張紅波 王燕紅

摘要? ? 建立了花椒籽油中沒食子酸丙酯的高效液相測定方法。樣品經(jīng)凝膠滲透色譜凈化、濃縮后，用C18柱為分離柱分離，以0.5%甲酸水-甲醇為流動相（體積比為1∶1），柱溫35 ℃，紫外檢測器在波長280 nm條件下檢測。結(jié)果表明，沒食子酸丙酯在0.02～0.40 mg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，R2=0.999 6，峰面積相對標準偏差為 2.09%（n=6），平均加標回收率為98.55%。該方法簡便，準確，有好的重復性，適合檢測機構(gòu)日常檢測。

關(guān)鍵詞? ? ?花椒籽油;沒食子酸丙酯;高效液相色譜法

中圖分類號? ? TS207.3? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）09-0211-02

Abstract? ? A method for determination of propyl gallate（PG） in prickly ash seed oil was developed by high performance liquid chromatography. The samples were purified and concentrated by gel permeation chromatography. The liquid chromatographic separation was performed on a C18 column.The mobile phase was 0.5% formic acid-methanol（1∶1）with column temperature of 35 ℃，and the samples lastly detected at 280 nm through a UV detector.The results showed that the calibration curve was well linear between 0.02-0.40 mg/mL with the correlation coefficient（R2）of 0.999 6. The relative standard deviation（RSD）was 2.09%（n=6），and the average recovery was 98.55%.The method is simple and accurate，it has good repeatability，which is suitable for routine testing.

Key words? ? prickly ash seed oil;propyl gallate;HPLC

沒食子酸丙酯（Propyl Gallate，PG），又名棓酸丙酯，化學名為3，4，5-三羧基苯甲酸丙酯，是一種油溶性酚型抗氧化劑[1]。目前，油脂及其制品中最常用的合成抗氧化劑主要有二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）、特丁基對苯二酚（TBHQ）及PG[2]。PG相較于BHT、BHA及TBHQ等油溶性抗氧化劑，因其低毒、安全性高等特點而廣泛用于食用油、飼料、油炸食品、富脂餅干、罐頭及臘肉制品中，是世界衛(wèi)生組織（WTO）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）批準使用的優(yōu)良油脂抗氧化劑之一[3]。我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》（GB 2760—2011）[4]規(guī)定，PG可以在食品中限量使用，添加量一般在0.1～0.4 g/kg之間。但是，在食品中過度添加PG會對人體健康尤其是腎臟產(chǎn)生嚴重危害[5-6]，因此，必須加強食品中沒食子酸丙酯的含量監(jiān)控。目前，檢測PG的常見方法有分光光度法[7-8]、薄層法、比色法[9]及液相色譜法[10-11]，但這些方法存在靈敏度不高、樣品預處理復雜或操作繁瑣等缺點。

花椒籽油是從花椒中提取的呈香、呈味物質(zhì)的植物油，具有花椒特有的香氣和麻味[12]。萊蕪大紅袍花椒在第三屆中國農(nóng)業(yè)博覽會上被評為名牌產(chǎn)品。1971年，萊蕪被列為山東省花椒商品基地縣。1998年萊城區(qū)被命名為“中國花椒之鄉(xiāng)”。但是，關(guān)于萊蕪花椒籽油中沒食子酸丙酯的測定，尚未見詳細資料報道。本文以GPC為凈化手段，結(jié)合高效液相色譜-紫外檢測器對萊蕪花椒籽油中PG進行檢測。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試劑與儀器

1.1.1? ? 試劑。沒食子酸丙酯標準品（德國Dr.Ehrenstorfer公司，純度大于99%），甲酸（HCOOH，色譜純），甲醇（CH3OH，色譜純），乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3），環(huán)己烷（C6 H12），水來自實驗室超純水機，電導率大于18 MΩ。

1.1.2? ? 主要儀器。賽默飛高效液相色譜儀U3000，凝膠滲透色譜儀，分析天平（感應量0.1 mg）。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 色譜條件。色譜柱為C18柱（4.6 mm×250 mm）;柱溫為35 ℃;檢測波長為280 nm;進樣量為10 μL;流動相為0.5%甲酸水-甲醇（1∶1），流速為1.0 mL/min。

