吳姣姣，曾顯營，陳曉涵，臧金凱，包紅梅，施建忠，鄧國華，郭興福，劉景利，毛勝剛，楊 帆，陳志宇，孫項楠，路 通，陳化蘭，田國彬*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室/國家禽流感參考實驗室，黑龍江哈爾濱150069；2.哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司，黑龍江哈爾濱150069)

高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza，HPAI)是一種重要的人獸共患傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織規(guī)定為必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病[1]。2017年初，我國出現(xiàn)H7N9亞型HPAI病毒，并在多個省份的肉雞和蛋雞中引起HPAI疫情，造成重大的經(jīng)濟損失，同時第5波人感染H7N9病毒的病例達到766人，引起人們對下一次會有更多人感染的擔憂和恐懼[2]。更重要的是研究顯示，該HPAI H7N9病毒在人體內(nèi)復制后容易突變?yōu)閷θ烁叨戎滤?、且有可能高效傳播的病毒，對公共衛(wèi)生蘊藏更大風險[3]。為有效控制H7N9亞型禽流感，國家禽流感參考實驗室及時研制出重組禽流感病毒(AIV)(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，并于2017年9月在我國家禽中大量應用。該疫苗的應用極大的降低了H7N9病毒在家禽中的流行，更在阻斷人感染H7N9病毒方面產(chǎn)生了“立竿見影”的效果，人感染H7N9病例由免疫前的766例減少為同期的3例[3-4]，很快消除了人們的擔憂。

我國是肉雞養(yǎng)殖大國和消費大國。自1986年以來，我國肉雞的養(yǎng)殖和消費呈增長趨勢。據(jù)相關(guān)部門統(tǒng)計，2015年我國肉雞的年出欄量為87.9億只，其中白羽肉雞39.45億只，黃羽肉雞39億只，肉雜雞9億只；2015年我國居民人均消費雞肉量已達到10 kg以上[5]?；钋菔袌鍪侨怆u的重要銷售場所，我國多地人群習慣去活禽市場購買活雞。禽流感疫苗的有效免疫將減少肉雞帶毒率，有益于降低人感染AIV的風險。當前使用的重組AIV(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)對肉雞的免疫效果如何？值得關(guān)注和評估。本研究評估了H5+H7滅活疫苗對白羽和黃羽商品肉雞的免疫保護效果，為現(xiàn)地肉雞的禽流感疫苗免疫提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒株、抗原及血清 攻毒用病毒株A/Chicken/Guizhou/4/2013(H5N1)(簡 稱 CK/GZ/4/13)株 和A/Chicken/Guangxi/SD098/2017(H7N9)(簡稱 CK/GX/SD098/17)株，均由國家禽流感參考實驗室分離、鑒定和保存。H5N1亞型Re-8株和H7N9亞型H7-Re1株血凝抑制試驗抗原和陽性血清均由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司提供。

1.2 疫 苗 重組AIV(H5+H7)二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)(以下簡稱為H5+H7疫苗)，2017007批，由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.3 實驗用雞及試驗場所 10日齡白羽肉雞和14日齡黃羽肉雞來自哈爾濱當?shù)仞B(yǎng)殖場。疫苗接種和飼養(yǎng)均在養(yǎng)殖場進行，所有涉及H5亞型和H7亞型AIV操作的試驗均在生物安全三級實驗室(ABSL-3)進行。

1.4 實驗用雞胚 10日齡SPF雞胚購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所實驗動物中心。

1.5 血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI) HA和HI試驗方法根據(jù)國家標準(GB/T-18936-2003)進行。

1.6 白羽肉雞免疫效力試驗

1.7 黃羽肉雞免疫效力試驗

2 結(jié)果

2.1 白羽肉雞免疫效力試驗結(jié)果

表1 白羽肉雞免疫后21 d和35 d攻擊H5N1亞型和H7N9亞型AIV的排毒情況檢測結(jié)果

2.2 黃羽肉雞免疫效力試驗結(jié)果

表2黃羽肉雞免疫后21 d和76 d攻擊H5N1亞型和H7N9亞型AIV的排毒檢測結(jié)果

3 討論

H5亞型和H7亞型禽流感是危害我國養(yǎng)殖業(yè)的重要傳染病，疫苗免疫在禽流感防控中發(fā)揮了重要作用[6]。2004年我國出現(xiàn)H5N1亞型AIV引起的HPAI疫情，波及全國大多數(shù)省份，造成嚴重的經(jīng)濟損失。2005年開始我國使用疫苗防控H5N1亞型禽流感，疫苗使用后家禽疫情顯著減少，得到有效控制。但由于AIV對水禽致病力較低，影響水禽養(yǎng)殖者對免疫的積極性，致使水禽免疫覆蓋率較低，因此水禽攜帶并傳播病毒，導致H5亞型AIV依然在家禽中存在，由于其抗原性不斷發(fā)生變異，促使疫苗種毒不斷更新[6-8]。2015年以來，我國開始使用H5亞型Re-8株疫苗，該疫苗可以抵御多種NA亞型H5 AIV的攻擊[8-9]，用于家禽H5亞型禽流感防控。2013年我國出現(xiàn)了H7亞型流感病毒感染人的事件。由于該病毒對家禽呈低致病力，因此沒有使用疫苗防控。2017年初，我國出現(xiàn)高致病力H7N9病毒株[2]，并在多個省份引起疫情。因此，我國農(nóng)業(yè)部(現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部)決定開始使用疫苗防控H7N9亞型禽流感。國家禽流感參考實驗室研制的H5+H7疫苗于2017年9月在我國大面積應用后，有效控制了家禽和人的H7N9禽流感疫情[3-4]。血清學監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，H5亞型和H7亞型AIV HI抗體在蛋雞和飼養(yǎng)周期較長的肉雞中的免疫覆蓋率達到73.1%以上，而短期飼養(yǎng)的肉雞中免疫覆蓋率僅為4.8%[3]。本研究的攻毒結(jié)果顯示，黃羽肉雞和白羽肉雞感染H7N9和H5N1病毒后均快速發(fā)病、死亡。2017年8月我國安徽一肉雞場發(fā)生H7N9禽流感疫情，撲殺和無害化處理74463只家禽，造成重大經(jīng)濟損失。因此存欄量巨大的黃羽肉雞和白羽肉雞的疫苗免疫對于我國HPAI防控十分重要。

通常認為肉雞飼養(yǎng)周期短，禽流感疫苗免疫效果不佳。本研究中，黃羽肉雞在14日齡和35日齡分別以0.3 mL/只和0.5mL/只的劑量免疫后，其H5亞型和H7亞型AIV HI抗體在免疫后21 d和出欄時（90日齡） 均在6 log2以上，在免疫后3周和出欄時攻毒，免疫雞均獲得完全保護，充分表明H5+H7疫苗對黃羽肉雞具有良好的免疫效果。短期飼養(yǎng)的白羽肉雞以0.5 mL的劑量免疫后，也可以產(chǎn)生6.0 log2左右的HI抗體，攻毒后其也獲得完全的保護。因此，肉雞免疫H5+H7禽流感滅活疫苗后可以抵御H5亞型和H7亞型AIV的攻擊。

鑒于上述研究結(jié)果，推薦H5+H7二價滅活疫苗對商品肉雞的免疫程序如下：短期飼養(yǎng)肉雞在10日齡左右免疫，0.5 mL/只；飼養(yǎng)期在2月以上的肉雞在14日齡左右首免，0.3 mL/只，35日齡左右加強免疫，0.5 mL/只。肉種雞可以參考蛋雞免疫程序，并根據(jù)抗體監(jiān)測情況適時加強免疫。