張 偉， 申 壘， 劉公言， 張 斌， 楊國(guó)雨， 李 淑， 陳曉陽(yáng)， 李福昌*

（1.濟(jì)寧職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東濟(jì)寧 272000；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東省動(dòng)物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安271018）

碘是動(dòng)物機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝、生長(zhǎng)發(fā)育及繁衍后代所必需的微量元素（楊正，1998）。碘在動(dòng)物體內(nèi)主要用于合成甲狀腺素，而甲狀腺素是機(jī)體內(nèi)具有生物活性的碘化合物。飼料中缺碘會(huì)導(dǎo)致家兔皮膚增厚，毛發(fā)失去光澤，周身被毛纖維化，影響動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育（孫全文，2005）。然而，動(dòng)物食入過量碘不僅會(huì)增加飼養(yǎng)成本，導(dǎo)致機(jī)體中毒，而且會(huì)導(dǎo)致排泄量增加造成環(huán)境污染。朱衛(wèi)華和余紅梅（2000）報(bào)道，母豬缺碘會(huì)造成預(yù)產(chǎn)期推遲，所產(chǎn)仔豬體質(zhì)極弱，全身無毛或少毛，有的產(chǎn)后1～3 d內(nèi)死亡，并伴有全身皮膚水腫。奚剛等（2000）報(bào)道，在飼糧中添加0.15 mg/kg的碘可以預(yù)防母豬出現(xiàn)碘缺乏癥。 近年來，關(guān)于豬、雞、牛等畜禽對(duì)碘需要量的研究以及用鼠來研究缺碘和高碘引起的甲狀腺腫大發(fā)病機(jī)理的報(bào)道較多，但有關(guān)家兔對(duì)碘需要量的研究鮮見報(bào)道。現(xiàn)有的家兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)中，碘的需要量差異也很大。本試驗(yàn)通過研究飼糧添加不同水平碘對(duì)獺兔氮代謝、血液成分及內(nèi)臟器官發(fā)育的影響，探討獺兔適宜的碘添加水平，為我國(guó)獺兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供合理的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼糧 基礎(chǔ)飼糧參照美國(guó)NRC（1977）、De Blas和 Mateos（1998）的生長(zhǎng)兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成，其原料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。分別在基礎(chǔ)飼糧中以碘化鉀的形式添加碘，其添加水平分別為 0、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/kg， 制成碘實(shí)測(cè)水平為0.13、0.32、0.51、0.92、1.70 mg/kg 的 5 種 試 驗(yàn) 飼糧，并用制粒機(jī)將飼糧壓制成直徑約4～6 mm的顆粒飼料，在通風(fēng)干燥避光處儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理 本試驗(yàn)選取體重相近 [（1759.3±100）]g的 3月齡健康狀況良好的生長(zhǎng)獺兔200只，公母各占1/2，按性別和體重隨機(jī)分為5組，每組40個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只試驗(yàn)兔，分別飼喂碘添加水平不同的5種飼糧。試驗(yàn)兔單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間早、晚各飼喂1次。試驗(yàn)前對(duì)兔舍進(jìn)行徹底清洗和消毒，試驗(yàn)期間自然采光和通風(fēng)，自由采食和飲水，每周帶兔消毒兔舍1次。預(yù)試期7 d，正試期53 d。

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束前7 d，每組選取和該組平均體重相近的8只試兔，轉(zhuǎn)移到經(jīng)消毒處理的代謝籠內(nèi)，同樣進(jìn)行單籠飼養(yǎng)，并飼喂相應(yīng)的試驗(yàn)飼糧。在代謝籠中經(jīng)3 d調(diào)整適應(yīng)后連續(xù)4 d收集每只試兔全天的糞樣和尿樣，同時(shí)記錄每只試兔每天的采食量、排糞量和排尿量。鮮糞稱重后，一部分加10%的硫酸固氮，-20℃保存，用于糞氮含量測(cè)定。另一部分直接放在烘箱中65℃連續(xù)烘72 h后置于室溫回潮24 h，稱重即為糞樣的風(fēng)干重量，最后將4 d的風(fēng)干糞樣混合粉碎用于氨基酸含量測(cè)定。尿樣量取體積后，取一定比例放入250 mL塑料瓶中，同時(shí)加入5 mL濃硫酸固氮，最后將4 d尿樣混勻4℃保存用于尿氮檢測(cè)。