1.2.2? ? 標準溶液的配制。稱取PG標準品0.1 g（精確至0.1 mg），用甲醇溶解于100 mL棕色容量瓶中，配制成1 mg/mL的標準儲備液，放置于-4 ℃冰箱中避光保存。使用甲醇將該儲備液逐級稀釋為0.02、0.05、0.10、0.20、0.40 mg/mL的標準工作液。

1.2.3? ? 樣品前處理。稱取花椒籽油樣品0.5 g于10 mL容量瓶中，以乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液（體積比為1∶1）定容至刻度，待凈化。將10 mL待凈化液加入凝膠滲透色譜（GPC）進樣管中在線濃縮，于40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入2 mL甲醇定容，過0.22 μm有機系濾膜，供液相色譜測定。同時做空白試驗。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 前處理條件的優(yōu)化

樣品運行前，需對全自動凝膠滲透色譜系統(tǒng)的洗脫條件進行選擇。以5.0 mL/min流速洗脫，以紫外檢測器測油脂及PG的流出時間。由紫外吸收譜圖可知，油脂以及一些大分子物質(zhì)在7 min內(nèi)已基本分離洗脫完畢。本文最終決定采用8.5～16.0 min作為流動相收集時間。

2.2? ? 液相色譜條件的選擇

對流動相流速、檢測波長及柱溫等色譜條件進行了選擇，經(jīng)多次試驗，流動相流速為1 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫35 ℃時，分離效果及目標物的峰形都較理想。圖1為PG在最優(yōu)化色譜條件下的液相色譜圖。

2.3? ? 標準曲線繪制

按1.2.1的色譜條件，對0.02～0.40 mg/mL濃度范圍內(nèi)的標準工作液進行測定，以峰面積y為縱坐標、濃度x為橫坐標繪制線性曲線。結(jié)果顯示，在此濃度范圍內(nèi)濃度和峰面積之間有良好的線性關(guān)系。沒食子酸丙酯的標準曲線如圖2 所示，回歸方程為y=0.265 0x-0.592 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 6，檢出限為2 mg/kg，相對標準偏差為0.15%。

2.4? ? 精密度測定

取0.20 mg/mL標準溶液，按選定的試驗條件連續(xù)測試6次，結(jié)果如圖3所示，峰面積及保留時間的相對標準偏差分別為2.09%和0.22%（表1）。

2.5? ? 加標回收率測定

稱取適量樣品，按線性范圍加入一定量的沒食子酸丙酯標準物質(zhì)，按照1.2.3中的方法處理后，進行加標回收試驗。從表2可以看出，在該分析條件下沒食子酸丙酯的平均加標回收率為98.55%，相對標準偏差為2.25%，測定結(jié)果準確可靠，完全滿足日常檢測要求。

2.6? ? 樣品測定

本試驗的樣品采購于超市、飯店等場所，共計12份花椒籽油，在被測樣品中標識含有沒食子酸丙酯的樣本均有檢出，未標識含有沒食子酸丙酯的樣品均低于檢出限，按照《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》（GB 2760-2011）[4]最大使用量為0.1 g/kg的限度要求，無過量添加。

3? ? 結(jié)論與討論

本方法以0.5%甲酸水-甲醇為流動相（體積比為1∶1），紫外檢測器波長280 nm，一次進樣，10 min內(nèi)可完成花椒籽油中沒食子酸丙酯的測定，沒食子酸丙酯在0.02～0.40 mg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，R2=0.999 6，峰面積相對標準偏差為2.09%（n=6），平均加標回收率為 98.55%?？梢?，該方法精密度好、快速簡便、分離效果好，適合檢測機構(gòu)日常檢測。

4? ? 參考文獻

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作者簡介? ?張紅波（1977-），女，山東萊蕪人，副高級中藥師，從事藥品檢驗方面的工作。

收稿日期? ?2019-01-16