馬佳文，陳 出，石德順，黃 奔

（廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530004）

隨著科技的發(fā)展，山羊的養(yǎng)殖技術(shù)不斷趨于成熟，但在山羊的繁殖技術(shù)方面還存在一些問(wèn)題，山羊產(chǎn)羊羔數(shù)量少，一般1 年2 胎或者2 年3 胎，而且山羊活體引入資金較高，最終導(dǎo)致肉羊的養(yǎng)殖成本無(wú)法得到有效降低。在畜牧業(yè)特別是肉羊生產(chǎn)中，對(duì)母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理后，可使群體母羊在同一時(shí)間段內(nèi)配種、妊娠、分娩，羔羊同一時(shí)間段內(nèi)出生、出欄，從而實(shí)現(xiàn)集約化、工廠(chǎng)化按批次生產(chǎn)肉羊，使飼養(yǎng)管理成本大幅度降低，養(yǎng)羊經(jīng)濟(jì)效益顯著提高[1]。此外，同期發(fā)情技術(shù)在羊的胚胎移植技術(shù)中是一項(xiàng)關(guān)鍵的配套技術(shù)，可使供體和受體母羊?qū)崿F(xiàn)同期發(fā)情，實(shí)現(xiàn)供、受體母羊的生理狀態(tài)一致[1]。選擇不同的同期發(fā)情和超數(shù)排卵方法對(duì)本地山羊進(jìn)行試驗(yàn)，可獲得最佳的同期發(fā)情和超數(shù)排卵方案，在此基礎(chǔ)上建立適用于本地區(qū)的同期發(fā)情和超數(shù)排卵體系，可以很好地用于本地山羊的繁殖及胚胎移植過(guò)程。

1 同期發(fā)情

同期發(fā)情是指使用外源激素人為地調(diào)控群體母畜的生殖生理周期進(jìn)程，使其在特定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情的一項(xiàng)動(dòng)物繁殖技術(shù)[2]。同期發(fā)情技術(shù)按其工作原理一般分為2 種：一種是利用前列腺素（PG）加速黃體溶解；另一種是采用孕激素類(lèi)似物延長(zhǎng)黃體時(shí)期，最終使母畜在相同時(shí)間發(fā)情。同期發(fā)情也是進(jìn)行超數(shù)排卵的前期準(zhǔn)備工作，在對(duì)山羊超數(shù)排卵之前使種群內(nèi)的未懷孕母羊集中發(fā)情可以很大程度上節(jié)約人力、物力，從而降低山羊養(yǎng)殖過(guò)程中的成本投入。

同期發(fā)情的處理方法主要為PG 法和孕激素處理法。同期發(fā)情的給藥方式分為口服法、注射法、陰道栓塞法、皮下埋植法[3-4]。目前同期發(fā)情處理常采用孕酮陰道栓（CIDR）法和2 次PG 注射法，操作程序如圖1所示。

圖1 同期發(fā)情方法

1.1 PG 法 PG 法的工作機(jī)理是PG 可以加速母畜黃體的溶解退化，結(jié)束黃體期、停止分泌孕酮；而后再使用相關(guān)促性腺激素引起母畜發(fā)情。但PG 對(duì)處于發(fā)情周期前5 d 內(nèi)的新生黃體溶解作用很弱，因此PG 法對(duì)一些母羊沒(méi)有作用，可以在10 d 后進(jìn)行第2 次PG 處理[5]。由于PG 的作用機(jī)理是溶解黃體，如果將此法處理已懷孕母羊會(huì)使其黃體期中斷、孕激素減少?gòu)亩l(fā)流產(chǎn)，所以此方法只能用于空懷母羊上。PG 法一般是在08:30—09:30 對(duì)健康生殖機(jī)能良好的母羊肌肉注射PG。

