謝文，何歡，董家新，郭清蓮,＊，劉義

1武漢大學(xué)中南醫(yī)院，武漢 4300712武漢大學(xué)化學(xué)與分子科學(xué)學(xué)院，病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和生物醫(yī)學(xué)分析化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢 4300723廣西師范大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，廣西 桂林 541004

1 引言

血清白蛋白(SA)是動(dòng)物血漿當(dāng)中含量最多的載體蛋白1,2，也是循環(huán)系統(tǒng)中最常見的可溶性蛋白質(zhì)，主要承擔(dān)儲(chǔ)存和運(yùn)輸內(nèi)、外源物質(zhì)的功能3,4。絕大多數(shù)生物活性物質(zhì)，如類固醇激素、氨基酸、金屬離子和許多藥物分子，與血清白蛋白的親和力，直接決定了它們?cè)跈C(jī)體中的分布5-7。其中，藥物分子進(jìn)入血液后，通常首先與血清白蛋白結(jié)合，依賴血清白蛋白進(jìn)行運(yùn)輸，并轉(zhuǎn)運(yùn)至病灶發(fā)揮生理藥理活性8。研究藥物與SA結(jié)合的熱力學(xué)行為和特征，有助于從分子層面深入闡述藥物在體內(nèi)的運(yùn)輸過程以及作用機(jī)制，是目前化學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、生命科學(xué)領(lǐng)域共同感興趣的課題。

桑色素(英文名稱Morin，分子式C15H10O7，分子量302.23，分子結(jié)構(gòu)如圖1所示)是一種從黃桑木、黃橙樹等?？浦参锏臉淦ぶ刑崛〉奶烊稽S酮類化合物。它具有抗菌、抗病毒、抗癌、解痙等多種藥理作用9。研究發(fā)現(xiàn)桑色素對(duì)金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌和傷寒桿菌均有較強(qiáng)的抗菌作用10。桑色素對(duì)腹水型肝癌細(xì)胞具有永久性光敏殺傷作用，能夠抑制腹水型肝癌細(xì)胞DNA的合成11。最新的研究發(fā)現(xiàn)桑色素還可以和許多金屬離子形成配合物，其抗菌、抗病毒、抗氧性和抗癌活性更顯著12,13。因此，新型金屬-桑色素復(fù)合物的設(shè)計(jì)、合成及其生理活性的研究，是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一14,15。

圖1 Morin的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig. 1 Chemical structure of Morin.

桑色素具有優(yōu)良的抗菌、抗腫瘤等生理活性，因此其與蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的相互作用引起了許多研究人員的關(guān)注。戚祖德等人通過多種光譜手段，研究了Morin與人血清白蛋白(HSA)的相互作用，發(fā)現(xiàn)Morin能與HSA形成穩(wěn)定的復(fù)合物16。Wang等人的報(bào)導(dǎo)指出0.5 mg·L-1的牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白就能夠有效猝滅桑色素的內(nèi)源性熒光，且BSA的猝滅作用強(qiáng)于HAS17。宋玉民等通過電化學(xué)方法，研究了Morin與小牛胸腺DNA的相互作用，發(fā)現(xiàn)Morin與DNA發(fā)生較強(qiáng)烈的嵌入結(jié)合作用18。本文選擇牛血清白蛋白作為模型蛋白，利用熒光光譜、紫外-可見吸收光譜、圓二色譜和分子模擬技術(shù)，研究了牛血清白蛋白與桑色素的結(jié)合模式。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

日立F-2500熒光分光光度計(jì)(配以恒溫附件，日本)，普析TU-1901 UV-Vis分光光度計(jì)(中國(guó))，Sartorius ME215S分析天平(德國(guó))，Millipore純水儀(美國(guó))。

分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)由Sybyl 8.1軟件(美國(guó))Surflex-Dock模塊運(yùn)行，操作系統(tǒng)為CentOS5.0系統(tǒng)。

