葉 寧，程朝平，楊德衛(wèi)，葉新福，鄭向華

（福建省農業(yè)科學院水稻研究所，福建福州350018）

中國幅員遼闊，水稻種植歷史悠久，習慣食用稻米。近年來，隨著中國人民生活水平的提高，越來越注重稻米中的營養(yǎng)品質。研究分析有色稻米的營養(yǎng)成分也成為育種工作者工作的一個重要環(huán)節(jié)。黃酮是廣泛存在于植物界的一大類物質，它們是色原烷或色原酮的衍生物。在稻谷中也含有黃酮類物質，尤其是有色稻（黑米和紅米）中含量更高。黃酮具有廣泛的藥理活性，具有抗菌、抗肝炎、抗氧化、抗腫瘤以及治療心腦血管疾病的作用。稻米黃酮具有清除自由基、延緩衰老、增強抗應激反應及免疫調節(jié)機能等生理功能［1-3］。黃酮類可溶于極性強的甲醇、乙醇等有機溶劑中，這些有機溶劑可以回收再利用，因為乙醇毒性較小本試驗以乙醇作為浸提劑［4，5］，以紫糯1號為試驗材料，對浸提溫度、浸提時間、料液比和恒溫搖床震蕩頻率進行研究，確定紫糯1號米黃酮提取的最佳工藝，以期為測定有色稻米的黃酮含量和篩選鑒定稻米富含黃酮的種質資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料稻谷 以福建省農業(yè)科學院水稻研究所選育的，當季種植的黑米品種“紫糯1號”為原料（曬干放置3個月后→礱成糙米→粉碎→40目過篩→備用）。

1.1.2 試劑 三氯化鋁、乙醇、 乙酸鉀（以上試劑均為分析純）、蘆丁標準品等。

1.1.3 主要儀器及設備 T6新世紀（紫外-可見光分光光度計）、恒溫搖床、離心機、FA2004電子分析天平（上海恒平科學儀器有限公司）、粉碎機、礱谷機、電熱恒溫鼓風干燥箱、循環(huán)水多用真空泵等。

1.2 方法

1.2.1 測定方法 參照蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定（中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準 NY/1295-2007）方法測定［6］。

在單因素試驗基礎上，選擇乙醇濃度、提取溫度、提取時間、液固比、搖床頻率進行正交試驗，每個因素選取4個水平（表1）。取樣品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，以空白試劑為參比，在波長420 nm處測定吸光度值。將其代入標準曲線方程計算出總黃酮的濃度。

表1 正交實驗因素設計

1.2.2 總黃酮提取的工藝流程

糙米粉→乙醇浸提→過濾→合并濾液→減壓濃縮→真空干燥→總黃酮粗品。

1.2.3 計算公式 總黃酮提取得率的計算公式為：總黃酮提取得率（%）=（C×V×100）/（1000×v×m ）。式中C為黃酮濃度（mg/mL），V為提取液定容體積（mL），v為測定液體積（mL），m為糙米粉質量（g）。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線的繪制

用移液管分別吸取蘆丁標準溶液0.1、0.5、1、2、3、4 mL置于10 mL容量瓶中，加入三氯化鋁溶液2 mL，乙酸鉀溶液3 mL，用乙醇溶液定容至刻度線，搖勻，室溫下放置30 min。標準曲線中蘆丁含量分別 為 0.002、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL。于420 nm處測定吸光度，并繪制標準曲線如圖1。

圖1 標準曲線圖

2.2 正交試驗結果與分析

從正交試驗結果可以看出（表2），乙醇濃度70%，提取時間60 min，提取溫度50℃，料液比1∶25，搖床頻率100 r/min時總黃酮提取率最高，為4.25%。還可看出該試驗方法各因素的影響順序是：料液比＞提取時間＞乙醇濃度＞提取溫度＞搖床頻率。

表2 正交試驗結果

3 結論

試驗以乙醇溶液為溶劑，對影響有色稻中總黃酮提取的5個因素進行了研究，確定了較優(yōu)的提取工藝條件是乙醇濃度70%，提取時間60 min，提取溫度50℃，料液比1∶25，搖床頻率100 r/min，此時總黃酮提取率最高為4.25%。還可看出該試驗方法各因素的影響順序是：料液比＞提取時間＞乙醇濃度＞提取溫度＞搖床頻率。此試驗確定了有色稻米總黃酮提取的最佳工藝，可用于測定不同品種有色稻的總黃酮含量，為篩選鑒定稻米富含黃酮的種質資源提供有效手段。