由表1 可見(jiàn)，1 次PG 法處理后的同期發(fā)情率較低，遠(yuǎn)不如2 次PG 法的效果好。雖然PG 法對(duì)山羊同期發(fā)情處理短期效果較好，成本低，操作起來(lái)簡(jiǎn)單，但PG 法效果并不穩(wěn)定，2 次PG 法的同期發(fā)情率仍在60%～88%波動(dòng)，推測(cè)可能是因藥物廠(chǎng)家、批次不同，也可能與樣本量、體況等有關(guān)；而1 次PG 法的發(fā)情效率波動(dòng)很大，可能由于大多數(shù)母羊處于新生黃體期，從而導(dǎo)致同期發(fā)情效果不好。

1.2 孕激素處理法 CIDR 法一般分為CIDR+PG 法和CIRD+PMSG（孕馬血清促性腺激素）法。由于不同激素的性質(zhì)不同及激素組合不同，同期發(fā)情率、受胎率和產(chǎn)羔率等會(huì)產(chǎn)生差異。

1.2.1 CIDR+PG 法 CIDR 放入母畜陰道內(nèi)后持續(xù)釋放孕激素，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間孕激素刺激，母畜體內(nèi)的黃體基本上都處于對(duì)PG 敏感階段，撤栓時(shí)注射PG 加速黃體退化，從而達(dá)到同期發(fā)情的目的。CIRD+PG 法是選擇生殖機(jī)理健康的母畜放置CIDR 后記為第0 天，在第12 天撤栓并肌肉注射PG。

由表2 可見(jiàn)，CIDR+PG 法的同期發(fā)情效果較好，副作用相對(duì)較小且同期發(fā)情率基本在80%以上，譚尚琴等[9]研究的同期發(fā)情率略低。張富全等[10]將PG 和CIDR 的順序調(diào)換，同期發(fā)情率大大降低，因此合理選擇激素的組合和順序很重要。

1.2.2 CIDR+PMSG 法 CIDR+PMSG 法采用孕激素持續(xù)刺激抑制卵泡發(fā)育、成熟和排卵，一定時(shí)間后再用PMSG促進(jìn)卵泡發(fā)育、成熟和排卵，使群體母畜生殖生理狀態(tài)相同。此法與CIRD+PG 法相似，不同之處是在放置陰道栓后的第12 天撤出陰道栓并肌肉注射PMSG。

由表3 可見(jiàn)，CIDR+PMSG 法的同期發(fā)情效果較好，同期發(fā)情率在80%以上，即使在山羊的非繁殖季節(jié)也能獲得較高的同期發(fā)情率。此外，此法與PG 聯(lián)用時(shí)的同期發(fā)情率可提升至90%以上，保證了絕大多數(shù)的母羊處于同一階段。雖然PMSG 的催情效果比較好，但是大劑量使用會(huì)引起黃體和卵泡共存，嚴(yán)重影響受體羊的移植妊娠率，嚴(yán)重的羊還會(huì)出現(xiàn)卵巢囊腫[13]。因此，要慎重選擇PMSG 的使用劑量，減小對(duì)羊生殖系統(tǒng)的損傷。

此外，進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)陰道栓的效果差距不大，但進(jìn)口陰道栓的同期發(fā)情率較國(guó)產(chǎn)陰道栓穩(wěn)定一些，并且掉栓率低。如果在實(shí)際生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)中遇到初產(chǎn)母畜或其他陰道比較狹窄的母畜，可能出現(xiàn)放不進(jìn)陰道栓的情況，此時(shí)可以自行制作海綿陰道栓。自制海綿陰道栓所需的材料簡(jiǎn)單且價(jià)格便宜，孕酮類(lèi)似物可以選擇左炔諾孕酮（LNG），每個(gè)海綿栓加入的藥量可以根據(jù)實(shí)際情況增減，建議添加范圍在30～50 mg。

