何開蓉，程鐵轅，張瑩，夏于林

（1.食品安全檢測四川省重點實驗室，四川 成都 610000；2.國家酒類檢測重點實驗室，四川 宜賓 644000）

中國白酒是中華民族傳統(tǒng)飲品，歷史悠久，質量可靠，深受國內(nèi)民眾喜愛。隨著社會發(fā)展和民眾關注健康意識以及食品安全意識的日益提升，無論是政府監(jiān)管機構，或是高校等科研院所，還是白酒生產(chǎn)企業(yè)，均對白酒質量安全比以往更加重視，加大了對白酒產(chǎn)品在安全衛(wèi)生方面的研究力度，有很多研究成果呈現(xiàn)[1-6]。農(nóng)藥殘留是食品安全檢測分析領域重點關注方向，液相色譜串聯(lián)質譜聯(lián)用儀是目前較為先進的檢測儀器，當前采用液相色譜串聯(lián)質譜法檢測食品中農(nóng)藥殘留相關研究較多[7-20]，農(nóng)藥殘留中的氨基甲酸酯類農(nóng)藥因高效廣譜選擇性強而在農(nóng)作物中應用廣泛，本文通過建立液相色譜三重四極桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀測定白酒中氨基甲酸酯類8 種農(nóng)藥殘留定量分析方法，以期能夠更好的掌握白酒產(chǎn)品在上述8 種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留方面的質量安全情況。

1 試驗材料與方法

1.1 樣品、儀器和試劑

1.1.1 樣品

選取宜賓市售白酒3 個廠家不同批次的樣品共10 份。

1.1.2 試驗儀器

Agilent6410 三重四級桿串聯(lián)質譜儀（配電噴霧離子源）：美國安捷倫公司；2K15 離心機（4 000 r/min）：德國SIGMA 公司；Turbo Vap LV 氮吹儀：德國 Biotage；WH-3 渦旋混合儀：滬析分析儀器廠有限公司。

1.1.3 試劑

8 種農(nóng)藥標準品：德國Dr.Ehrenstorfer 公司，純度大于99%；甲醇、乙酸均為色譜純：迪馬公司。

混合標準工作溶液的制備：吸取適量體積的每種標準儲備液于一個容量瓶中，用甲醇稀釋成10 μg/mL的混合標準工作中間溶液，避光冷藏保存。

標準工作液的制備：吸取適量的混合標準工作中間液，分別配制成濃度為 25、50、100、200 ng/mL 的標準系列。

1.2 試驗方法

蒸餾酒樣品過0.22 μm 濾膜后直接進樣上機。

1.3 試驗條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18，1.8 μm，50 mm×4.6 mm（內(nèi)徑）

流速：0.4 mL/min；

子空間投影方法的關鍵問題是要找到干擾子空間的一組基。因為只需分析得出張成干擾子空間的基，所以除了傳統(tǒng)的利用數(shù)據(jù)協(xié)方差矩陣特征分解來求解之外，還有其它更為簡便的子空間分析方法。

進樣量：5 μL。

流動相：A：0.1%乙酸；B：甲醇；流動相梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure

1.3.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描模式：正離子模式；檢測方式：多反應監(jiān)測；離子源溫度：350 ℃；毛細管電壓：4 000 V；霧化器流量：11 L/min；霧化器壓力：35 psi；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣；監(jiān)測離子對（m/z）和其他參考條件見表2。

1.3.3 液相色譜-質譜確證

樣品在上述液相色譜-串聯(lián)質譜條件下進行測試，如果檢出的色譜峰保留時間與標準溶液中某種目標物相一致，并且所選擇的兩對離子對及豐度比一致，則可判定為樣品中存在這種農(nóng)藥殘留。定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差見表3。

表2 質譜參數(shù)Table 2 Mass parameters

1.3.4 定量測定

本方法采用定量離子碎片的峰面積外標標準曲線法定量測定。

表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差表Table 3 Maximum allowable misalignment of the relative ion abundance in the qualitative confirmation