牛血清白蛋白(BSA)和桑色素(純度 ＞ 99%)均購(gòu)自Sigma公司。BSA溶液由Tris-HCl緩沖溶液(0.05 mol·L-1、pH = 7.4)配制。三羥甲基氨基甲烷純度高于99.9%，NaCl、HCl和DMF等為分析純，桑色素用DMF溶解。試驗(yàn)中DMF最大使用濃度為2%，該濃度下DMF對(duì)BSA沒有變性作用。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 熒光光譜

熒光猝滅光譜：移取2.5 mL 1.0 × 10-5mol·L-1的BSA溶液于1 cm的石英比色皿中，用微量進(jìn)樣器逐次加入Morin溶液，攪拌混合均勻，并延時(shí)1.5 min進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，測(cè)試溫度分別為298、303、308和313 K。激發(fā)波長(zhǎng)為280 nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍為300-450 nm。激發(fā)和發(fā)射的狹縫寬度均為2.5 nm。據(jù)上述方法，測(cè)定BSA與Morin在不同摩爾比情況下的熒光強(qiáng)度。

同步熒光光譜：采取同步掃描模式，激發(fā)掃描起始波長(zhǎng)為230 nm，發(fā)射光譜掃描起始波長(zhǎng)為290 nm，Δλ分別為15和60 nm。室溫條件下，測(cè)定BSA溶液以及BSA溶液與Morin在不同摩爾比情況下的同步熒光光譜。

2.2.2 紫外-可見吸收光譜

室溫條件下在210-500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定BSA溶液(1.0 × 10-5mol·L-1)和Morin溶液(1.0 ×10-5mol·L-1)的吸收光譜，以及BSA與Morin摩爾比為1 : 1時(shí)的吸收光譜。

2.2.3 圓二色譜

室溫條件下采用Jasco J-810圓二色光譜儀測(cè)定BSA-Morin混合體系的CD光譜。BSA濃度為1.0 ×10-5mol·L-1，Morin濃度為0、1.0 × 10-5、2.0 × 10-5、4.0 × 10-5mol·L-1。掃描波長(zhǎng)范圍為200-260 nm。用Tris-HCl緩沖溶液作為空白參比，從樣品光譜圖中扣除。

2.2.4 分子對(duì)接

BSA的晶體結(jié)構(gòu)信息由Protein Data Bank(PDB)獲取，結(jié)構(gòu)編號(hào)為3v0319。采用GaussView軟件構(gòu)建Morin分子并優(yōu)化其構(gòu)型。應(yīng)用選擇BSA中配體的方法，定義對(duì)接原型分子。

3 結(jié)果與討論

3.1 熒光猝滅機(jī)制及猝滅常數(shù)

熒光猝滅現(xiàn)象指熒光分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用，造成熒光強(qiáng)度降低、消失或熒光強(qiáng)度與濃度不呈現(xiàn)線性關(guān)系20,21。圖2給出了在298-313 K溫度條件下，Morin與BSA相互作用的熒光猝滅光譜。可以看出，隨著Morin的不斷加入，BSA的熒光峰強(qiáng)度均明顯降低，并且其降低程度隨Morin濃度增加呈一定的規(guī)律性，表明Morin能有效地與BSA發(fā)生相互作用22。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)隨著Morin的加入，BSA的最大發(fā)射波長(zhǎng)并沒有明顯的變化，表明BSA生色基團(tuán)周圍微環(huán)境的極性改變不大23。

圖2 298-313 K溫度下Morin-BSA體系熒光光譜Fig. 2 Fluorescent spectra of BSA in presence of Morin at 298-313 K.c(BSA) = 1.0 × 10-5 mol·L-1; 105c(Morin)/(mol·L-1), A-N: 0.0, 0.4, 0.8,1.2, 1.6, 2.0, 2.4, 2.8, 3.2, 3.6, 4.0, 4.4, 4.8, 5.2, respectively.a: 298 K; b: 303 K; c: 308 K; d: 313 K.

圖3 298-313 K溫度下BSA-Morin體系Stern-Volmer關(guān)系圖Fig. 3 Plots of Stern-Volmer equation of BSA-Morin system at 298-313 K.

