摘 要：禽流感病毒作為一種人類致病性病毒，有著變異性強(qiáng)、傳播速度快以及病死率高等特征，對于人民的健康生命安全也會造成嚴(yán)重的威脅。全球范圍內(nèi)進(jìn)行禽流感疫病防控的原則在于早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早診斷跟早控制，也就要求相關(guān)部門進(jìn)行禽流感病毒檢測模式的不斷優(yōu)化與完善，并需要從病原學(xué)跟血清學(xué)兩方面入手，進(jìn)行現(xiàn)有禽流感病毒檢測方法的不斷優(yōu)化，本文主要就禽流感病毒檢測方法進(jìn)行了探究分析。

關(guān)鍵詞：禽流感;病毒檢測;方法

禽流感病毒屬于正黏病毒科的一種，可以引起禽類呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種病癥，并能夠直接感染到人體。此外禽流感病毒有著非常強(qiáng)的變異性，若未在第一時(shí)間內(nèi)得到有效的干預(yù)控制，還會造成非常嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失跟社會損失。我國作為一個(gè)人口大國，高致病性的禽流感對于人民的健康安全跟國民經(jīng)濟(jì)均會造成非常大的威脅，也就需要加強(qiáng)對禽流感病毒檢測方法的不斷強(qiáng)化與完善，來獲得良好的禽流感防控效果。

一、血清學(xué)檢測

1.血凝實(shí)驗(yàn)跟血凝抑制實(shí)驗(yàn)

該試驗(yàn)方法作為WHO在全球范圍內(nèi)常用的一種禽流感檢測方法，也是我國現(xiàn)階段禽流感檢測工作中的常見檢測手段。在進(jìn)行禽流感病毒的檢測過程中，采用血凝實(shí)驗(yàn)方法具備有特異性高以及操作簡便的應(yīng)用優(yōu)勢，但是在檢測過程中需要進(jìn)行NDV等病毒的排除，對于病毒種類也無法進(jìn)行直接的檢測。這樣就容易出現(xiàn)假陽性的檢測結(jié)果，使得禽流感檢測的準(zhǔn)確性無法得到有效保障。

2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

在禽流感病毒檢測過程中采用酶聯(lián)免疫吸附法，還有這面感性高的特征，對于抗原跟抗體均能夠起到良好的檢測效果，因此在大批血清樣本的檢測過程中也獲得了廣泛的應(yīng)用。近年來我國的ELISA檢測技術(shù)得到了迅速的發(fā)展，診斷時(shí)間以及診斷試劑也得到了一定程度的優(yōu)化。相關(guān)研究人員采用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)所制定的禽流感病毒HA蛋白，能夠?qū)υ擃愋偷那萘鞲胁《酒鸬搅己玫臋z測效果，還具有非常高的重復(fù)性跟穩(wěn)定性。

3.電化學(xué)發(fā)光免疫法

元文寶等研究人員選用了釕聯(lián)吡啶對H9亞型AIV的單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，并對生物素化多抗的最佳工作濃度進(jìn)行了優(yōu)化，進(jìn)行了臨界點(diǎn)跟反應(yīng)譜的確定，對構(gòu)建完成的方向進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明采用電化學(xué)發(fā)光免疫法能夠?qū)εR床上的禽流感病毒起到良好的檢測效果，對于H9亞型禽流感病毒的監(jiān)測以及防控工作也有著非常積極的意義。所有相關(guān)研究人員還需要加強(qiáng)對該方面的重視力度，為我國的禽流感病毒檢測工作提供一定的幫助。

4.納米熒光檢測方法

為了實(shí)現(xiàn)對禽流感病毒的有效檢測，相關(guān)研究人員還采用納米熒光方法進(jìn)行了H9亞型AIV的檢測體系，結(jié)果表明該類型的禽流感病毒在納米熒光檢測模式中能夠獲得良好的檢測效果。此外構(gòu)建完成的H9亞型納米熒光檢測具備有良好的檢測特異性，跟其他的亞型AIV病毒也無交叉性，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，可以在H9亞型禽流感病毒的檢測工作中得到有效應(yīng)用。

二、分子生物學(xué)診斷方法

1.多重PCR檢測法

在結(jié)合GenBank上已經(jīng)登錄的AIV的M基因以及NDV的F基因所合成的2對引物，能夠采用優(yōu)化反應(yīng)條件的模式，來對這幾種禽流感病毒進(jìn)行PCR檢測，并且就該檢測方法的敏感性、重復(fù)性以及特異性進(jìn)行了檢驗(yàn)。結(jié)果表明通過多重PCR檢測法的應(yīng)用，能夠?qū)@兩種病毒起到迅速準(zhǔn)確的鑒別效果，并能夠在臨床上完成這兩種病原的鑒別診斷工作，因此值得在臨床診斷上進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR

該檢測方法是在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，采用熒光物質(zhì)對每次的PCR循環(huán)產(chǎn)物量進(jìn)行測定，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行禽流感病毒的檢測工作。通過對NCBL數(shù)據(jù)庫中的亞型AIV的HA基因序列進(jìn)行分析，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行特異性引物的針對性設(shè)定，隨后構(gòu)建針對該禽流感病毒的熒光定量PCR檢測方法，能夠?qū)υ撉萘鞲胁《酒鸬搅己玫脑\斷效果。相關(guān)研究表明采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測法，還具備有非常高的檢測敏感度，對于各種AIV病毒的檢測也能夠提供良好的技術(shù)支持，還可以實(shí)現(xiàn)對外來AIV的有效監(jiān)測，避免禽流感病毒所造成的各種影響。

3.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

該技術(shù)在測定過程中不需要采用大型的儀器設(shè)備，并且具備有操作簡單、成本低廉以及檢測速度快的應(yīng)用優(yōu)勢。跟常規(guī)分子生物學(xué)方法進(jìn)行對比，該辦法具備有更高的靈敏性以及特異性，適合在基層的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室以及養(yǎng)殖場內(nèi)進(jìn)行應(yīng)用跟推廣。此外在該反應(yīng)體系中，還能夠采用優(yōu)選的凍干保護(hù)劑來進(jìn)行冷凍干燥處理，并且可以直接進(jìn)行試劑盒的制作，對后續(xù)的檢驗(yàn)工作提供良好的幫助。

三、結(jié)語

近年來我國的禽流感病毒檢測技術(shù)得到了迅速的發(fā)展，禽流感檢測手段也變得越來越多。但是不同檢測方法在應(yīng)用過程中還存在有一定的局限性，比如養(yǎng)殖場或者疫情爆發(fā)地就可以采用膠體金診斷試紙來進(jìn)行禽流感病毒的篩選工作，從而滿足禽流感病毒檢測工作的具體需求。因此在實(shí)際工作中還需要結(jié)合當(dāng)?shù)厍闆r，進(jìn)行檢測方法的合理選擇，促進(jìn)我國養(yǎng)殖行業(yè)得到更進(jìn)一步的發(fā)展。

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作者簡介：余新玲（1977-07-）女，河南確山人，本科，中級獸醫(yī)師。工作內(nèi)容及方向：動物檢疫及動物衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法。