王洪建，劉小慧，劉燕飛，李智全，武欣

(濮陽(yáng)市人民醫(yī)院血液病研究所，河南 濮陽(yáng) 457000)

敗血癥是由條件致病菌或致病菌侵入血液，在血循環(huán)中產(chǎn)生毒素并不斷繁殖生長(zhǎng)而引發(fā)的急性全身感染，為導(dǎo)致新生兒死亡的第三大病因[1，2]。及早診斷并給予針對(duì)性治療，可降低敗血癥新生兒病死率；但新生兒敗血癥并無(wú)典型性臨床表現(xiàn)，診斷難度大，當(dāng)其常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果及血培養(yǎng)結(jié)果為陰性時(shí)需結(jié)合多項(xiàng)臨床指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，以提高診斷準(zhǔn)確率[3]。中性粒細(xì)胞CD64為反映敗血癥患兒體內(nèi)炎癥狀態(tài)及感染狀態(tài)的敏感指標(biāo)，有學(xué)者指出IL-8等炎性細(xì)胞因子水平與機(jī)體病原菌感染關(guān)系密切，為臨床評(píng)估膿毒癥敏感指標(biāo)；此外趨化因子MCP-1可參與調(diào)控白細(xì)胞的遷移，參與炎癥反應(yīng)，進(jìn)而參與機(jī)體感染過(guò)程，與感染性疾病的發(fā)生關(guān)系緊密[4-6]?；诖吮狙芯繉?duì)我院31例敗血癥新生兒及30例非敗血癥感染新生兒、30例健康新生兒進(jìn)行中性粒細(xì)胞CD64及血清IL-8、IL-10、MCP-1水平檢測(cè)，探討各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)新生兒敗血癥診斷效能的影響。結(jié)果如下。

1 對(duì)象與方法

1．1 研究對(duì)象 選取我院2016年5月-2018年4月收治的31例敗血癥新生兒為觀察組，女11例，男 20 例；胎齡 38～41 周，平均（39．40±1．20）周；出生體質(zhì)量 2500～4000g，平均（3290．50±431．50）g；5 min Apgar評(píng)分 8～10 分，平均（8．90±0．50）分。 另取同期收治的30例非敗血癥感染患兒作為對(duì)照組，女 10 例，男 20 例；胎齡 38～41 周，平均（39．50±1．30）周；出生體質(zhì)量 2510～4000g，平均（3294．60±430．30）g；5min Apgar評(píng)分 8～10 分， 平均 （8．80±0．60）分。并取30例健康新生兒作為健康對(duì)照組，女 11 例，男 19 例；胎齡 37～41 周，平均（39．70±1．15）周；出生體質(zhì)量 2511～4010g，平均（3292．40±429．40）g；5min Apgar評(píng)分 8～10 分， 平均 （8．70±0．60）分。對(duì)比各組基線資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1．2 敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)《新生兒敗血癥診療方案》制定敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：⑴無(wú)菌體腔培養(yǎng)出致病菌或血培養(yǎng)培養(yǎng)出致病菌；⑵血培養(yǎng)標(biāo)本培養(yǎng)出條件致病菌，且與另份血或?qū)Ч芏嘶驘o(wú)菌體腔內(nèi)培養(yǎng)出同種細(xì)菌。符合以上任一條且具備以下任一表現(xiàn)：⑴血標(biāo)本病原菌抗原或DNA檢測(cè)陽(yáng)性；⑵非特異性檢測(cè)異常2條或2條以上[7]。

1．3 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴觀察組符合以上敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑵采血時(shí)間均為出生后28h內(nèi)；⑶新生兒家屬知曉本研究并自愿簽署知情同意書(shū)。

1．4 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴觀察組出現(xiàn)敗血癥嚴(yán)重并發(fā)癥者；⑵對(duì)照組胎膜早破、羊水污染或母體孕期罹患感染性疾患；⑶染色體異常新生兒；⑷先天畸形或伴有遺傳代謝病或出現(xiàn)窒息患兒；⑸出現(xiàn)HIV感染或其他免疫缺陷患兒；⑹入院前采用抗生素治療者；⑺心、肝、腎等重要臟器功能不全者。

