徐麒麟， 吳永勝， 朱佳文， 許禎瑩*， 邱 鐘，劉瀚揚(yáng)， 陳亞迎， 雷春龍， 邱時(shí)秀， 李 娟

（1.成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130；2.邛崍市嘉林生態(tài)農(nóng)場(chǎng)，四川成都 611130）

成華豬是四川省推廣數(shù)量較多、覆蓋地域較廣的地方優(yōu)良豬種，但由于其本身瘦肉率低，生長(zhǎng)速度慢，加之外來品種的大規(guī)模引進(jìn)和雜交利用，成華豬的規(guī)模逐漸減少，生產(chǎn)性能逐漸下降，優(yōu)良基因流失嚴(yán)重，成華豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展面臨巨大威脅（Shen 等，2016；羅成剛等，2012）。 積極開展成華豬保護(hù)與開發(fā)利用對(duì)充分發(fā)揮優(yōu)良地方品種資源優(yōu)勢(shì)具有重要意義。

蚯蚓俗稱地龍，具有活血化瘀、清熱定驚、平喘通絡(luò)、消炎止痛和抗腫瘤等多種功效，在傳統(tǒng)中醫(yī)上應(yīng)用廣泛（Luo 等，2018；Balamurugan，2007）。蚯蚓蛋白質(zhì)含量十分豐富，是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料，可以作為魚粉的替代品（邱時(shí)秀等，2012；王燕麗和李君榮，2012）。蚯蚓加工后的蚯蚓粉可以明顯提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能和免疫功能，增加經(jīng)濟(jì)效益（郭瑞萍等，2018；李娟等，2017）。蚯蚓提取物含有豐富的抗氧化酶、氨基酸、生物多糖等活性物質(zhì)，具有促生長(zhǎng)、抗炎、抗氧化、抗病等多種功效（Goodarzi等，2016）。 因此，本試驗(yàn)通過在日糧中添加不同濃度的蚯蚓提取物，研究其對(duì)成華豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、血清抗氧化及免疫功能的影響，為蚯蚓提取物在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 蚯蚓提取物由成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所研制，蚯蚓為人工飼養(yǎng)的赤子愛勝蚓（Eisenia foetida）。經(jīng)檢測(cè)分析，所制備的蚯蚓提取物中氨基酸總量 （17種）5.42%、游離氨基酸2.97%、超氧化物歧化酶（SOD）1289 IU/mL、小肽6.95%、干物質(zhì)（DM）13.5%、粗蛋白質(zhì)（CP）7.35%、粗脂肪（EE）0.41%、粗灰分（Ash）2.14%、鈣（Ca）0.47%、磷（P）0.69%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2017年9月至11月在四川省成都邛崍市嘉林生態(tài)農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行。選用胎次、體重[（45±1）kg]相近的 150 日齡成華豬公豬80頭，隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭豬。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別飼喂含 3、6、9 mL/kg蚯蚓提取物的基礎(chǔ)日糧。參照NRC（2012）豬的營(yíng)養(yǎng)需要、豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 65-2004）及豬場(chǎng)的實(shí)際飼喂水平設(shè)計(jì)日糧配方（表1）。試驗(yàn)豬為全封閉豬舍圈養(yǎng)，自由采食、飲水，其免疫、驅(qū)蟲、消毒和管理程序按豬場(chǎng)常規(guī)管理進(jìn)行。預(yù)試期7 d，正試期70 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能 分別于試驗(yàn)第1天、70天早晨進(jìn)行個(gè)體空腹稱重。每天觀察豬群生長(zhǎng)情況，記錄飼料消耗情況。根據(jù)記錄的采食量和體重計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

1.3.2 血樣采集及指標(biāo)測(cè)定 正試期第70天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2頭進(jìn)行前腔靜脈空腹采血，室溫靜置1 h后，3000 r/min離心15 min，分離血清并置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

血清生化指標(biāo)：血清總蛋白（TP）、葡糖糖含量（GLU）均采用試劑盒檢測(cè)，試劑盒分別購(gòu)自南京建成生物工程研究所和上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

血清氧化應(yīng)激指標(biāo)：乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）均采用豬ELISA試劑盒測(cè)定，試劑盒均購(gòu)自北京奇松生物有限公司。

血清免疫指標(biāo)：血清補(bǔ)體C3、免疫球蛋白A（IgA）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）均采用豬ELISA試劑盒測(cè)定，試劑盒均購(gòu)自北京奇松生物有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)分析軟件中的MEANS過程進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析，ANOVA過程進(jìn)行方差分析和Duncan's多重比較，P＜0.05表示差異顯著，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 蚯蚓提取物對(duì)成華豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組平均日增重較對(duì)照組分別提高 4.7%（P ＞ 0.05） 和 3.2%（P＞ 0.05），試驗(yàn)Ⅱ組平均日采食量較對(duì)照組提高7.3%（P＞0.05），但4個(gè)組平均日增重和平均日采食量之間差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅲ組料重比較對(duì)照組降低12.9%（P＜0.05），且顯著低于試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組（P ＜ 0.05）。

