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        橡膠籽苗莖腐病原菌鑒定

        2019-07-19 02:23:24蔣桂芝陶建祥
        熱帶農(nóng)業(yè)科技 2019年3期
        關(guān)鍵詞:孢子囊菌絲病原

        蔣桂芝,田 海,陶建祥

        (1.云南省熱帶作物科學(xué)研究所,云南景洪666100;2.云南天然橡膠產(chǎn)業(yè)集團江城有限公司,云南普洱665907)

        目前橡膠樹種苗繁育主要采用籽苗芽接的方法,育苗期比過去的實生苗芽接縮短1年左右。2018年6月,云南景洪橡膠育苗大棚橡膠樹籽苗出現(xiàn)莖腐?。呵o病部變黑、壞死還有凝膠,與疫霉(Phytophthorade Bary)引起的橡膠樹季風(fēng)性落葉病葉柄癥狀極為相似(圖1a)。為準確識別和防治病害,筆者進行了病原分離鑒定,現(xiàn)將鑒定結(jié)果報道如下。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        病原材料:采自云南省熱帶作物科學(xué)研究所橡膠研究中心育苗大棚內(nèi)的籽苗病莖。

        PDA培養(yǎng)基:土豆200 g,葡萄糖20 g,瓊脂17 g,水 1 000 mL。

        瓊脂培養(yǎng)基:瓊脂17 g,水1 000 mL。

        皮氏培養(yǎng)液:Ca(NO3)20.4 g,KH2PO40.15 g,Mg(NO3)20.15 g,CaCl 0.06 g,蒸餾水 1 000 mL。

        圖1 植株田間感病癥狀、接種癥狀

        試驗接種材料:由云南省熱帶作物科學(xué)研究所橡膠研究中心提供,為培育10個月生長正常的云研77-4籽苗。

        1.2 方法

        1.2.1 病原分離

        切取長度為5 cm左右的感病組織,經(jīng)75%酒精表面消毒后,用滅菌刀片切取大?。?~5)mm×(3~5)mm病健交界組織,置于PDA平板上,在25℃室溫下培養(yǎng)3 d。長出菌落后,用滅菌針挑取少量菌絲置于另一個PDA平板上,在25℃室溫下培養(yǎng)5 d形成菌落,再從中挑取少量菌絲置于瓊脂平板上,在25℃室溫下培養(yǎng)36 h,顯微鏡下進行單菌絲分離,在25℃室溫下培養(yǎng)5 d得到純培養(yǎng)菌,用于致病性測試和形態(tài)鑒定。

        1.2.2 致病性測試

        培養(yǎng)好的菌種用滅菌刀片劃成大小約5 mm×5 mm的菌塊備用。將準備好接種的橡膠籽苗莖干用自來水清洗1次,待莖干上的水分干后,用大頭針在莖干上扎3個小孔,品字排列,孔距3~5 mm,然后將備好的菌塊有菌絲的一面貼在小孔上,用無菌濕棉保濕2 d,5~7 d后觀察接種點感病情況。當(dāng)接種點出現(xiàn)與田間一致的感病癥狀后再進行病原分離,得到與接種菌一致的菌即確認為病原菌。

        1.2.3 病原鑒定

        根據(jù)菌落和孢子囊的形態(tài)特征、適宜溫度,并參照《疫霉菌及其研究技術(shù)》等資料進行鑒定。

        1.2.3.1 菌落形態(tài)

        將純培養(yǎng)菌轉(zhuǎn)接到新PDA平板上,在25℃室溫、自然光照條件下培養(yǎng)5 d,觀察菌落形態(tài)。

        1.2.3.2 厚垣孢子形成

        將接有病原菌的PDA平板置于25℃、室內(nèi)RH65%、自然光照下培養(yǎng)10~15 d,觀察原垣孢子的形成。

        1.2.3.3 孢子囊形成

        將凹面玻片用75%的酒精表面消毒,涼干備用。用滅菌針挑取大?。?~3)mm×(2~3)mm的菌塊置于玻片的凹面中,在凹面中加入約3 mL的皮氏培養(yǎng)液,將載有菌塊的玻片置于28℃、自然光照下在培養(yǎng)缸保濕培養(yǎng)1~2 d,觀察孢子囊的形成及形態(tài)特征。

