陽(yáng)玉彪 唐桂華 鄭明愈 凌丁* 李軍成 莫文湛 胡傳水 熊飆 楊柳

(1.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣西南寧 530007；2.廣西橫縣綠健達(dá)養(yǎng)豬場(chǎng),廣西南寧 530300)

豬瘟(Classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一種傳播快、流行廣、致死性高、接觸性廣、以稽留高熱和皮膚與黏膜出血為主要特征的傳染病[1-2]。豬瘟對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展有嚴(yán)重影響,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織把豬瘟列為A類烈性傳染病,我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸醫(yī)局把豬瘟列為一類動(dòng)物疫病[1-2]。

對(duì)于豬瘟的防制,歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家以巨大的財(cái)力補(bǔ)助,通過嚴(yán)格的撲殺凈化措施來阻止豬瘟的傳播[3],我國(guó)與廣大發(fā)展中國(guó)家一樣,因?yàn)樨?cái)力不足,所以一直采用以免疫接種CSF兔化弱毒疫苗為主的綜合防控,這種措施對(duì)我國(guó)CSF的防控也起到了重要作用[4]。每年,我國(guó)出現(xiàn)一定數(shù)量的“非典型豬瘟”“溫和型豬瘟”和“母豬帶毒綜合征”,其原因除了豬自身、環(huán)境等因素外,免疫失敗也是一個(gè)重要原因[5-6],因此有效地提高豬群豬瘟免疫水平是防控豬瘟的關(guān)鍵手段。

免疫增強(qiáng)劑可以提高豬的免疫功能和增強(qiáng)豬的抗病力,與豬瘟疫苗的合理搭配可以提高豬瘟疫苗免疫效果[7]。目前,研究最熱的免疫增強(qiáng)劑之一是多糖。研究發(fā)現(xiàn),多糖密碼按一定規(guī)則排列形成信息分子,具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成,活化機(jī)體免疫系統(tǒng),影響機(jī)體免疫如細(xì)胞免疫、體液免疫、特異性和非特異性免疫的作用。按照多糖來源不同,分為真菌、植物、藻類地衣、動(dòng)物、細(xì)菌類多糖。其中真菌多糖的研究日益受到廣泛關(guān)注,其作為藥物研究、免疫增強(qiáng)劑研究分別起于20世紀(jì)50年代和60年代。作為擔(dān)子菌綱傘形科真菌的香菇,是世界名貴食藥兩用菌之一,其中最重要的一種生物活性物質(zhì)即香菇多糖,它具有免疫調(diào)節(jié)、腫瘤抑制等多種活性,且毒副作用小[8]。但是這些研究及其應(yīng)用主要在人醫(yī)領(lǐng)域,在畜牧業(yè)上的研究及其應(yīng)用主要集中在對(duì)雞的抗病免疫力、抗腫瘤、生長(zhǎng)性能方面。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中,香菇多糖的應(yīng)用研究相對(duì)較少,這限制了其作為豬瘟疫苗免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用。

因此,本研究以不同劑量的香菇多糖作為豬瘟疫苗的稀釋液,免疫28日齡健康斷奶仔豬,研究香菇多糖對(duì)豬瘟疫苗免疫效果的影響,旨在為新型豬瘟疫苗免疫增強(qiáng)劑的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

廣西橫縣綠健達(dá)養(yǎng)豬場(chǎng)未免疫豬瘟疫苗的28日齡健康斷奶仔豬。

1.2 試驗(yàn)材料

豬瘟疫苗(福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的諸穩(wěn)康,產(chǎn)品批號(hào)為2018015)；香菇多糖(金陵藥業(yè)股份有限公司即福州梅峰制藥廠生產(chǎn)的香菇多糖注射液,產(chǎn)品批號(hào)為17010201)；豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒(武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)的豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒,產(chǎn)品批號(hào)為180203)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)分組 選擇試驗(yàn)前未接種過任何豬瘟疫苗的斷奶仔豬60頭,試驗(yàn)前稱重,隨機(jī)分6組,每組10頭,第1組(空白對(duì)照組)用生理鹽水為稀釋液,第2組(對(duì)照組)用豬瘟疫苗專用稀釋液,第3、4、5、6試驗(yàn)組分別使用不同劑量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg) 作為豬瘟疫苗稀釋液,仔豬免疫后在同等條件下進(jìn)行常規(guī)的飼養(yǎng)管理,由專人管理和觀察記錄,抽血送檢。