大量的研究表明通過測(cè)定溫度對(duì)粘度或結(jié)合常數(shù)的影響可以區(qū)分熒光分子熒光猝滅機(jī)制24,25：靜態(tài)猝滅過程KSV隨溫度升高而降低，動(dòng)態(tài)猝滅過程KSV隨溫度升高而升高26。基于此，我們對(duì)圖2中各濃度下的峰值按Stern-Volmer方程27分析：

式中F0和F指有無猝滅劑時(shí)體系熒光強(qiáng)度；KSV為猝滅常數(shù)；[Q]為Morin的濃度；kq為BSA的猝滅速率常數(shù)；τ0為不存在猝滅劑時(shí)生物BSA的平均熒光壽命。根據(jù)文獻(xiàn)28報(bào)道，生物大分子的熒光平均壽命為10-8s。由圖3可以看到，Morin對(duì)BSA的熒光猝滅作用并不能在所有的濃度范圍內(nèi)都呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，但其在低濃度范圍內(nèi)(0-2.4 μmol·L-1)具有良好的線性關(guān)系(線性相關(guān)系數(shù)R大于0.99)。因此，我們選取低濃度的熒光數(shù)據(jù)來進(jìn)行處理，計(jì)算了不同溫度下KSV和kq，列在表1中，發(fā)現(xiàn)KSV隨溫度升高而減小，kq高于蛋白質(zhì)最大碰撞猝滅速率常數(shù)29，推斷BSA與Morin分子之間的熒光猝滅可能是由于形成了復(fù)合物的靜態(tài)猝滅過程。

表1 pH = 7.4時(shí)298-313 K溫度下BSA-Morin體系猝滅常數(shù)Table 1 Quenching constants of Morin-BSA system at 298-313 K and pH = 7.4.

為了驗(yàn)證Morin對(duì)BSA熒光的猝滅是靜態(tài)猝滅過程，分別測(cè)定了BSA、Morin單獨(dú)和混合條件下的紫外-可見吸收光譜。如圖4所示，可以發(fā)現(xiàn)BSA紫外-可見吸收光譜280 nm處的吸收峰在加入Morin之后明顯下降，表明Morin與BSA之間形成了基態(tài)復(fù)合物30，這進(jìn)一步證實(shí)了BSA與Morin之間的靜態(tài)猝滅機(jī)制。

3.2 Morin與BSA間的作用模式

靜態(tài)猝滅過程的熒光數(shù)據(jù)可以用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)函數(shù)來進(jìn)一步處理31：

式中，F(xiàn)0表示不存在Morin時(shí)BSA的熒光強(qiáng)度；ΔF表示體系在不存在Morin與Morin濃度為[Q]時(shí)的熒光強(qiáng)度的差值；KLB是Lineweaver-Burk生成常數(shù)，用來反映BSA與Morin之間的結(jié)合達(dá)到平衡時(shí)的量效關(guān)系。根據(jù)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖的直線斜率和截距進(jìn)行計(jì)算，得到KLB等相關(guān)參數(shù)，列于表2中。

圖4 Morin-BSA體系的紫外-可見吸收光譜Fig. 4 UV-Vis absorption spectra of BSA-Morin system.c(BSA) = 1.0 × 10-5 mol·L-1; c(Morin) = 1 × 10-5 mol·L-1.

表2 298-313 K溫度下BSA-Morin體系的熱力學(xué)參數(shù)Table 2 Thermodynamic parameters of the interaction at 298-313 K.

根據(jù)作用距離及偶極矩差異，可將蛋白質(zhì)與藥物小分子之間相互作用力分為范德華力、氫鍵、疏水作用力和靜電作用力；根據(jù)Ross等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，相互作用力類型可以通過相互作用熱力學(xué)參數(shù)的大小和符號(hào)來進(jìn)行判斷32。為了研究BSA與Morin的作用力類型，計(jì)算了298-313 K下的ΔH?、ΔS?、ΔG?。相互作用過程的焓變?chǔ)?和熵變?chǔ)?可以通過van't Hoff方程獲得33：

