祝 磊，韓 雪

(1.鄭州拜博醫(yī)療集團有限公司惠濟泰康拜博口腔門診部，河南 鄭州 450000；2.鄭州人民醫(yī)院口腔科，河南 鄭州 450053)

口腔白斑病是臨床上常見的口腔黏膜表面白色斑塊?？谇击[癌占口腔頜面部惡性腫瘤的80%以上，是口腔最常見的惡性腫瘤。由正?？谇火つさ娇谇话装咴俚娇谇击[癌是一個漸進的過程。Livin和第二個線粒體衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活劑(second mitochondria-derived activator of caspase，Smac)是多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的關鍵因素[1-2]。本研究采用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測Livin和Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑及口腔鱗癌組織中表達情況，以期為識別口腔白斑的早期癌變提供臨床參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料所有63例病理標本均選自2012年1月至2016年12月鄭州人民醫(yī)院病理科存檔的蠟塊和口腔科活檢切取的組織。標本均由2位經(jīng)驗豐富的副主任醫(yī)師職稱以上病理科醫(yī)師重新閱片確認。63例標本中，14例口腔白斑，38例口腔鱗癌，11例口腔正常黏膜。

1.2 試劑鼠抗人Smac單克隆抗體(美國Santa Cruz公司)；Livin兔抗人多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)；S-P免疫組化染色試劑盒、山羊抗鼠抗體和山羊抗兔抗體二抗、DAB試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。

1.3 免疫組化S-P法檢測Livin和Smac蛋白表達采用免疫組化S-P法檢測不同口腔黏膜組織中Livin和Smac蛋白的表達，以PBS代替一抗作為陰性對照，Smac蛋白染色以已知陽性乳腺癌標本為陽性對照，Livin蛋白染色以已知陽性食管癌標本為陽性對照。

1.4 結果判定Livin蛋白陽性細胞判定：細胞質內出現(xiàn)棕黃或棕褐色顆粒；Smac蛋白陽性細胞判定：細胞質、細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒。用半定量積分法，根據(jù)染色程度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。再按陽性細胞所占百分比評分：<4%為0分，4%～24%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩者相乘即為總積分，<1分為陰性(-)，1～2分弱陽性(+),3～4分陽性(++),5～6分強陽性(+++)，以弱陽性+陽性+強陽性計算陽性表達率。

1.5 統(tǒng)計學處理采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料用百分數(shù)表示,比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Livin和Smac蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)；Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)。見圖1、2，表1、2。

圖2 Smac在正?？谇火つ?A)、口腔白斑(B)、口腔鱗癌(C)組織中的表達(S-P，×400)

表1 Livin蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達

注：3種口腔黏膜組織中Livin蛋白表達比較，χ2=29.187，P<0.001；正常口腔黏膜與口腔白斑比較，P=0.062；口腔白斑與口腔鱗癌比較，P=0.014；正?？谇火つづc口腔鱗癌比較，P<0.001

表2 Smac蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達

注：3種口腔黏膜組織中Livin蛋白表達比較，χ2=18.359，P<0.001；正?？谇火つづc口腔白斑比較，P=0.079；口腔白斑與口腔鱗癌比較，P<0.001；正?？谇火つづc口腔鱗癌比較，P<0.001

2.2 口腔鱗癌組織中Livin蛋白與Smac蛋白表達的關系口腔鱗癌組織中Livin蛋白表達與Smac蛋白表達呈負相關關系(rs=-0.456，P=0.004)。見表3。

表3 口腔鱗癌組織中Livin蛋白與Smac蛋白表達的關系

注：rs=-0.456，P=0.004

3 討論

Livin蛋白屬于凋亡抑制蛋白的一種，在細胞凋亡的過程中發(fā)揮重要作用。研究[3]證實，Livin蛋白在胃癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織。Smac蛋白在胃癌組織中表達量較癌旁正常組織明顯降低[4]。在非小細胞肺癌的研究[5]中，也發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中Smac蛋白表達量較癌旁正常組織明顯降低。在乳腺癌的研究[6]中，也檢測到腫瘤組織中Smac蛋白表達量較癌旁正常組織明顯降低。

關于口腔鱗癌的研究[7]中，檢測到高表達的Livin基因能促進口腔鱗癌細胞TCA8113的增殖，Livin基因的高表達和沉默能有效調控口腔鱗癌細胞TCA8113的凋亡和增殖。本研究結果也顯示，Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鱗癌組織中的Livin蛋白陽性表達率依次升高，且口腔鱗癌組織中Livin蛋白的表達明顯高于正?？谇火つ?、口腔白斑。

Smac蛋白是存在于線粒體且具有調節(jié)細胞凋亡作用的蛋白質，其促凋亡作用機制可能與逆轉凋亡抑制蛋白，特別是X連鎖凋亡抑制蛋白有關。王志紅等[8]的研究證實，Smac蛋白在卵巢子宮內膜異位癥的惡變過程中發(fā)揮重要作用。大量研究[9-11]證實，Smac蛋白在胃腸道腫瘤、生殖系統(tǒng)腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤等組織中存在異常表達。Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鱗癌組織中的Livin蛋白陽性表達率依次降低，且口腔鱗癌組織中Livin蛋白的表達明顯低于正常口腔黏膜、口腔白斑。

研究[12]證實，在結直腸癌組織中Smac蛋白表達與Livin蛋白表達具有密切關系。本研究通過對口腔鱗癌組織中Smac蛋白與Livin蛋白關系分析也發(fā)現(xiàn)，口腔鱗癌組織中Smac蛋白表達與Livin蛋白表達呈負相關關系(rs=-0.456，P=0.004)。這提示兩者在口腔正常黏膜到口腔白斑再到口腔鱗癌的轉化過程中相互具有負性調節(jié)作用。

綜上所述，Smac的低表達和Livin的高表達與口腔白斑癌變的發(fā)生、發(fā)展關系密切，兩者聯(lián)合檢測有助于早期評估口腔白斑癌變風險。