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天清晨空腹，稱重，心臟采血10 mL，置于采血管中，室溫避光靜置15 min后，3000 r/min離心10 min，分離所得血漿，置于-20℃下冷凍保存用于血液指標(biāo)測(cè)定。試兔采血后屠宰，用于測(cè)定內(nèi)臟器官發(fā)育及脂肪沉積指標(biāo)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.3.1 氮代謝指標(biāo) 飼料、糞和尿樣中氮含量采用凱氏定氮原理進(jìn)行測(cè)定，樣品測(cè)定方法根據(jù)GB/T 6432-2018飼料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定—?jiǎng)P氏定氮法進(jìn)行，氮代謝指標(biāo)計(jì)算公式如下：

可消化氮/（g/d）=食入氮-糞氮；

沉積氮/（g/d）=食入氮-糞氮-尿氮；

氮表觀消化率/%=可消化氮/食入氮×100；

氮利用率/%=沉積氮/食入氮×100；

氮生物學(xué)效價(jià)/%=沉積氮/可消化氮×100。

1.3.2 血液指標(biāo)測(cè)定 血漿中促甲狀腺激素（TSH）、甲狀腺素（T4）、游離甲狀腺素（FT4）、三碘甲狀腺原氨酸 （T3）和游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）采用酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定（上海朗頓生物科技有限公司）。

1.3.3 內(nèi)臟器官發(fā)育及脂肪沉積指標(biāo) 試驗(yàn)兔空腹12 h后稱重即為宰前活體重。屠宰后，對(duì)試驗(yàn)兔的肩部脂肪、腎周脂肪、胃周脂肪小心剝離，進(jìn)行稱重，計(jì)算各部位脂肪占宰前活體重的比例。同時(shí)小心剝離試驗(yàn)兔的肝臟、脾臟、胸腺、甲狀腺，進(jìn)行稱重，并根據(jù)以下公式計(jì)算肝臟、脾臟、胸腺、甲狀腺指數(shù)。

肝臟指數(shù)/（g/kg）=肝臟重/宰前活重；

脾臟指數(shù)/（g/kg）=脾臟重/宰前活重；

胸腺指數(shù)（g/kg）=胸腺重/宰前活重。

1.4 數(shù)據(jù)處理 用SAS 9.1.3統(tǒng)計(jì)軟件 （SAS Inst，Inc，Cary，NC，USA）中的 GLM 進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較，結(jié)果以“平均值和均方根誤差”表示，P＜0.05為差異顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧碘添加水平對(duì)獺兔氮代謝的影響 由表2可以看出，獺兔飼糧中不同碘添加水平對(duì)食入氮和沉積氮有顯著影響（P＜0.05），并在添加水平為0.8 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值；對(duì)糞中和尿中氮含量、可消化氮、氮表觀消化率和氮利用率無顯著影響（P ＞ 0.05）。

2.2 飼糧碘添加水平對(duì)獺兔血液指標(biāo)的影響由表3可以看出，獺兔飼糧不同碘添加水平對(duì)血漿中 TSH、T4、FT4和 T3含量的影響顯著 （P＜0.05），并分別在添加水平為 0.4、0.8、0.8 mg/kg 和0.8 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值，且最大值分別為0.25 mIU、15.76 μg/L、5.65 μg/L、0.71 μg/L。飼糧不同碘添加水平對(duì)獺兔血漿中FT3影響不顯著（P＞0.05）。

2.3 飼糧碘添加水平對(duì)獺兔內(nèi)臟器官發(fā)育的影響 由表4可以看出，獺兔飼糧不同碘添加水平對(duì)獺兔胸腺指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和甲狀腺指數(shù)均無顯著影響（P＞0.05）。

表4 飼糧碘水平對(duì)獺兔內(nèi)臟器官發(fā)育的影響（n=8）g/kg

2.4 飼糧碘添加水平對(duì)獺兔脂肪沉積的影響由表5可以看出，獺兔飼糧碘不同添加水平對(duì)獺兔肩部脂肪率、腎周脂肪率和胃周脂肪率沒有顯著影響（P＞0.05），其中腎周脂肪率隨碘添加水平增加呈先上升后下降的趨勢(shì)，并在添加水平為0.8mg/kg時(shí)達(dá)到最大值。