其中，R是氣體常數(shù)。ΔG?下式獲得：

如圖5所示，以lnKLB對(duì)1/T直線擬合，從斜率和截距獲得焓變?chǔ)?和熵變?chǔ)?，得到298-313 K的吉布斯自由能變?chǔ)?，結(jié)果列于表2。ΔG?小于零可得BSA與Morin的結(jié)合是自發(fā)的，負(fù)的ΔH?和ΔS?說明氫鍵和范德華力是結(jié)合驅(qū)動(dòng)力34。

3.3 Morin與BSA相互作用位點(diǎn)數(shù)

蛋白質(zhì)等生物大分子通常有相互獨(dú)立的結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)于靜態(tài)猝滅過程，藥物分子在蛋白質(zhì)上的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)可以由熒光強(qiáng)度-藥物濃度間對(duì)數(shù)關(guān)系式求出35：

圖5 BSA-Morin體系的van't Hoff曲線Fig. 5 van't Hoff plot for BSA-Morin system.

式中F0和F分別表示不存在和存在Morin時(shí)BSA的熒光強(qiáng)度；[Q]為Morin的濃度，Kapp和n是表觀結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。

由上式擬合，從直線斜率和截距求出Morin與BSA相互作用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n及表觀結(jié)合常數(shù)Kapp，列于表3。可以發(fā)現(xiàn)Morin與BSA平均結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(naverage)為1.20，且溫度對(duì)結(jié)合位點(diǎn)數(shù)的影響不大，說明Morin與BSA之間基本上是1 : 1結(jié)合，有一個(gè)較強(qiáng)的結(jié)合位點(diǎn)。同時(shí)，Morin-BSA體系的表觀結(jié)合常數(shù)達(dá)到104數(shù)量級(jí)，進(jìn)一步證實(shí)了Morin與BSA之間存在強(qiáng)的結(jié)合，表明了血清白蛋白在體內(nèi)能起到儲(chǔ)存和運(yùn)輸Morin分子的作用，能使Morin分子通過血液循環(huán)達(dá)到作用部位，從而發(fā)揮其生理生化效應(yīng)。

3.4 Morin與BSA結(jié)合距離的計(jì)算

藥物分子與蛋白質(zhì)的結(jié)合距離可以利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移理論(Fluorescence Resonant Energy Transfer，F(xiàn)RET)進(jìn)行計(jì)算，其猝滅程度滿足下式36：

式中，E表示蛋白質(zhì)和藥物分子之間能量轉(zhuǎn)移效率；r指供體、受體真實(shí)距離；R0指50%轉(zhuǎn)移效率時(shí)臨界距離37：

在上式中，K2為偶極方向空間因子，n表示介質(zhì)的平均折射率38。φ為熒光殘基的熒光量子產(chǎn)率，J為光譜重疊積分，即：

F(λ)為蛋白質(zhì)在波長(zhǎng)λ處熒光強(qiáng)度，ε(λ)指藥物分子在λ處摩爾消光系數(shù)。圖6為Morin與BSA的濃度均為1 × 10-5mol·L-1時(shí)，Morin-BSA體系的發(fā)射光譜。將發(fā)射光譜與吸收光譜重疊區(qū)域按上式計(jì)算，得到J = 1.82 × 10-14cm3·L·mol-1。K2取2/3，n取有機(jī)物平均值1.36，色氨酸量子產(chǎn)率為φ = 0.1539，求出臨界距離R0為3.47 nm，由此求得色氨酸與Morin分子間平均距離r為3.09 nm?？梢?.5R0＜ r ＜ 1.5R0，說明BSA與Morin分子間符合熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)。

表3 Morin-BSA體系的表觀結(jié)合常數(shù)及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)Table 3 The apparent binding constants and binding site numbers of Morin-BSA system.

圖6 BSA和Morin的熒光光譜Fig. 6 Fluorescence spectra of BSA-Morin system.[BSA] = 1.0 × 10-5 mol·L-1, [Morin] = 1.0 × 10-5 mol·L-1.

