左金玲 馬春婭 付麗輝 馮笑梅

1946 年 Mourant［1］最早描述了Lewis抗體（后稱Lea抗體），該抗體可凝集25%英國人的紅細胞，之后Andresen又發(fā)現了抗-Leb抗體［2］。Lewis抗體多為免疫球蛋白M（IgM），一般無明確免疫刺激，多為天然抗體。國外有學者認為，Lewis抗體在輸血中無臨床意義，有Lewis抗體的患者可以輸注37 ℃交叉配血相合的血液，而不用選擇相應抗原陰性的血液進行輸注［3］；但我國有抗-Lea和抗-Leb引起溶血性輸血反應的報道［4-5］。由于Lewis血型系統(tǒng)的抗體效價和親和力低，在日常工作中容易漏檢［6］。本院發(fā)現抗-Leb漏檢患者1例，報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例介紹 患者女性，90歲。孕4產4，既往無輸血史。2018年8月30日因“心律失常、心悸、貧血”就診本院急診科?；颊咭蛐貝?、心悸，血紅蛋白（hemoglobin，Hb）63 g/L，申請2 U紅細胞。血型為B型RhD陽性，不規(guī)則抗體篩查陰性，卡式抗人球蛋白試驗配血相合后輸注血液，次日收入急診病房。因輸注效果不理想，Hb未改善（67 g/L），又申請紅細胞2 U并重新送檢標本，發(fā)現血型正反定型不符。

1.2 試劑與儀器 單克隆抗-A（美國Immucor，批號：102154）、抗-B試劑（美國Immucor，批號：204150），反定細胞（美國 Immucor，批號：115340C），單克隆抗 -D（荷蘭 sanquin，批號：8000239913），ABO/Rh血型卡（美國強生，批號：ABR268A），2-Me樣本釋放劑（上海血液生物醫(yī)藥，批號：20177703）抗人球蛋白卡（美國強生，批號：AHC655A），抗篩細胞（美國強生，批號：3SS510Z），Bliss液（美國強生，批號：280520），十六系譜細胞（荷蘭sanquin，批號：8000250431）抗-Lea標準血清（荷蘭sanquin，批號：8000245780），抗-Leb標準血清（荷蘭sanquin，批號：8000249125），離心機（Diana，型號：DG SPID），孵育器（DiaMed-ID，型號：ID-Incubator 37 SI），血清學離心機（日本久保田，型號：KA-2200）全自動血型配血分析儀（美國強生，型號：AUTOVUE）。

1.3 ABO血型和RhD血型鑒定及結果 分別采用全自動血型分析儀和鹽水介質試管法對患者輸血前后兩次送檢的標本進行血型鑒定。全自動血型分析儀操作嚴格按照儀器說明書進行。

1.3.1 ABO血型與RhD血型試管法正定型試驗 取3支潔凈試管做好標記，按試管標記向試管中分別加入抗-A、抗-B、抗-D血清各1滴，再向每管中加入3%～5%患者紅細胞鹽水懸液各1滴，輕輕混合試管內容物，用離心機在1 000×g條件下離心15 s。

1.3.2 ABO血型試管法反定型試驗 標記3支潔凈試管，每管加入患者血漿2滴，按試管標記向試管中分別加入3%～5%的A型、B型、O型試劑紅細胞1滴，輕輕混合試管內容物，以1 000×g離心15 s。

1.3.3 結果判斷 將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細胞扣。當細胞不再附著在試管上時，繼續(xù)緩慢傾斜和震蕩，直至形成均勻的細胞懸液或凝集塊，分別記錄結果。具體操作參考文獻［7］方法。

1.3.4 血型結果 患者兩次標本的卡式血型結果分別為：8月30日卡式血型結果為正常B型RhD陽性，8月31日卡式血型結果反定B細胞出現異常凝集0.5+，試管法復查后也為正反定型不符，反定B細胞、O細胞出現異常凝集。37 ℃下孵育后凝集散開。試管法血型格局見表1。

表1 患者ABO及RhD血型鑒定試管法格局

1.4 不規(guī)則抗體篩查與抗體鑒定及結果

1.4.1 不規(guī)則抗體篩查及結果 采用直接抗人球蛋白試驗和Autovue儀器抗篩試驗檢測患者兩次送檢標本?；颊?月30日和31日的標本直接抗人球蛋白試驗均為陰性，且兩次標本Autovue儀器抗篩試驗均為陰性。應用鹽水介質試管法復查抗篩，取3支潔凈試管分別標注Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。每支試管中分別加入患者血漿2滴，再加入相應3%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞各1滴并混勻，應用血清學專用離心機1 000×g離心15 s。試管法復查抗篩結果均為陽性，患者鹽水介質試管法的抗篩反應格局見表2。

