周光姣， 黃 翔， 馮學(xué)花

（1.安徽中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州236800；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥230031；4.新華學(xué)院，安徽 合肥230031）

復(fù)方五花顆粒由葛花、菊花、槐花、白扁豆花、金銀花5 味藥材組成，是在中藥成方制劑第十冊(cè)（WS-3B-1962-95） 中金菊五花茶顆?；A(chǔ)上加減而成的中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)方［1］，具有清熱化濕、解酒醒脾、降血脂之功效［1-3］，臨床上用于高血脂、醒酒，效果顯著。但原方金菊五花茶顆粒以湯劑形式服用，存在給藥劑量大、口感差等缺點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代提取和制粒技術(shù)將其制成顆粒劑——復(fù)方五花顆粒，并采用響應(yīng)面法優(yōu)化其制備工藝，為后期相關(guān)新藥開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器 UV752PC 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海奧析科學(xué)儀器有限公司）；FA2204 電子天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；YK-60 搖擺式制粒機(jī)、RXH-5-C 熱風(fēng)循環(huán)烘干箱（上海天祥藥械制造廠(chǎng)）。

1.2 試藥 金銀花、菊花、槐花、葛花、白扁豆花購(gòu)自亳州三義堂中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院劉耀武教授鑒定均為正品?？扇苄缘矸郏ㄌ旖蚴锌泼軞W化學(xué)試劑有限公司）；甘露醇、糊精（安徽淮南山河藥業(yè)有限公司）；乳糖（南京高溯生物科技有限公司）；阿司帕坦（山東西亞化學(xué)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 制粒方法篩選 預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇濕法、干法、流化制粒來(lái)制備顆粒，發(fā)現(xiàn)由于五花干膏易吸潮，遇水黏性大，故干法制粒不易控制和操作；流化制粒易出現(xiàn)“坐鍋” 現(xiàn)象，成型性不理想，制粒參數(shù)亦不易控制，故確定采用濕法制粒。

2.2 五花稠浸膏制備 按前期優(yōu)選出的最佳提取工藝，煎煮法提取后合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.32 ～1.33 的稠浸膏，即得。

2.3 輔料篩選

2.3.1 稀釋劑2.3.1.1 成型性 將顆粒依次過(guò)1、5 號(hào)篩，收集能過(guò)1號(hào)篩而不能過(guò)5 號(hào)篩者，稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算成型率，公式為成型率=過(guò)篩后顆粒質(zhì)量／過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100%。

2.3.1.2 吸濕率［4-5］將顆粒放入盛有干燥劑的干燥器內(nèi)至恒重，再將提前配制好的氯化鈉過(guò)飽和溶液（250 mL）倒入玻璃干燥器的底部至恒溫，此時(shí)相對(duì)濕度為75%。精密稱(chēng)取恒重過(guò)的顆粒3 g，均勻放入恒重的稱(chēng)量瓶中，打開(kāi)稱(chēng)量瓶蓋，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中保存，在3、12、24、36、48、96 h 稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算吸濕率，公式為吸濕率=［（吸濕后質(zhì)量-吸濕前質(zhì)量） ／吸濕前質(zhì)量］ ×100%，結(jié)果見(jiàn)表1。由表可知，放置36 h 后吸濕率變化不大，基本平穩(wěn)，故選擇36 h 吸濕率。

表1 顆粒吸濕率測(cè)定結(jié)果（%）

2.3.1.3 流動(dòng)性［6］采用休止角衡量，采用漏斗法測(cè)定。將3 只漏斗串聯(lián)，并固定在水平放置的坐標(biāo)紙上面1 cm處，將顆粒緩慢沿邊緣倒入最上方漏斗，直到顆粒錐體頂端接觸漏斗口為止，觀(guān)察坐標(biāo)紙上顆粒圓錐體有最大高度h 時(shí)圓錐半徑r，計(jì)算休止角α，公式為tgα=h／r。