3.5 Morin對(duì)BSA構(gòu)象的影響

3.5.1 同步熒光光光譜

蛋白質(zhì)最大發(fā)射波長(zhǎng)與其熒光氨基酸殘基周圍的微環(huán)境密切相關(guān)，因此可以通過同步熒光光譜研究蛋白質(zhì)發(fā)光基團(tuán)構(gòu)象變化。當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的波長(zhǎng)差固定為15和60 nm時(shí)，可以分別得到酪氨酸和色氨酸殘基周圍微環(huán)境改變的信息40。如圖7所示，隨著Morin的加入，酪氨酸殘基的最大發(fā)射波長(zhǎng)基本上保持不變(最大發(fā)射波長(zhǎng)保持在288 nm)，表明Morin的加入對(duì)酪氨酸殘基所處微環(huán)境基本上沒有影響；色氨酸殘基的最大發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)生了微弱的紅移(最大發(fā)射波長(zhǎng)從281 nm紅移至284 nm)，表明Morin的加入對(duì)色氨酸殘基所處微環(huán)境的極性有一定的增強(qiáng)。與戚祖德等人的報(bào)導(dǎo)相比，可以發(fā)現(xiàn)Morin與HSA和BSA的作用機(jī)制存在一定的差異：Morin在HSA上的結(jié)合位點(diǎn)位于亞結(jié)構(gòu)域II A，與HSA唯一色氨酸殘基(W214)的距離較近，導(dǎo)致W214所處微環(huán)境的疏水性發(fā)生明顯的增強(qiáng)(即極性發(fā)生減弱)，因此的HSA熒光發(fā)生明顯的紅移16。結(jié)合熒光共振能量轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)，我們認(rèn)為這可能是由于Morin在BSA中結(jié)合位點(diǎn)與BSA的兩個(gè)色氨酸距離較遠(yuǎn)，不能直接改變色氨酸附近的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)。

3.5.2 圓二色譜

圖8 BSA-Morin體系的圓二色譜圖Fig. 8 CD spectra of BSA-Morin system.MRE: mean residue ellipticity. c(BSA) = 1.0 × 10-5 mol·L-1;105 c(Morin)/(mol·L-1), a-d: 0, 1.0, 2.0, 4.0, respectively.

圖7 Morin與BSA相互作用的同步熒光光譜Fig. 7 Synchronous fluorescent spectra of BSA-Morin system.Left, Δλ = 15 nm; right, Δλ = 60 nm. Δλ = 60 nm, c(BSA) = 1.0 × 10-5 mol·L-1;105c(Morin)/(mol·L-1), A-N: 0.0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0, 2.4, 2.8, 3.2, 3.6, 4.0, 4.4, 4.8, 5.2, respectively.

表4 Morin作用下BSA各二級(jí)結(jié)構(gòu)百分比Table 4 Fractions of different secondary structures of BSA bound with Morin.

使用圓二色譜可以進(jìn)一步研究Morin對(duì)BSA構(gòu)象的改變(圖8)。BSA在遠(yuǎn)紫外區(qū)表現(xiàn)出兩個(gè)明顯的負(fù)峰譜帶(208和222 nm)，為典型的蛋白質(zhì)α-螺旋結(jié)構(gòu)的特征峰。隨著Morin濃度增加，BSA特征峰的強(qiáng)度顯著降低，且降低幅度與Morin濃度正相關(guān)，說明Morin對(duì)BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了破壞。表4列出了SELCON 3軟件分析得到的不同Morin濃度條件下BSA各二級(jí)結(jié)構(gòu)的含量17?？梢园l(fā)現(xiàn)，當(dāng)[Morin] : [BSA]為4 : 1時(shí)，蛋白質(zhì)α-螺旋百分比從59.5%下降到53.9%，而無規(guī)結(jié)構(gòu)的比例從20.6%上升到23.7%，說明BSA分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)在Morin的作用下有所破壞25。同時(shí)，加入Morin前后，BSA的CD光譜基本形狀變化不大，表明Morin和BSA發(fā)生相互作用后，BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)還是以α-螺旋為主。

3.6 分子模擬

圖9 (a) Morin在位點(diǎn)II對(duì)接構(gòu)象；(b) Morin周圍0.5 nm范圍內(nèi)的氨基酸殘基Fig. 9 (a) Docking poses of Morin in site II;(b) the nearest residues around Morin within 0.5 nm.

