楊春葆，登增卓嘎，王玉林，羊海珍，扎 桑

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院農(nóng)業(yè)研究所，西藏拉薩 850032）

青稞是藏區(qū)第一大糧食作物，占西藏糧食總產(chǎn)的80%以上[1]，青藏高原高寒缺氧，降雨量少，蒸發(fā)量大，在地下水位較淺及湖泊密集的地區(qū)[2]，青稞在種子萌發(fā)階段和苗期極易遭受鹽脅迫的影響[3]。目前，雖然傳統(tǒng)育種方法可以有效提高作物耐鹽性[4]，但是對(duì)青稞的耐鹽機(jī)理研究較少，難以取得很大突破。由于植物的耐鹽機(jī)理十分復(fù)雜，涉及大量的基因表達(dá)與調(diào)控，必須不斷發(fā)掘青稞耐鹽相關(guān)基因，深入研究這些耐鹽基因的功能，明確青稞耐鹽的分子機(jī)制，為青稞耐鹽新品種選育提供基因資源。本試驗(yàn)為青稞耐鹽基因功能研究的預(yù)試驗(yàn)，篩選耐鹽青稞材料，為培育耐鹽青稞新品種和接下來(lái)青稞耐鹽基因的深入研究打下材料基礎(chǔ)，對(duì)西藏糧食增產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的改善具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)以自西藏各地收集來(lái)的1160個(gè)青稞品種作為試驗(yàn)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分種 每個(gè)材料選取30～40粒種子放入紙袋，紙袋上標(biāo)好對(duì)應(yīng)材料名稱，依照材料順序及對(duì)應(yīng)的編號(hào)序錄入電腦，制作成表格。

1.2.2 浸種 將裝有種子的紙袋15個(gè)1捆，放入尼龍網(wǎng)袋，將網(wǎng)袋放入加水的培養(yǎng)箱，保證網(wǎng)袋全部浸沒(méi)（為防上浮，可用重物壓一下）。溫度25℃，黑暗環(huán)境浸種12～15 h。

1.2.3 催芽 取出浸種的紙袋，在鐵盤上鋪上用水浸透的毛巾，將紙袋側(cè)放在毛巾上，然后在紙袋上覆蓋兩塊水浸透的毛巾。將鐵盤放入人工氣候室，恒溫24℃，黑暗環(huán)境催芽24 h。

1.2.4 播種 在32孔培養(yǎng)盤的每個(gè)孔穴上按照順序貼上對(duì)應(yīng)數(shù)字標(biāo)簽，裝入2/3的基質(zhì)。取萌發(fā)效果較好的種子放入孔穴，每個(gè)材料1個(gè)孔穴，每個(gè)孔穴播15～20粒，然后覆蓋基質(zhì)。

表1 青稞苗期耐鹽等級(jí)劃分Table 1 Classification of salt tolerance grade of highland barley at seedling stage

1.2.5 培養(yǎng) 將培養(yǎng)盤放入鐵盤中，在鐵盤中加水，保持水位在鐵盤深1/3處，使水在培養(yǎng)盤中自由上吸。調(diào)節(jié)環(huán)境溫度20～24℃，12 h光照，12 h黑暗培養(yǎng)。1周后倒出鐵盤中剩余水，換上營(yíng)養(yǎng)液，營(yíng)養(yǎng)液液面保持在鐵盤深1/3處。

1.2.6 鹽脅迫處理 青稞幼苗兩葉期時(shí)開始對(duì)其進(jìn)行鹽脅迫處理。在原營(yíng)養(yǎng)液配方中加入NaCl，使?fàn)I養(yǎng)液中NaCl濃度達(dá)到400 mmol/L。倒掉鐵盤中原有營(yíng)養(yǎng)液，加入含NaCl的新?tīng)I(yíng)養(yǎng)液，鐵盤中液面高度不變。每天拍照記錄，鹽脅迫處理10 d后開始青稞苗期耐鹽評(píng)級(jí)。

1.3 數(shù)據(jù)處理分析

采用Microsoft Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖表繪制，用SPSS22.0軟件進(jìn)行方差分析與多重比較。

2 結(jié)果與分析

鹽脅迫處理10 d后，青稞幼苗生長(zhǎng)狀況出現(xiàn)顯著差異。利用K-均值聚類算法，依據(jù)各材料幼苗在鹽脅迫下的死亡比例將各材料耐鹽性劃分為強(qiáng)、較強(qiáng)、中、較弱、弱5級(jí)[5]。1160個(gè)青稞材料中，幼苗死亡率在0～20.0%的30個(gè)，屬?gòu)?qiáng)耐鹽性材料；幼苗死亡率在20.1%～40.0%的158個(gè)，屬耐鹽性較強(qiáng)材料；幼苗死亡率在40.1%～60.0%的247個(gè)，屬中度耐鹽性材料；幼苗死亡率在60.1%～80.0%的361個(gè)，屬耐鹽性較弱材料；幼苗死亡率在80.1%～100.0%的365個(gè)，屬弱耐鹽性材料。

本試驗(yàn)按表1所示標(biāo)準(zhǔn)劃分青稞幼苗耐鹽等級(jí)，其中強(qiáng)耐鹽等級(jí)材料為30個(gè)，占全部材料比例的2.6%；耐鹽性較強(qiáng)的材料占比13.6%；中耐鹽性占比21.3%；較弱占31.1%；弱耐鹽性占31.3%。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)獲得30個(gè)苗期強(qiáng)耐鹽性青稞材料，包括品比 14、ZDM08819、ZDM08941、ZDM08951 等。 本試驗(yàn)采用NaCl濃度為400 mmol/L的營(yíng)養(yǎng)液對(duì)青稞幼苗進(jìn)行處理，調(diào)查第10天各材料幼苗死亡率，從而獲得苗期耐鹽青稞材料。由于作物不同生育時(shí)期耐鹽能力不同[6]，接下來(lái)還需進(jìn)行青稞不同生育時(shí)期耐鹽性試驗(yàn)，對(duì)本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。青稞耐鹽品種材料篩選的目的在于為耐鹽基因在青稞材料中的結(jié)構(gòu)、功能與青稞耐鹽性之間關(guān)系研究[7-9]、篩選耐鹽品種奠定一定的研究基礎(chǔ)。