表1 PG 法的同期發(fā)情效果

表2 CIDR+PG 法的同期發(fā)情效果

表3 CIDR+PMSG 法的同期發(fā)情效果

2 超數(shù)排卵

超數(shù)排卵處理是通過(guò)注射外源性激素排出更多可用卵泡，可降低發(fā)育卵泡的閉鎖率，增加早期卵泡發(fā)育到高級(jí)階段的數(shù)量。在當(dāng)前條件下，超數(shù)排卵仍是胚胎移植獲取大量?jī)?yōu)質(zhì)胚胎的主要途徑[17]，大部分應(yīng)用于牛、羊的生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)并且效果較好。超數(shù)排卵過(guò)程中用到的外源性激素按作用類(lèi)型大體上分為3 類(lèi)：①影響卵泡發(fā)育的激素，主要有促卵泡素（FSH）、PMSG；②對(duì)排卵具有刺激作用的激素，主要有促黃體素（LH）、人絨毛膜促性腺激素（hCG）；③起輔助調(diào)控作用的激素，主要有前列腺素（PGF2α）、孕酮（P4）、促黃體釋放激素（LRH-A3）。超數(shù)排卵是對(duì)外源性激素進(jìn)行不同組合和濃度調(diào)整，使母畜發(fā)育更多的卵泡并排出。超數(shù)排卵的方法如圖2 所示。不同超數(shù)排卵方法的效果見(jiàn)表4。

2.1 FSH 遞減法 由于FSH 在體內(nèi)的半衰期較短，所以需要多次注射并遞減劑量。目前，F(xiàn)SH 遞減法是效果比較好的超數(shù)排卵方法。FSH 遞減法是在自然發(fā)情和同期發(fā)情處理的第10～12 天早晚按照濃度梯度依次遞減的方式進(jìn)行肌肉注射，如210 IU 分為60、30、15 IU 梯度。每針間隔8～10 h，在第6 針FSH 注射的同時(shí)肌肉注射PG，之后的24 h 肌肉注射LRH-A3[26]，隔天種公羊配種2 次即可。由表4 可見(jiàn)，F(xiàn)SH 遞減法效果比較穩(wěn)定，胚胎可用率在80%以上。高文超等[20]研究發(fā)現(xiàn)，與進(jìn)口FSH 相比，國(guó)產(chǎn)FSH 超排穩(wěn)定性和胚胎可用率較低，但胚胎移植的成羔率較高。一般進(jìn)口FSH 使用的劑量比國(guó)產(chǎn)使用總劑量少，進(jìn)口FSH 在180～280 IU，國(guó)產(chǎn)FSH 在200～300 IU[27]。

圖2 超數(shù)排卵方法

綜上所述，在制定FSH 遞減法時(shí)應(yīng)根據(jù)激素產(chǎn)品選擇使用濃度。除此之外，需要根據(jù)不同地方山羊?qū)ν庠葱约に孛舾卸鹊牟煌瑏?lái)進(jìn)行藥品和總劑量的選擇。雖然FSH 減量法在實(shí)際中應(yīng)用較多，效果穩(wěn)定、無(wú)明顯不良反應(yīng)，但由于注射操作繁瑣且需要多次注射可能會(huì)導(dǎo)致山羊產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，存在一定風(fēng)險(xiǎn)。

2.2 FSH 一次注射法 FSH 一次注射法是將FSH 溶于聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中，通過(guò)緩釋物質(zhì)的緩慢釋放延長(zhǎng)FSH 在體內(nèi)的半衰期，達(dá)到與多次注射法相同的效果。Yamamoto 等[28]研究發(fā)現(xiàn)，用FSH 一次注射法對(duì)牛處理的結(jié)果優(yōu)于多次注射組。目前，F(xiàn)SH 一次注射法多用于牛的超排中，山羊中則多使用FSH 遞減法。由表4 可見(jiàn)，F(xiàn)SH 一次注射法的胚胎可用率存在波動(dòng)。此外，陳兵等[21]用此法處理4 只山羊超排效率為100%、可用胚胎回收率為68.08%，可用胚胎數(shù)與對(duì)照組（FSH 遞減法）存在顯著性差異，但胚胎回收率沒(méi)有顯著性差異。FSH 一次注射法相對(duì)于遞減法更加簡(jiǎn)單方便，更適合在實(shí)際生產(chǎn)中使用。Tríbulo 等[29]使用以透明質(zhì)酸為基礎(chǔ)的緩釋制劑（SRF）為稀釋劑對(duì)肉牛進(jìn)行超排，結(jié)果顯示單次肌內(nèi)注射和傳統(tǒng)的每日2 次注射差異不顯著，這一研究為FSH 一次注射法的推廣提供了更多可能。

