周 芬，吳 東，陳 勝，李 楊

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230031）

黃曲霉毒素B1（AFB1）是毒性最強(qiáng)的一種黃曲霉毒素，AFB1會(huì)破壞機(jī)體免疫機(jī)能，使動(dòng)物的內(nèi)臟器官組織受損、病變，導(dǎo)致動(dòng)物生產(chǎn)性能下降，高劑量的AFB1還可能引起動(dòng)物的死亡 （易中華等，2010；Sahoo 等 ，2001）。 龔 阿 瓊 等 （2018、2017、2015、2015）連續(xù)四年對(duì)市場(chǎng)上收集的飼料原料和豬配合飼料進(jìn)行AFB1含量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，飼料原料AFB1的檢出率分別為95.5%、100%、100%、95.4%，超標(biāo)率分別為28.5%、6.7%、7.8%、9.2%；豬配合飼料 AFB1的檢出率分別為 97.9%、100%、100%、96.2%，超標(biāo)率分別為 27.6%、25.0%、12.0%、3.8%，這表明AFB1在飼料中廣泛存在，且存在著一定的超標(biāo)隱患。目前對(duì)AFB1的研究主要集中在其對(duì)斷奶仔豬、生長(zhǎng)豬生理機(jī)能的影響上。即將上市的肥育豬，普遍認(rèn)為其耐受性要好于小豬，然而面臨上市的肥育豬直接關(guān)聯(lián)人類(lèi)餐桌上的食品安全，因此其生理狀態(tài)更需要多加關(guān)注。本試驗(yàn)選擇在肥育豬上市前一個(gè)月左右進(jìn)行純品AFB1的飼喂，旨在了解不同劑量的純品AFB1（衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)限量，5倍限量，10倍限量）對(duì)肥育豬生長(zhǎng)性能及血液、肝臟功能造成的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 AFB1購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司，純度＞99%。每日按前一日采食量確定濃度分裝于膠囊中定點(diǎn)投喂，對(duì)照組投喂空膠囊。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 選取體重為 （80±2）kg的“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交肥育豬28頭，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組7頭，分別飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加0、20、100、200 μg/kg 純品AFB1（對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組）的日糧。預(yù)飼期7 d，正式期28 d。

1.3 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)日糧為配合飼料，購(gòu)自安徽省新康飼料有限公司，水分11.7%，粗蛋白質(zhì)16.0%，粗纖維4.7%，粗灰分6.0%，總磷0.60%，鈣1.0%，AFB1為未檢出。試驗(yàn)豬為圈養(yǎng)方式，自由采食，試驗(yàn)期間每天觀察豬只狀態(tài)并統(tǒng)計(jì)日采食量，正式試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，按照試驗(yàn)豬的前一日采食量配制AFB1濃度，確保其濃度為20、100、200 μg/kg 飼料。

1.4 采樣及測(cè)定方法

1.4.1 采樣 試驗(yàn)期第29天晨飼前用真空采血管前腔靜脈采血5 mL×2，一管加入EDTA抗凝劑，冷藏立即送檢血常規(guī)；另一管不加抗凝劑，靜置半小時(shí)，4 ℃離心（3000 r/min，15 min），分離血清，分裝于1.5 mL離心管中，-20℃冰箱內(nèi)保存，3 d之內(nèi)測(cè)定血清酶活指標(biāo)。

試驗(yàn)期結(jié)束后，禁食，自由飲水12 h后，每組選取3頭豬稱(chēng)重并屠宰，取肝臟組織，冷藏送回實(shí)驗(yàn)室，用生理鹽水制成10%肝勻漿，取上清液分裝于1.5 mL離心管中，-20℃冰箱內(nèi)保存，3 d之內(nèi)測(cè)定肝臟酶活指標(biāo)；取背最長(zhǎng)肌及肝臟同一部位，冷藏送回實(shí)驗(yàn)室，測(cè)定AFB1含量。

