吳翠霞 李 波

卵巢癌作為1種常見的女性惡性腫瘤，在確診時大部分患者已經(jīng)處于晚期，雖然近年來臨床采用了一些標(biāo)志物早期診斷卵巢癌，但是CA125是臨床篩查卵巢癌過程中采用的唯一標(biāo)志物，其具有較低的敏感度及特異度[1]。本研究探討了CADM1在卵巢癌組織中的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2016年8月至2018年8月我院卵巢癌患者50例，年齡47～55歲，平均(51.1±8.8)歲。手術(shù)切除卵巢癌組織及對應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本后以較快的速度分塊取材，用4%多聚甲醛固定或在液氮中放置凍存并石蠟包埋保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均接受手術(shù)治療；②術(shù)前均沒有接受放化療治療；③病理資料均完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有手術(shù)禁忌癥；②術(shù)前接受放化療治療；③病理資料不完整。

1.3 方法

1.3.1 組織CADM1 mRNA測定 應(yīng)用RT-PCR法，將凍存組織中總RNA提取出來，在此過程中嚴(yán)格依據(jù)TRIzol試劑說明書，反轉(zhuǎn)錄1 μg總RNA為cDNA。CADM1、GAPDH引物序列具體見表1。將反應(yīng)體系配置出來，在此過程中嚴(yán)格依據(jù)qRT-PCR說明書要求，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。將內(nèi)參設(shè)定為GAPDH基因，運(yùn)用2-△△Ct法將組織中CADM1基因相對表達(dá)量計算出來。將所有卵巢癌組織中CADM1表達(dá)量的平均值計算出來，分樣本為高表達(dá)組與低表達(dá)組兩組，ADM1 mRNA分別>0.57、≤0.57。

表1 CADM1、GAPDH引物序列[2]

1.3.2 組織CADM1蛋白測定 應(yīng)用Western blotting法，將組織樣本總蛋白樣本提取出來，在此過程中將RIPA裂解液充分利用起來，測定其濃度，將相同質(zhì)量的蛋白樣品取出來，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，濃縮膠80 V進(jìn)行40 min的電泳，分離膠120 V進(jìn)行2 h的電泳后向NC膜轉(zhuǎn)印，室溫下用5% BSA進(jìn)行1～2 h的封閉，在4 ℃溫度下對一抗進(jìn)行孵育，CADM1、GAPDH分別1∶600、1∶1000過夜，0.5%TBST進(jìn)行3遍洗膜，將1∶1000二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記)加入，室溫下進(jìn)行1 h的孵育，0.5%TBST洗膜3遍后運(yùn)用ECL化學(xué)發(fā)光法對結(jié)果進(jìn)行檢測，凝膠成像系統(tǒng)顯影。定量Western blotting條帶，在此過程中采用Quantity One分析軟件。目標(biāo)蛋白的相對表達(dá)量=目的蛋白測定值/GAPDH。

1.3.3 組織CADM1陽性細(xì)胞率測算 應(yīng)用免疫組化法，組織標(biāo)本將4 μm厚度石蠟切片制作出來，脫蠟、水化，修復(fù)抗原，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，封閉血清，然后在4 ℃溫度下孵育1∶600CADM1一抗單克隆抗體過夜。PBS進(jìn)行3遍洗滌后將1∶1000二抗(生物素標(biāo)記)加入，在37 ℃溫度下進(jìn)行1 h的孵育，DAB顯色，將顯色停止的時間為顯微鏡下觀察到棕色，復(fù)染、分化，在此過程中分別將蘇木精、鹽酸乙醇充分利用起來，脫水、透明，封片過程中將中性樹膠充分利用起來。光學(xué)顯微鏡下觀察并將圖像采集下來。高倍視野下對陽性細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞總數(shù)進(jìn)行計數(shù)，分別將6個視野選取出來，陽性細(xì)胞與總細(xì)胞數(shù)的百分率即為陽性細(xì)胞率，將其平均值計算出來。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同組織中CADM1表達(dá)水平比較

卵巢癌組織中CADM1 mRNA表達(dá)水平、CADM1蛋白相對表達(dá)量、陽性細(xì)胞率均顯著低于癌旁正常組織(P<0.05)，具體見表2。

組織例數(shù)CADM1mRNA表達(dá)水平CADM1蛋白相對表達(dá)量陽性細(xì)胞率/%卵巢癌組織500.27±0.111.31±0.2210.2±2.3癌旁正常組織501.51±0.132.92±0.4190.3±5.4χ24.3033.1826.965P<0.05<0.05<0.05