表4 不同超數(shù)排卵方法的效果

2.3 PMSG 與APMSG 由于PMSG 的半衰期比較長(zhǎng)，能在血液中存在較長(zhǎng)時(shí)間，會(huì)使卵巢上出現(xiàn)第2 次卵泡發(fā)育波，產(chǎn)生高濃度的雌激素，導(dǎo)致卵巢上未排卵的卵泡數(shù)增加、黃體早期退化等問(wèn)題[23]。為了減少PMSG的影響，人們使用APMSG（PMSG 抗體）除去血液中過(guò)量的PMSG。Bindon 等[30]研究發(fā)現(xiàn)，給綿羊和牛注射PMSG 32 h 后注射APMSG 可以減少未排卵的大卵泡數(shù)量。由表4 可見(jiàn)，使用APMSG 后胚胎可用率、平均可用胚胎數(shù)均優(yōu)于單獨(dú)使用PMSG。雖然此法比PMSG 法更具有優(yōu)勢(shì)，可以減輕卵巢的不良反應(yīng)，但由于是血液注射，一般養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員需要進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)；此外，注射APMSG 過(guò)早或過(guò)晚都會(huì)影響超排效果。

2.4 FSH 和PMSG 組合法 FSH 和PMSG 組合法是利用FSH 和PMSG 共同作用刺激卵泡發(fā)育，PMSG 具有FSH 和LH 的雙重活性，2 種激素連用可以克服各自的缺點(diǎn)[31]，進(jìn)而簡(jiǎn)化超數(shù)排卵的操作步驟。具體操作步驟：山羊上次發(fā)情開(kāi)始后13～16 d 每天早上肌肉注射P4，連續(xù)注射8～12 d 或放置CIDR，在停止注射P4 或撤栓的前1 d 開(kāi)始連續(xù)4 d 早晚肌肉注射FSH（劑量遞減法），在FSH 第1 針注射的同時(shí)肌肉注射PMSG。

由表4 可見(jiàn)，F(xiàn)SH 和PMSG 組合法的胚胎可用率在70%～75%；國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口FSH 和PMSG 的效果沒(méi)有顯著性差異。在超數(shù)排卵處理后適時(shí)給予APMSG，中和外周循環(huán)中的PMSG，可減小因PMSG 半衰期較長(zhǎng)帶來(lái)的不良影響。是否可通過(guò)減少PMSG 的注射量減輕因PMSG 半衰期較長(zhǎng)帶來(lái)的影響，有待進(jìn)一步研究。

3 小 結(jié)

近些年來(lái)，迅速發(fā)展的定時(shí)輸精技術(shù)是一項(xiàng)重要的繁殖管理技術(shù)，能夠提高母畜的利用率、縮短母畜的非生產(chǎn)天數(shù)。同期發(fā)情和超數(shù)排卵將是定時(shí)輸精技術(shù)的重要輔助技術(shù)，同期發(fā)情技術(shù)為定時(shí)輸精技術(shù)做好前期準(zhǔn)備，超數(shù)排卵則為定時(shí)輸精技術(shù)的高妊娠率提供保障。目前，我國(guó)在山羊同期發(fā)情和超數(shù)排卵方面已取得不少研究成果，相關(guān)技術(shù)也得到提升。CIDR+PG 法和FSH遞減法可以獲得較好并且穩(wěn)定的同期發(fā)情和超數(shù)排卵效果；PG 法和FSH 一次注射法的處理時(shí)間最短并且人力投入較少；CIDR+PG 法和FSH 一次注射法的使用效果穩(wěn)定，較CIDR+PG 法和FSH 遞減法的人力投入更少。

以同期發(fā)情、超數(shù)排卵和定時(shí)輸精技術(shù)組合形成一整套有關(guān)山羊繁殖的操作流程，可以進(jìn)一步推動(dòng)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的集約化、批次化生產(chǎn)，顯著提高畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。