1.4.2 生化指標(biāo)的測(cè)定 血清及肝臟中堿性磷酸酶（AKP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）均采用比色法測(cè)定，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定儀器為北京普析通用1810-DSPC紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)。

1.4.3 血常規(guī)的測(cè)定 血常規(guī)指標(biāo)：白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）和血紅蛋白（HGB），測(cè)定儀器為MEK-5216K全自動(dòng)血液分析儀。

1.4.4 AFB1的測(cè)定 AFB1采用酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自江蘇蘇微微生物研究有限公司，最低檢出濃度為 0.10 μg/kg。測(cè)定儀器為瑞士sunrise酶標(biāo)儀。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0軟件ANOVA模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，用LSD進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 AFB1含量 肥育豬肌肉中AFB1含量4組均為未檢出，肝臟中AFB1僅高劑量組有檢出，為（0.40±0.05）μg/kg。

2.2 生長(zhǎng)性能 整個(gè)試驗(yàn)期間，試驗(yàn)豬只表現(xiàn)正常，無(wú)發(fā)病死亡情況發(fā)生。從表1可知，日糧中添加AFB1肥育豬的平均日增重和平均日采食量均有所下降，其中高劑量組平均日增重比對(duì)照組下降9.1%（P＜0.01），而中、高劑量組的平均日采食量分別比對(duì)照組降低1.9%、3.3%（P＜0.01）。此外高劑量組的料重比比對(duì)照組上升7.1%（P＜0.05），低劑量組和中劑量組料重比雖有上升趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。

表1 AFB1對(duì)肥育豬生長(zhǎng)性能的影響

2.3 生理指標(biāo)

2.3.1 血常規(guī)指標(biāo) 由表2可以看出，攝入AFB1后，肥育豬血清中RBC、HGB呈上升趨勢(shì)，其中高劑量組RBC比對(duì)照組提高14.6%（P＜0.05），低、中、高劑量組HGB含量分別比對(duì)照組提高14.4%、13.6%、18.7%（P＜0.01）；WBC和 PLT均呈下降趨勢(shì)，高劑量組WBC比對(duì)照組降低了22.9%（P＜0.05），低、中、高劑量組PLT分別比對(duì)照組降低36.5%、45.0%、51.2%（P ＜ 0.01）。

2.3.2 血清和肝臟生化指標(biāo) 從表3可以得知，日糧中添加AFB1顯著提高了肥育豬血清中AKP、GOT、GPT 活性，與對(duì)照組相比，低、中、高劑量組AKP活性分別提高33.8%、65.5%、93.2%（P＜0.01），GOT 活 性 分 別 提 高 24.1% （P ＜ 0.05）、137.7%、195.5%（P ＜ 0.01），GPT 活性分別提高25.8%（P ＜ 0.05）、62.2%、131.0%（P ＜ 0.01）。 而肥育豬肝臟中AKP、GOT、GPT活性隨AFB1添加量增加呈下降趨勢(shì)，與對(duì)照組相比，低、中、高劑量組AKP 活性分別降低 19.1%（P ＜ 0.05）、42.2%、43.9%（P ＜ 0.01），GOT活性分別降低 16.9%、23.1%、25.1%（P ＜ 0.01），中、高劑量組GPT活性分別比對(duì)照組降低5.0%、6.8%（P＜0.05）。