表5 飼糧碘添加水平對(duì)獺兔脂肪沉積的影響（n=8）

3 討論

動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育與體內(nèi)氮代謝有密切的關(guān)系。獺兔飼糧中的含氮物質(zhì)經(jīng)獺兔及獺兔盲腸內(nèi)的微生物的消化吸收以后，一部分用于合成獺兔體內(nèi)的蛋白質(zhì)供機(jī)體利用，另一部分隨糞便、尿液和汗液排出體外。這一系列代謝活動(dòng)構(gòu)成了家兔的氮平衡，即為家兔的氮代謝（Ahmed和Ashour，1984）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加不同水平碘有利于獺兔體內(nèi)氮沉積，并且當(dāng)獺兔飼糧中碘水平為0.8 mg/kg時(shí)，沉積率達(dá)到最高。

甲狀腺是動(dòng)物體極為重要的內(nèi)分泌器官，甲狀腺通過甲狀腺激素控制機(jī)體能量代謝、蛋白質(zhì)的合成及調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)各種激素的敏感性。碘經(jīng)過消化道吸收進(jìn)入血液，大約有65%被甲狀腺攝取后在甲狀腺過氧化物酶（TPO）作用下，氧化為碘，與甲狀腺球蛋白結(jié)合（TG）形成一碘甲狀腺原氨酸（MIT）和二碘甲狀腺原氨酸（DIT），然后在過氧化物酶作用下耦聯(lián)為四碘甲狀腺原氨酸 （T4）和三碘甲狀腺原氨酸 （T3），貯存于甲狀腺泡中（Fukuda等，1975）。垂體釋放促甲狀腺素增加時(shí)，甲狀腺釋放甲狀腺素（T3、T4）進(jìn)入血液，運(yùn)送到動(dòng)物體各個(gè)器官組織，經(jīng)脫碘酶作用后，T4轉(zhuǎn)變?yōu)門3，碘重新被釋放，經(jīng)循環(huán)被重復(fù)利用（李利和王角立，1996）。在本研究中，隨獺兔飼糧中碘添加水平的增大，獺兔血漿中TSH、T4、FT4和T3含量先增加后降低，并分別在 0.4、0.8、0.8 mg/kg和0.8 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值，且最大值分別為0.25 mIU和 15.76 μg/L、5.65 μg/L、0.71 μg/L。

脾臟和胸腺是動(dòng)物體重要的免疫器官，胸腺的主要作用是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的分化和分泌胸腺激素，主要參與細(xì)胞免疫。脾臟是動(dòng)物體最大的外周淋巴器官，含有大量免疫細(xì)胞，是免疫應(yīng)答的主要場(chǎng)所。脾臟和胸腺指數(shù)在一定程度上反映了機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。肝臟是動(dòng)物體重要的多功能器官，以代謝功能為主，參與去氧化、儲(chǔ)存肝糖原以及合成分泌性蛋白。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧不同碘添加水平對(duì)獺兔胸腺指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和甲狀腺指數(shù)沒有影響，由此推測(cè)在本試驗(yàn)飼糧中碘的最大添加量為1.6 mg/kg依然是安全的。

脂肪組織是一種代謝和內(nèi)分泌器官，在機(jī)體的能量代謝中發(fā)揮重要功能。動(dòng)物攝入的能量超出機(jī)體所需要的能量時(shí)，動(dòng)物體就會(huì)把多余的能量以脂肪的形式儲(chǔ)存在體內(nèi)，當(dāng)動(dòng)物體攝入的能量不能滿足機(jī)體的需要時(shí)，動(dòng)物體就會(huì)啟動(dòng)脂解模式，分解體內(nèi)貯存的脂肪來供能 （周順伍，1999）。動(dòng)物的脂肪組織分為棕色脂肪和白色脂肪兩大類，棕色脂肪主要分布于肩胛處，與毛細(xì)血管直接接觸，受交感神經(jīng)末梢支配，主要負(fù)責(zé)機(jī)體產(chǎn)熱，對(duì)調(diào)節(jié)動(dòng)物體溫起重要作用。白色脂肪細(xì)胞主要分布于胃周和腎周，對(duì)組織器官起襯托和保護(hù)作用，兩者共同維護(hù)體內(nèi)能量代謝穩(wěn)態(tài)（葉祖承和蔡益鵬，1994）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧不同碘添加水平對(duì)獺兔肩部脂肪率、腎周脂肪率和胃周脂肪率沒有顯著影響，因此，推測(cè)獺兔飼糧不同碘添加水平對(duì)脂肪沉積沒有影響。

4 結(jié)論

綜合本試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)，3～5月齡生長(zhǎng)獺兔飼糧碘的適宜添加量為0.8 mg/kg（飼糧中碘的實(shí)測(cè)值為 0.92 mg/kg）。