1.3.2 血清樣品的采集 分別于免疫當(dāng)天(0d)、免疫接種后第7、14、21、28d,用5mL一次性注射器從前腔靜脈無(wú)菌采集血液3mL,于冷凍離心機(jī)以1500r/min離心10min,分離血清,將上清液移入另一新的1.5mL滅菌離心管中,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 豬瘟抗體檢測(cè) 采用ELISA檢測(cè)血清中的豬瘟抗體,嚴(yán)格按照豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒使用說明書進(jìn)行,分別測(cè)定豬瘟疫苗免疫前(0d)以及免疫后第7、14、21和28d采集的血清樣品中的豬瘟抗體水平。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行方差分析,結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組豬瘟抗體水平

表1 不同時(shí)間各組豬瘟抗體阻斷率檢測(cè)結(jié)果

表2 免疫前、后豬瘟抗體阻斷率檢測(cè)結(jié)果

圖1 免疫不同時(shí)間對(duì)豬瘟疫苗抗體阻斷率的影響

由表1、2和圖1可知,豬瘟疫苗接種第0d時(shí)各試驗(yàn)組豬瘟抗體阻斷率與對(duì)照組比較,均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；豬瘟疫苗接種后第7d和14d時(shí),各組的豬瘟抗體阻斷率平均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示,免疫后第14d、第28d,香菇多糖各劑量組的豬瘟抗體阻斷率均比豬瘟疫苗專用稀釋液稀釋組和生理鹽水稀釋組有不同程度的提高,其中第4組(0.1875mg香菇多糖)的豬瘟抗體阻斷率平均值分別比豬瘟疫苗專用稀釋液稀釋組高13.6%和12.2%。說明香菇多糖對(duì)豬瘟疫苗免疫效果有促進(jìn)作用。

2.2 各組免疫合格率

表3 各組免疫保護(hù)率

圖2 免疫不同時(shí)間對(duì)豬瘟疫苗免疫合格率的影響

由表3和圖2可知,免疫后第14d、第28d,只有第4組和第6組的免疫合格率都達(dá)到100%。

3 討論與小結(jié)

我國(guó)每年出現(xiàn)了“非典型豬瘟”、“溫和型豬瘟”和“母豬帶毒綜合征”,除了豬自身、環(huán)境等因素可導(dǎo)致這種現(xiàn)象外,免疫失敗是出現(xiàn)CSF不斷發(fā)生和流行的一個(gè)重要原因。因此,尋求一種確實(shí)有效的提高豬群豬瘟疫苗免疫抗體水平的新型免疫增強(qiáng)劑,是豬場(chǎng)防控豬瘟的關(guān)鍵手段之一。

我國(guó)資源豐富,香菇產(chǎn)量世界上最大,其香菇化學(xué)成分也豐富,藥理作用明顯,是最有開發(fā)價(jià)值的功能性食品和藥品資源之一。作為香菇中主要生物活性成分的香菇多糖,具有增強(qiáng)免疫力、抗病力等作用。香菇多糖在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用研究為其在養(yǎng)豬生產(chǎn)上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ),為畜牧業(yè)健康發(fā)展、增產(chǎn)增收發(fā)揮作用。

香菇多糖是一種宿主防衛(wèi)增強(qiáng)劑。有報(bào)道顯示香菇多糖能夠顯著增強(qiáng)雞的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化水平和血清抗體水平[9]。本研究通過用香菇多糖作為豬瘟疫苗的稀釋劑稀釋疫苗進(jìn)行免疫接種,研究香菇多糖對(duì)豬瘟疫苗的免疫效果。從試驗(yàn)結(jié)果來看,使用不同劑量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg)作為豬瘟疫苗稀釋液,免疫28日齡健康斷奶仔豬,在同等條件下進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)和管理,期間采食、飲水和排泄物均正常,未出現(xiàn)發(fā)病和死亡情況,各試驗(yàn)組仔豬生長(zhǎng)良好,說明香菇多糖對(duì)斷奶仔豬是安全的。 以不同劑量的香菇多糖(0.09375mg、0.1875mg、0.375mg、0.75mg)作為豬瘟疫苗稀釋液免疫仔豬,與常規(guī)豬瘟疫苗稀釋液相比,各試驗(yàn)組血清中的豬瘟抗體水平均有不同程度變化,表明香菇多糖具有提高豬瘟疫苗抗體水平的效果。且以第4組(0.1875mg香菇多糖)產(chǎn)生的豬瘟抗體水平最高,維持時(shí)間較長(zhǎng)。免疫后第 14d、第 28d,第 4組(0.1875mg香菇多糖)和第6組(0.75mg香菇多糖)的免疫合格率都達(dá)到100%。