1．5 方法 未行任何治療前取 6ml靜脈血，以1500r/min離心10～15min，分離上清液保存于-80℃冰箱中待檢，采用日本日立全自動(dòng)生化分析儀（7180型），以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清MCP-1、IL-8、IL-10水平，血清MCP-1測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海盈公酶聯(lián)檢測(cè)試劑有限公司，血清IL-8及IL-10試劑盒購(gòu)自上海心語(yǔ)生物科技有限公司，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用NAVIOS三激光十色流式細(xì)胞儀 （美國(guó)Beckman Coulter公司）及配套專用試劑盒測(cè)定新生兒全血CD64：將異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD64鼠抗人單克隆抗體CD64分別加入每支流式專用試管中（10μl/支），再加入60μl全血，混勻避光15min，上機(jī)檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)依據(jù)側(cè)向角、前向角散射光信號(hào)圖顯示的形態(tài)學(xué)特征確定中性粒細(xì)胞群，測(cè)定CD64平均熒光強(qiáng)度（MFI）；每次上機(jī)檢測(cè)均采用600mV電壓。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò) SPSS 19．0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以（x±s）表示計(jì)量資料，t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，n（%）表示計(jì)數(shù)資料，χ2檢驗(yàn)，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 中性粒細(xì)胞 CD64 及血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平 觀察組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平高于對(duì)照組及健康對(duì)照組，且對(duì)照組高于健康對(duì)照組（P＜0．05）。 見(jiàn)表 1。

2．2 診斷效能 中性粒細(xì)胞CD64聯(lián)合血清MCP-1、IL-8、IL-10水平對(duì)新生兒敗血癥診斷敏感度高于各指標(biāo)單一診斷，漏診率低于各指標(biāo)單一診斷（P＜0．05）。 見(jiàn)表 2、表 3。

3 討論

血培養(yǎng)、桿狀核粒細(xì)胞/中性粒細(xì)胞、C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及降鈣素原等為目前臨床診斷新生兒敗血癥的常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。其中血培養(yǎng)仍為目前臨床診斷新生兒感染性疾患的 “金標(biāo)準(zhǔn)”，具有較高檢出率，但其培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，早期診斷敏感度低，導(dǎo)致部分患兒因無(wú)法及時(shí)確診而延誤治療時(shí)機(jī)；降鈣素原為診斷新生兒敗血癥的特異性指標(biāo)，但患兒出生3d內(nèi)存在生理高峰，需建立日齡依賴性參考值，存在一定局限性；而C反應(yīng)蛋白雖與機(jī)體感染密切相關(guān)，但其早期敏感度低，需連續(xù)多次檢測(cè)方可獲取最佳診斷數(shù)據(jù)，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受限[8，9]。因此臨床亟待尋找可靠的標(biāo)志物以準(zhǔn)確評(píng)估新生兒是否患有敗血癥。

表1 對(duì)比各組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

表1 對(duì)比各組中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

注：與健康對(duì)照組相比，aP＜0．05；與對(duì)照組相比，bP＜0．05。

CD64（MFI） IL-8（pg/ml） IL-10（ng/L） MCP-1（ng/L）66．70±23．80ab 40．30±13．77a 25．10±4．90 51．411 0．000 187．70±26．70ab 85．40±25．42a 36．10±21．60 300．025 0．000 72．20±22．80ab 19．10±4．10a 8．65±2．01 193．302 0．000 62．50±21．81ab 48．20±20．80a 38．40±20．60 10．094 0．000組別 例數(shù)觀察組對(duì)照組健康對(duì)照組FP 31 30 30

表2 診斷四格表[n（%）]

表3 對(duì)比不同指標(biāo)診斷效能[n（%）]