表2 鹽水介質抗篩反應格局

1.4.2 抗體鑒定及結果 取17支潔凈試管分別標注1～16管及自身管，每管加入患者血漿2滴，以及對應3%～5%的16系譜細胞各1滴，自身管加入3%～5%的患者紅細胞鹽水懸液，輕輕混勻后置于血清學專用離心機1 000×g離心15 s，觀察結果，改變溫度條件（室溫、4 ℃、37 ℃）后觀察反應并記錄，檢測結果見表3?；颊哐迮c16系譜鑒定細胞在試管中出現較強凝集反應，反應格局與圖譜對照完全符合抗-Leb抗體，說明患者體內存在抗-Leb抗體。

表3 患者血清與16系譜細胞在鹽水介質中的反應格局

1.4.3 抗體性質的鑒別 將患者血清與等量2-Me混勻，置于37 ℃水浴箱孵育0.5 h，患者卡式抗人球三系抗篩為陰性，試管法抗篩兩日結果為陽性，懷疑此抗體為IgM類抗體，2-Me破壞后血漿與三系抗篩紅細胞在試管和抗人球蛋白卡均不凝集，排除患者有IgG類不規(guī)則抗體，說明該抗體為IgM類抗體。

1.5 Lewis血型分型 用單克隆抗-Lea與抗-Leb試劑，16系譜細胞中已知格局Lea+b-，與Lea-b+作為陰陽對照，進行Lewis血型定型?；颊週ewis分型為Lea-b-。

1.6 患者血型的驗證 用抗-Leb抗原分型試劑，16系譜細胞中已知格局Leb-，與Leb+作為陰陽對照，對反定型紅細胞進行定型，A1細胞為1+，B細胞為0.5，O細胞為2+。選取分型結果為Leb-的B細胞、O細胞各2份，鹽水洗滌供者標本紅細胞3次后，制成實驗室反定型紅細胞，與患者血漿進行反定型。結果顯示，B細胞為0，O細胞為0。最終結合患者的血型結果，患者的血型可以定為B型RhD陽性。

1.7 配血與輸血 患者8月30日血型鑒定為B型RhD陽性，抗篩陰性，輸注卡式抗人球配血相合紅細胞2 U；8月31日，因鑒定出患者存在抗-Leb抗體，因此選取抗-Leb抗原陰性的供者紅細胞2 U，應用卡式抗人球與鹽水介質配血為兩種方法均相合的血液進行輸注。兩次輸注過程順利無不適。8月30日獻血者標本Lewis血型分型為Leb+。

1.8 輸注效果 雖然患者輸血過程順利，未發(fā)生輸血不良反應，未見溶血證據，但8月30日患者輸血后Hb上升后不能維持，次日Hb下降至67 g/L，提示患者體內可能存在紅細胞破壞。8月31日患者輸注Lewis血型分型一致血液后，Hb平穩(wěn)上升。見表4。

表4 患者兩次輸血前后各檢測指標的比較

2 討論

Lewis抗體多為天然IgM類抗體，多數Lewis抗體在37 ℃出現的凝集常弱于室溫反應性，或在37 ℃無活性［8］。因此一般認為無臨床意義，但也有抗-Lea引起溶血的案例報道。

本研究患者8月30日血型鑒定為B型RhD陽性，不規(guī)則抗體篩查陰性，輸注卡式抗人球配血相合紅細胞2 U。8月31日因送檢新標本發(fā)現正反定型不一致，鑒定出患者存在抗-Leb抗體，Lewis分型為Lea-b-。對8月30日所輸注紅細胞進行Lewis血型分型，結果為Leb+。結合患者為老年女性，孕4產4，推測患者體內可能曾產生抗-Leb抗體，因長時間未接受免疫刺激抗體滴度逐漸減弱，本次由于輸注了與患者Lewis分型不一致的紅細胞，導致機體產生回憶反應，從而出現輸血前后標本血型檢測不一致的情況，致8月31日送檢新標本發(fā)生反定型異常凝集。由于血型試驗無需孵育，IgM類抗-Leb抗體的最適反應溫度為室溫，故首先體現為血型檢測的正反定型不一致?？ㄊ娇谷饲蛟囼灆z測不規(guī)則抗體篩查時需37 ℃孵育，導致連續(xù)兩日的標本用卡式抗人球不規(guī)則抗體篩查均為陰性。8月30日患者輸血后Hb上升后不能維持，提示患者體內可能存在紅細胞破壞；8月31日患者輸注Lewis血型分型一致配血相合血液后Hb平穩(wěn)上升，說明第2次輸注有效。

卡式抗人球不規(guī)則抗體篩查陰性，但卡式血型反定型異常凝集時，應加做試管法血型鑒定和試管法不規(guī)則抗體鑒定，以排除IgM類不規(guī)則抗體導致的血型正反定型不一致。此次輸血效果評估提示，針對產生抗-Leb抗體的患者，實驗室人員應選取對應抗原陰性的紅細胞進行交叉配血。本例抗-Leb抗體雖未引起明顯的溶血性輸血反應表現，但其導致紅細胞輸注無效，這種輸血不良反應具有隱蔽性。因此，建議發(fā)現此類抗體后應選取無對應抗原的紅細胞進行配血，若包含IgM類抗體，建議選擇鹽水法和卡式抗人球配血均相合的血液輸注，以避免輸血反應，減少輸注無效情況，從而避免血液浪費。