1.3.5 結果計算和表述

式中：x 為試樣中被測組分的含量，mg/kg；c 為從標準曲線上得到的被測組分溶液濃度，μg/mL；v 維生素C 樣品溶液最終定容體積，mL；m 為樣品溶液所代表的試樣質量，g。

2 結果與討論

2.1 測定條件的優(yōu)化

2.1.1 液相梯度洗脫程序的建立

建立梯度洗脫程序時，通過調(diào)整洗脫時間，同時對流動相甲醇和0.1%乙酸的比例進行優(yōu)化，盡量使得8 種化合物的分離效果最好，最終確定的梯度洗脫程序見表1。

2.1.2 質譜條件的選擇

在確定了液相色譜的條件后，為進一步提高靈敏度和分離效果，采用電噴霧離子源，在正離子監(jiān)測模式下，逐一優(yōu)化離子源溫度（Gas Temp），霧化器流量（Gas Flow），監(jiān)測[M+H]+和[M+Na]+，使之響應值達到最佳。在確定上述條件后，在多反應監(jiān)測模式下，再分別優(yōu)化每一種目標物的碎裂電壓和碰撞電壓，從而得到最強的離子碎片信息。具體結果見表2。

2.2 方法的線性關系及檢出限

在上述試驗條件下，混合標準工作系列溶液進行測試，以組分峰面積對其質量濃度做圖，得到各組分的標準曲線方程，各組分在0.025 mg/kg～0.2 mg/kg 范圍內(nèi)線性關系良好。各組分保留時間、相關系數(shù)、檢出限見表4。

2.3 氨基甲酸酯類農(nóng)藥加標回收率、精密度試驗

分別在白酒樣品中添加一定濃度的8 種農(nóng)藥混標，使各樣品中農(nóng)藥含量均為20μg/L，且重復做5 次，按照前述的分析條件進行回收率試驗。回收率和精密度見表5。

表4 氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其他農(nóng)藥保留時間、標準曲線方程與檢出限Table 4 The retention time，the standard curve equation and the detection limit of the amino acid ester pesticides and other pesticides

表5 蒸餾酒樣品加標回收率和精密度試驗測定結果Table 5 Experimental results of recovery rate and accuracy of distilled liquor sample

由表5可知，在蒸餾酒中的回收率為87.6 %～100.0%，精密度為0.89%～5.6%?；厥章屎途芏葦?shù)據(jù)表明：本測試方法可以滿足克百威等8 種氨基甲酸酯類農(nóng)殘的檢測要求。

2.4 儀器的精密度

為考察該儀器精密度，將濃度為80 μg/L 的混合標準溶液重復進樣8 次，測試各標樣化合物峰面積和保留時間的重現(xiàn)性，試驗結果見表6。由表6可知：測試過程中，儀器精密度良好，能夠滿足試驗要求。

2.5 方法的應用

該分析方法建立后，采用此方法測試了10 份宜賓地區(qū)所產(chǎn)的濃香型白酒樣品，測試結果顯示上述8 種農(nóng)殘均是未檢出，這說明酒企對釀酒原料中上述8 種農(nóng)殘控制的非常好，也可能是經(jīng)過白酒發(fā)酵蒸餾過程之后，上述8 種農(nóng)殘量損失變少，可以通過對同一批次釀酒專用糧及蒸餾出的白酒進行分析驗證。

表6 精密度測試結果Table 6 Precision test results

3 結論

本文首次建立了同時檢測蒸餾白酒中8 種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（抗蚜威、惡蟲威、克百威、仲丁威、甲萘威、撲滅威、多菌靈、滅多威）農(nóng)藥殘留的液相色譜三重四極桿串聯(lián)質譜聯(lián)用儀定性鑒別和定量測試方法，8 種農(nóng)藥殘留的方法檢出限為 0.5 μg/kg～10 μg/kg。8 種農(nóng)藥殘留在蒸餾白酒中加標回收率為87.6%～100.0%，精密度為0.89%～5.6%，方法的精密度、準確度均能滿足測試要求。為深入研究釀酒專用糧中農(nóng)藥殘留在濃香型白酒發(fā)酵過程中的遷移變化規(guī)律建立了方法基礎。