有學(xué)者指出中性粒細(xì)胞CD64為臨床診斷小腸結(jié)腸炎及晚發(fā)性膿毒癥重要的生物標(biāo)志物，可在感染發(fā)生4～6h后呈高表達(dá)[10]。此外國(guó)外學(xué)者Lam HS等[11]指出CD64對(duì)敗血癥新生兒的診斷敏感度高達(dá)89%，特異度更是高至98%。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組CD64高于對(duì)照組及健康對(duì)照組，且對(duì)照組高于健康對(duì)照組（P＜0．05），可見(jiàn)中性粒細(xì)胞 CD64可作為臨床診斷評(píng)估新生兒是否發(fā)生敗血癥的有效指標(biāo)；但本研究發(fā)現(xiàn)CD64對(duì)新生兒敗血癥敏感度為70．97%，這可能與新生兒敗血癥的發(fā)生不僅是感染導(dǎo)致的免疫防御反應(yīng)，且是和能量、代謝、免疫相結(jié)合的病、生理過(guò)程，而發(fā)病早期細(xì)胞因子風(fēng)暴消耗能量大，致使后期能量供應(yīng)不足有關(guān)；因此僅測(cè)定CD64存在一定的誤診、漏診率。

MCP-1為調(diào)節(jié)單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、遷移的重要趨化因子，可參與多種疾病的細(xì)胞凋亡，學(xué)者嚴(yán)爭(zhēng)等[12]研究發(fā)現(xiàn)MCP-1在敗血癥新生兒中呈高表達(dá)狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清MCP-1水平高于對(duì)照組及健康對(duì)照組，對(duì)照組高于健康對(duì)照組（P＜0．05），說(shuō)明MCP-1可作為臨床診斷新生兒敗血癥的指標(biāo)之一；但多種疾病均可引起血清MCP-1水平升高，且本研究發(fā)現(xiàn)其應(yīng)用于新生兒敗血癥診斷中，診斷敏感度僅為67．74%，因此臨床診斷時(shí)需結(jié)合其他指標(biāo)以提高診斷準(zhǔn)確率。IL-8是一種炎性細(xì)胞因子，可通過(guò)結(jié)合受體CXCR2及受體CXCR1對(duì)中性粒細(xì)胞產(chǎn)生趨化作用，進(jìn)而調(diào)控炎癥反應(yīng)，當(dāng)機(jī)體被植物血凝素、脂多糖等刺激時(shí)，血清中其水平會(huì)迅速升高，與感染性疾病的發(fā)生存在緊密聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清IL-8水平高于對(duì)照組及健康對(duì)照組，且對(duì)照組高于健康對(duì)照組（P＜0．05），說(shuō)明 IL-8 可作為臨床診斷新生兒敗血癥的輔助血清學(xué)指標(biāo)。此外抗炎因子IL-10在血循環(huán)中的表達(dá)與病原菌感染存在緊密聯(lián)系，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)感染時(shí)，會(huì)大量分泌IL-10，致使其血清水平升高，本研究發(fā)現(xiàn)其診斷新生兒敗血癥敏感度雖只有 64．52%，但特異度高達(dá) 91．67%，因此可作為區(qū)分新生兒是否發(fā)生敗血癥的特異性指標(biāo)。與中性粒細(xì)胞CD64及血清MCP-1、IL-8聯(lián)合檢測(cè)，可提高診斷效能，減少漏診率。本研究發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞 CD64與血清 MCP-1、IL-8、IL-10聯(lián)合診斷新生兒敗血癥，診斷靈敏度為96．77%，高于各指標(biāo)單一診斷，漏診率低于各指標(biāo)單一檢測(cè)，說(shuō)明中性粒細(xì)胞 CD64聯(lián)合血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平檢測(cè)應(yīng)用于新生兒敗血癥診斷中，診斷效能高，可作為臨床診治疾病的依據(jù)。

綜上，中性粒細(xì)胞CD64聯(lián)合血清IL-10、IL-8、MCP-1水平檢測(cè)可提高新生兒敗血癥診斷靈敏度，降低漏診率，診斷效能高，可為臨床診治疾病提供參考。