黃酮類化合物在血清白蛋白亞結(jié)構(gòu)域II A(site I)和亞結(jié)構(gòu)域III A (site II)的結(jié)合均有報(bào)道41，且黃酮類化合物的官能化對(duì)結(jié)合位點(diǎn)的影響較大42；之前的研究則表明Morin結(jié)合在HSA的site I位點(diǎn)16。圖9a給出了Morin-BSA體系的最低能量結(jié)構(gòu)。Morin的結(jié)合區(qū)域位于Ibuprofen位點(diǎn)，即site II。Morin與BSA兩個(gè)色氨酸殘基(W134和W213)的質(zhì)心距離分別為3.70和2.06 nm，這與熒光共振能量轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)的計(jì)算出的結(jié)果相符。圖9b顯示了Morin附近的氨基酸殘基，包括：L410、N414、L430、F426、R433、K437、L453、V456、G457、T472和S512，可以發(fā)現(xiàn)Morin主要與周圍疏水性的氨基酸殘基的支鏈發(fā)生接觸。此外，可以觀察到Morin分子上的羥基與R413、K437的側(cè)鏈間氫鍵的產(chǎn)生，與熱力學(xué)結(jié)果相符。

4 結(jié)論

熒光光譜和紫外-可見光譜結(jié)果表明Morin對(duì)BSA熒光的猝滅是靜態(tài)猝滅過程；計(jì)算出的焓變和熵變說明Morin與BSA結(jié)合的驅(qū)動(dòng)力主要是氫鍵和范德華力。根據(jù)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)理論和分子模擬結(jié)果，Morin在BSA上的結(jié)合位點(diǎn)位于亞結(jié)構(gòu)域III A的位點(diǎn)II，且Morin分子與BSA兩個(gè)色氨酸殘基之間的平均距離為3.09 nm。Morin分子與BSA分子的結(jié)合會(huì)導(dǎo)致BSA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，其α-螺旋含量降低，無規(guī)結(jié)構(gòu)比例上升。

黃酮類化合物與血清白蛋白的結(jié)合往往是自發(fā)進(jìn)行的，熒光猝滅類型通常是靜態(tài)猝滅，但其結(jié)合驅(qū)動(dòng)力卻存在一定的差異。例如，槲皮素、橙皮素、甲基橙皮素與HSA的結(jié)合驅(qū)動(dòng)力為靜電作用力43，而血竭總黃酮tFSD與HSA的相互作用以非靜電作用為主44，這表明黃酮類化合物取代基的種類和位置對(duì)其與生物大分子的相互作用有較大的影響。

BSA的氨基酸序列與HSA非常類似，二者同源性約為80%，因此其空間結(jié)構(gòu)也十分相近，然而本文獲得的結(jié)合熱力學(xué)參數(shù)表明Morin與HSA及BSA的相互作用類型存在一定的差異。根據(jù)戚祖德等人16的數(shù)據(jù)，Morin與HSA的結(jié)合自由能比BSA更大(298 K條件下ΔG?分別為-29.5和-27.1 kJ·mol-1)，表明Morin與HSA之間的結(jié)合更強(qiáng)。同時(shí)，Morin與HSA相互的ΔH?和ΔS?均大于0，因此其相互作用力類型為疏水作用力，說明Morin與HSA和BSA之間的相互作用力類型也具有明顯的差異。分子模擬結(jié)果表明：這可能是由于Morin在HSA和BSA分子上的結(jié)合位點(diǎn)不同導(dǎo)致的，即Morin傾向于結(jié)合在HSA的亞結(jié)構(gòu)域II A的位點(diǎn)I上16；而與BSA結(jié)合時(shí)，則結(jié)合在BSA的亞結(jié)構(gòu)域III A的位點(diǎn)II。這些研究結(jié)果為了解桑色素分子的藥理提供基礎(chǔ)知識(shí)，為設(shè)計(jì)、修飾和篩選黃酮類藥物分子提供有益的啟發(fā)與指導(dǎo)。