2.3.1.4 溶化性 取顆粒10 g，加200 mL 熱水?dāng)嚢? min，立即觀(guān)察溶化結(jié)果。

2.3.1.5 綜合分析 表2 顯示，甘露醇、乳糖制粒效果較好，其中前者所制顆粒成型率最高，后者吸濕率最低，故選擇兩者作為混合稀釋劑。

表2 稀釋劑考察結(jié)果（n=3）

2.3.2 矯味劑 由于五花浸膏味苦并有一定澀感，直接制成顆粒時(shí)口感欠佳，故需加入矯味劑以提高口感。考慮到肥胖人群和糖尿病患者，選擇阿司帕坦作為矯味劑［7］，然后以20 名健康受試者人工評(píng)價(jià)為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行口感評(píng)分，見(jiàn)表3。

表3 口感評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇混合稀釋劑與稠浸膏比例（A）、乳糖與甘露醇比例（B）、矯味劑用量（C） 作為影響因素，成型率、吸濕率、休止角、口感分值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。因素水平見(jiàn)表4。

表4 因素水平

然后，計(jì)算綜合評(píng)分，公式為綜合評(píng)分=成型率×30／最大成型率+最小吸濕率×50／吸濕率+最小休止角×10／休止角+口感分值×10／最大口感分值［8-9］，以其為響應(yīng)值（Y），通過(guò)Design-Expert8.0.5b 軟件進(jìn)行擬合，所得二次多元回歸方程為Y=98.84+0.41A-0.36B-0.54C+1.03AB+0.50AC-0.025BC-4.81A2-3.69B2-6.27C2，結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析見(jiàn)表6。由表5 可知，因素A、C、AC、A2、B2、C2具有顯著影響（P＜0.05），各因素影響程度依次為C＞A＞B；由表6 可知，回歸模型P＜0.000 1，表明該模型具有顯著性，同時(shí)R2=0.984 1，失擬項(xiàng)P＞0.05，表明擬合度良好，可用于預(yù)測(cè)分析。

再通過(guò)Design-Expert8.0.5b 軟件進(jìn)行響應(yīng)面分析，見(jiàn)圖1。由此確定，最優(yōu)工藝為混合稀釋劑與稠浸膏比例4.03 ∶1，乳糖與甘露醇比例1.48 ∶2，矯味劑用量0.25%，綜合評(píng)分97.076 4，考慮到操作方便，最終將其修正為混合稀釋劑與稠浸膏比例4 ∶1，乳糖與甘露醇比例1.5 ∶2，矯味劑用量0.25%。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 取相對(duì)密度1.32（25 ℃） 的五花稠浸膏3 批 （批號(hào)20181601、20181602、20181603），按 “2.4”項(xiàng)下優(yōu)化工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7，可知工藝合理可行。

表5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表6 方差分析

表7 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

圖1 各因素響應(yīng)面圖

3 討論

3.1 稠浸膏相對(duì)密度選擇 稠浸膏相對(duì)密度過(guò)小，會(huì)缺乏黏性，而且制粒輔料比例和使用劑量增加；相對(duì)密度過(guò)大，黏度過(guò)大，不易測(cè)定。因此，將其控制在1.32～1.33 范圍內(nèi)較適宜。

3.2 輔料選擇 復(fù)方五花顆粒是可溶性顆粒，故在考察稀釋劑時(shí)選擇有較好溶解度的糖粉、甘露醇、乳糖、可溶性淀粉等，但糖粉應(yīng)用有較大限制，不適合肥胖人群和糖尿病患者，故將其排除，最終確定乳糖-甘露醇混合物。另外，由于組成藥材有一定苦澀味，故選擇阿司帕坦作為矯味劑，它為新型甜味劑甜度較高，但體內(nèi)代謝產(chǎn)物不會(huì)引起機(jī)體血糖變化，適合肥胖人群和糖尿病患者。

3.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)選擇 建立顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，由于單因素試驗(yàn)優(yōu)選的甘露醇和乳糖均為易溶輔料，而且在不同配比下均能全部溶化，故其溶化性不存在問(wèn)題，未納入評(píng)價(jià)指標(biāo)中。

3.4 優(yōu)化方法選擇 響應(yīng)面法是結(jié)合試驗(yàn)設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的方法，優(yōu)化工藝參數(shù)有效可靠，回歸方程精確，相比較傳統(tǒng)的正交試驗(yàn)更有利于找出區(qū)域內(nèi)各因素最佳組合和響應(yīng)值。因此，本實(shí)驗(yàn)將單因素試驗(yàn)與該方法相結(jié)合，可使試驗(yàn)設(shè)計(jì)更科學(xué)合理［10-11］。