        1.2.3.4 適宜生長溫度測試

        將純培養(yǎng)菌株擴繁后,用滅菌打孔器打成直徑5 mm的菌絲塊,將菌絲塊接種在PDA平板上,接種好的PDA 平板分別置于溫度為 5、10、15、20、25、30、33、37℃,RH 80%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d,每個處理5皿。5 d后用數(shù)顯卡尺測量菌落生長直徑,依據(jù)各處理菌落生長量確定病原菌的適宜溫度。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 病原分離

        分離樣本8個,均得到形態(tài)一致的白色菌落,用滅菌針挑取菌絲鏡檢,確定所得菌落均為同一真菌。選取1個菌落為代表菌進行單菌絲分離培養(yǎng),得到純培養(yǎng)菌,編號為XJZM20180627,用于致病性測試和病原鑒定。

        2.2 致病性測試

        籽苗莖上接種5 d后,在接種部位均出現(xiàn)與田間感病一致的癥狀(圖1b),經(jīng)病原的再分離得到與接種菌一致的菌,確認為病原菌。

        2.3 病原鑒定

        2.3.1 菌落形態(tài)

        PDA平板上的氣生菌絲生長旺盛,菌落白色(圖2a、圖2b),菌絲無色,粗細均勻,菌絲無隔,寬度4.1~5.2 μm。菌絲未見膨大。

        圖2 X J Z M 2 0 1 8 0 6 2 7菌落形態(tài)、孢子囊和孢子囊梗、厚垣孢子

        2.3.2 厚垣孢子形成

        在25℃、室內(nèi)RH65%、自然光照下培養(yǎng)10 d,鏡檢觀察到有厚垣孢子形成,厚垣孢子球形、近球形,頂生或間生,直徑25~38 μm(圖2c)。

        2.3.3 孢子囊形態(tài)特征

        在25℃、皮氏培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h產(chǎn)生孢子囊。孢子囊梗簡單合軸分枝,粗2.5~5.2 μm;孢子囊多為梨形、卵形、近圓形,少數(shù)橢圓形,大?。?3~58)μm×(30~40)μm,長寬比 1.1~1.9。孢子囊脫落,具短柄,柄長1.5~4.3 μm。孢子囊乳突突起明顯,單乳突,偶見雙乳突(圖2d)。

        2.3.4 適宜生長溫度測試

        在 5、10、15、20、25、30、33、37℃,RH 80%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d,得到不同溫度菌絲生長曲線(圖3),可以看出,菌絲生長范圍為10~33℃,適宜生長溫度15~30℃,最適生長溫度為20~25℃,最高生長溫度<33℃。

        圖1 不同溫度下菌絲生長曲線

        根據(jù)菌落、孢子囊形態(tài)及橡膠籽苗上的病狀,比較鄭小波[1]、余永年等[2]的文獻描述,鑒定該病原菌為棕櫚疫霉Phytophthora palmivoraButler。

        3 小結(jié)

        棕櫚疫霉P.palmivora是在熱區(qū)廣泛分布的疫霉種,能引起橡膠樹[3]及多種熱帶作物重要病害[4-6]。充分的高濕環(huán)境是疫霉病發(fā)生和流行的必要條件,橡膠籽苗大棚栽培就具備這樣的條件。因此,本病的防治應(yīng)注意:1)適時調(diào)整、降低大棚內(nèi)的水分和相對濕度;2)及時清除病苗;3)必要時對病區(qū)籽苗可噴霧甲霜靈、甲霜·霜霉威、疫霉凈等農(nóng)藥,能有效控制本病的發(fā)生。

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