表2 蚯蚓提取物對(duì)成華豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清生化指標(biāo)的影響由表3可知，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組血清總蛋白較對(duì)照組分別提高 17.2%（P ＜ 0.05）、23.2%（P ＜0.05）和6.1%（P＞0.05）。各試驗(yàn)組血清葡萄糖與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表4可知，隨著蚯蚓提取物濃度的升高，成華豬血清中乳酸脫氫酶的水平逐漸降低，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組血清乳酸脫氫酶的水平分別降低了 54.6%（P ＜ 0.05）、77.6%（P ＜0.05）和80.0%（P＜0.05）。各試驗(yàn)組血清超氧化物歧化酶和總抗氧化能力與對(duì)照組相比差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表3 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清生化指標(biāo)的影響

表4 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清免疫指標(biāo)的影響由表5可知，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組成華豬血清中補(bǔ)體C3和IgA水平均差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組血清中抗炎因子IL-2的水平與對(duì)照組相比升高了38.7%（P＜0.05），隨著蚯蚓提取物處理濃度的升高，成華豬血清中促炎因子IL-6的水平逐漸降低，其中，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組分別降低了 29.6%（P ＞ 0.05）、42.6%（P ＜ 0.05）和 46.8%（P ＜ 0.05）。

表5 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 蚯蚓提取物對(duì)成華豬生長(zhǎng)性能的影響 豬日糧中添加蚯蚓提取物不但能夠顯著提高豬對(duì)飼料中礦物質(zhì)的消化吸收，而且還能降低豬的發(fā)病率和死亡率（羅紹奎等，2013）。陶延英（2007）研究發(fā)現(xiàn)，蚯蚓作為補(bǔ)料可提高斷奶小豬增重率65.1%。張泳楨（2016）研究發(fā)現(xiàn)，5%的蚯蚓粉代替日糧中部分豆粕豬平均日增重可提高14.61%，料重比降低12.51%。日糧中添加3%的蚯蚓粉，仔豬平均日增重可以提高11.43%，料重比降低11.44%（曾值虎，2013）。傅規(guī)玉（2006）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加4%的蚯蚓粉，育肥豬的平均日增重提高13.1%，料重比降低22.5%。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，蚯蚓提取物組平均日增重和平均日采食量與對(duì)照組差異不顯著，這與李娟（2018）在伊莎雪佛黑雞上的研究結(jié)果相一致；但本試驗(yàn)中9 mL/kg蚯蚓提取物組成華豬的料重比降低12.9%。綜上，推測(cè)蚯蚓提取物可能是提高了日糧利用率，但其分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

3.2 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清生化指標(biāo)的影響血清生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物生理代謝水平。血清中的TP可反映動(dòng)物機(jī)體本身營(yíng)養(yǎng)狀況和對(duì)蛋白質(zhì)的消化利用情況，血清TP水平上升表明蛋白質(zhì)合成代謝增強(qiáng)，將促進(jìn)蛋白質(zhì)沉積，從而提高增質(zhì)量效果（丁鵬等，2018；候海峰，2018）。 此外，血清TP含量同瘦肉率呈正相關(guān)，血清TP的升高有助于提高機(jī)體瘦肉率（孫耀貴和程佳，2013）。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，3、6 mL/kg和9 mL/kg蚯蚓提取物組血清總蛋白分別升高了17.2%、23.2%和6.1%，這與雷小文（2018）用蚯蚓液飼喂番鴨中所獲得的研究結(jié)果相一致，表明蚯蚓提取物可以提高成華豬體內(nèi)蛋白質(zhì)利用率。

3.3 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清抗氧化指標(biāo)的影響 血清LDH水平是反映動(dòng)物機(jī)體遭受應(yīng)激程度的指標(biāo)之一，正常情況下，LDH主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，機(jī)體組織細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)的LDH才會(huì)進(jìn)入血液（?，F(xiàn)琇等，2018）。 Li（2015）研究發(fā)現(xiàn)，蚯蚓提取物可以通過抑制LDH的釋放進(jìn)而保護(hù)心肌細(xì)胞免受脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，3、6 mL/kg和9 mL/kg蚯蚓提取物組血清LDH的水平分別降低了54.6%、77.6%和80.0%（P＜0.05），表明日糧中添加蚯蚓提取物能夠提高成華豬的抗氧化功能。

3.4 蚯蚓提取物對(duì)成華豬血清免疫指標(biāo)的影響IL-2是由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，又叫T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌TNF-α等其他細(xì)胞因子，促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖與分化，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，具有廣譜的免疫增強(qiáng)活性（王留，2018；Xu 等，2018；鄒云等，2014）。IL-6是一種重要的促炎因子，其可反映機(jī)體損傷的程度 （蘇家宜等，2017；荀文娟等，2016）。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，6 mL/kg蚯蚓提取物組血清中抗炎因子IL-2的水平與對(duì)照組相比升高了 38.7%（P ＜ 0.05），6 mL/kg和 9 mL/kg蚯蚓提取物組促炎因子IL-6的水平與對(duì)照組相比分別降低了42.6%和46.8%（P＜0.05），表明蚯蚓提取物可通過影響炎癥因子的表達(dá)進(jìn)而提高動(dòng)物的免疫功能。

4 結(jié)論

日糧中添加蚯蚓提取物可以降低成華豬的料重比，提高蛋白質(zhì)的利用率。蚯蚓提取物可以降低血清中LDH水平；提高抗炎因子IL-2的水平并同時(shí)降低促炎因子IL-6的水平。在本試驗(yàn)條件下，蚯蚓提取物以9 mL/kg添加量最適宜。