3 討論

3.1 AFB1對(duì)肥育豬生長(zhǎng)性能的影響 AFB1屬于倉(cāng)儲(chǔ)性毒素，農(nóng)作物在生長(zhǎng)期的時(shí)候就有可能附著霉菌，條件適合的時(shí)候霉菌生長(zhǎng)繁殖，釋放毒素。我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（2017）規(guī)定肥育豬飼料中AFB1含量不得超過(guò)20 μg/kg，在實(shí)際生產(chǎn)中，AFB1高劑量的急性中毒比較罕見(jiàn)，大多數(shù)是低劑量的慢性中毒。然而大多數(shù)AFB1超標(biāo)不嚴(yán)重的飼料，僅憑肉眼無(wú)法判斷是否已經(jīng)發(fā)生霉變，肥育豬也有誤食毒素超標(biāo)飼料的可能。由本次試驗(yàn)的結(jié)果可以看出，飼喂不同劑量AFB128 d后，高劑量組豬只的平均日增重、平均日采食量以及料重比和對(duì)照組相比都有明顯差異（P＜0.05），這表明長(zhǎng)期飼喂 200 μg/kg AFB1影響了肥育豬的生長(zhǎng)速度，飼料轉(zhuǎn)化率降低，這和前人的試驗(yàn)結(jié)果一致 （姚麗欣等，2011；Rustemeyer等，2010；史瑩華等，2007）。而低劑量組和中劑量組的平均日增重和平均日采食量雖然也有所下降，但和對(duì)照組相比差異不顯著，這可能和飼喂劑量有關(guān)，也有可能是肥育豬的耐受性比較高。

本次試驗(yàn)中，高劑量組肝臟中AFB1檢出量為 （0.40±0.05）μg/kg。其余各組及肌肉中均未檢出，這可能是因?yàn)楦闻K是AFB1作用于動(dòng)物體的靶器官，動(dòng)物攝入的AFB1在肝臟中代謝，當(dāng)AFB1量超過(guò)了肝臟的代謝能力，就會(huì)在肝臟中聚集并對(duì)肝臟功能造成一定影響。

3.2 AFB1對(duì)肥育豬血液及肝臟功能的影響血液中的白細(xì)胞在機(jī)體免疫等方面起著重要的作用，血小板的主要功能是凝血和止血，以及保護(hù)血管外皮，參與內(nèi)皮修復(fù)，防止動(dòng)脈粥樣硬化。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂AFB128 d之后，試驗(yàn)豬血清中WBC和PLT有下降趨勢(shì)，且中、高劑量組與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），這表明肥育豬的免疫力、機(jī)體的凝血功能等都受到一定程度的影響，同時(shí)試驗(yàn)豬血清中RBC和HGB含量隨AFB1的添加量增加而呈上升趨勢(shì)，表明試驗(yàn)組豬血氧飽和度減低，機(jī)體缺氧，也可能是因?yàn)楦闻K和腎臟受到損傷造成紅細(xì)胞生成素非代償性增加。

肝臟是AFB1的靶器官，畜禽攝入AFB1后，毒素在肝臟中聚集，會(huì)影響肝臟的正常功能，GOT、GPT和AKP主要存在于肝臟細(xì)胞中，當(dāng)肝臟功能受到損害時(shí)，會(huì)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞破裂，胞內(nèi)酶大量釋放入血液中，血清中GOT、GPT和AKP活性明顯增高，所以，血清中GOT、GPT和AKP等活性的異常升高可以反映肝臟功能受損。史瑩華等 （2007）在生長(zhǎng)豬的日糧中添加0.1mg/kg AFB1后發(fā)現(xiàn)，血清中 GOT、GPT和AKP活性顯著上升，而肝臟中GOT、GPT和AKP活性顯著降低。李思遠(yuǎn)等（2015）也發(fā)現(xiàn)，飼料中黃曲霉毒素超標(biāo)，會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)豬不同程度的中毒，血清中GOT、GPT和AKP活性極顯著升高，且酶活性隨中毒程度的加深而上升。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組血清中GOT、GPT和AKP活性升高，肝臟中GOT、GPT和AKP活性降低，表明長(zhǎng)期采食含有AFB1的飼料，誘發(fā)了試驗(yàn)豬慢性黃曲霉毒素中毒，導(dǎo)致肝臟受到損傷，肝臟正常生理功能受到影響，且傷害隨中毒劑量加深而增加。

表3 AFB1對(duì)肥育豬血清和肝臟AKP、GOT、GPT活性的影響