2.2 CADM1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

50例患者中，36例低表達(dá)CADM1，14例高表達(dá)CADM1，分別占總數(shù)的72.0%、28.0%。低表達(dá)CADM1 患者的FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期比例顯著低于高表達(dá)CADM1患者(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期比例顯著高于高表達(dá)CADM1患者(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均顯著高于高表達(dá)CADM1患者(P<0.05)，但兩者年齡、分化程度之間的差異均不顯著(P>0.05)，具體見表3。

3 討論

卵巢是只有女性才有的生殖腺，卵巢癌始于卵巢。卵巢腫瘤有不同類型，大部分都是良性的，可通過手術(shù)完整切除治愈卵巢癌風(fēng)險因素有很多卵巢癌的確切原因并不清楚，但是卵巢癌是和遺傳相關(guān)度相對高的1種癌癥，預(yù)計5%～10%的卵巢癌和家族遺傳相關(guān)卵巢癌目前尚沒有有效的早期篩查手段，無效手段包括腫瘤標(biāo)志物檢測以及各種商業(yè)機(jī)構(gòu)多方宣傳液體活檢等卵巢癌可能導(dǎo)致多種癥狀和體征。如相關(guān)體征出現(xiàn)1個月以上不消退，請及時到醫(yī)院婦瘤科或腫瘤醫(yī)院婦科就診排除或確認(rèn)相關(guān)情況。當(dāng)體內(nèi)細(xì)胞生長開始失去控制時，癌癥就開始了。幾乎身體任何部位的細(xì)胞都可能成為癌癥，并擴(kuò)散到身體的其他部位。卵巢癌始于卵巢。卵巢是只有女性才有的生殖腺。卵巢生產(chǎn)卵子用于繁殖。卵子通過輸卵管進(jìn)入子宮，受精卵在那里植入并發(fā)育成胎兒。卵巢也是女性荷爾蒙雌激素和孕酮的主要來源。在骨盆中每一側(cè)，在子宮的兩旁各有1個卵巢。卵巢由3種主要的細(xì)胞組成，每種類型的細(xì)胞都可以發(fā)展成不同類型的腫瘤：上皮腫瘤開始于覆蓋卵巢外表面的細(xì)胞。大多數(shù)卵巢腫瘤是上皮細(xì)胞發(fā)生的腫瘤。生殖細(xì)胞腫瘤開始于產(chǎn)生卵子的細(xì)胞。間質(zhì)瘤開始于結(jié)締組織細(xì)胞，這種組織細(xì)胞維系卵巢的結(jié)構(gòu)，并產(chǎn)生雌激素和黃體酮。這些腫瘤大部分是良性的(非癌性的)，不會擴(kuò)散到卵巢以外。良性腫瘤可以通過切除包含腫瘤的整個卵巢或部分卵巢來進(jìn)行治療。卵巢惡性腫瘤(癌性)或低度惡性腫瘤可擴(kuò)散轉(zhuǎn)移到身體的其他部位，這對病人可能是致命的。

表3 CADM1表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性(例，%)

細(xì)胞粘附分子1(CADM1)屬于1種粘附分子，歸屬于免疫球蛋白超家族，其功能涉及細(xì)胞間相互作用，在肺腺癌中能夠抑制腫瘤[3]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[4-5]，結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中均具有較低的CADM1表達(dá)，同時，其和腫瘤患者惡性病理參數(shù)及不良預(yù)后預(yù)后具有極為密切的關(guān)系。但是目前，臨床還沒有完全弄清楚卵巢癌中CADM1表達(dá)變化及臨床意義[6]。近年來，相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[7-9]，卵巢癌組織中具有較低的CADM1表達(dá)，為卵巢癌的發(fā)生發(fā)展提供了良好的前提條件，造成患者預(yù)后不良。本研究結(jié)果表明，卵巢癌組織中CADM1 mRNA表達(dá)水平、CADM1蛋白相對表達(dá)量、陽性細(xì)胞率均顯著低于癌旁正常組織。50例患者中，36例低表達(dá)CADM1，14例高表達(dá)CADM1，分別占總數(shù)的72.0%、28.0%。低表達(dá)CADM1 患者的FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期比例顯著低于高表達(dá)CADM1患者，Ⅲ～Ⅳ期比例顯著高于高表達(dá)CADM1患者；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均顯著高于高表達(dá)CADM1患者，但二者年齡、分化程度比例之間的差異均不顯著，和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

總之，CADM1在卵巢癌組織中的表達(dá)降低，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌發(fā)生發(fā)展，造成患者預(yù)后不良，值得臨床充分重視。