于對照組及健康對照組,對照組高于健康對照組(P<0.05),說明MCP-1可作為臨床診斷新生兒敗血癥的指標(biāo)之一;但多種疾病均可引起血清MCP-1水平升高,且本研究發(fā)現(xiàn)其應(yīng)用于新生兒敗血癥診斷中,診斷敏感度僅為67.74%,因此臨床診斷時(shí)需結(jié)合其他指標(biāo)以提高診斷準(zhǔn)確率。IL-8是一種炎性細(xì)胞因子,可通過結(jié)合受體CXCR2及受體CXCR1對中性粒細(xì)胞產(chǎn)生趨化作用,進(jìn)而調(diào)控炎癥反應(yīng),當(dāng)機(jī)體被植物血凝素、脂多糖等刺激時(shí),血清中其水平會迅速升高,與感染性疾病的發(fā)生存在緊密聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清IL-8水平高于對照組及健康對照組,且對照組高于健康對照組(P<0.05),說明 IL-8 可作為臨床診斷新生兒敗血癥的輔助血清學(xué)指標(biāo)。此外抗炎因子IL-10在血循環(huán)中的表達(dá)與病原菌感染存在緊密聯(lián)系,當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)感染時(shí),會大量分泌IL-10,致使其血清水平升高,本研究發(fā)現(xiàn)其診斷新生兒敗血癥敏感度雖只有 64.52%,但特異度高達(dá) 91.67%,因此可作為區(qū)分新生兒是否發(fā)生敗血癥的特異性指標(biāo)。與中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8聯(lián)合檢測,可提高診斷效能,減少漏診率。本研究發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞 CD64與血清 MCP-1、IL-8、IL-10聯(lián)合診斷新生兒敗血癥,診斷靈敏度為96.77%,高于各指標(biāo)單一診斷,漏診率低于各指標(biāo)單一檢測,說明中性粒細(xì)胞 CD64聯(lián)合血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平檢測應(yīng)用于新生兒敗血癥診斷中,診斷效能高,可作為臨床診治疾病的依據(jù)。

        綜上,中性粒細(xì)胞CD64聯(lián)合血清IL-10、IL-8、MCP-1水平檢測可提高新生兒敗血癥診斷靈敏度,降低漏診率,診斷效能高,可為臨床診治疾病提供參考。

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