石連霞

摘要：目的? 觀察常見的口咽部正常菌群對肺炎支原體快速培養(yǎng)法試劑盒結果的影響，評價其臨床實用性和可靠性。方法? 用標準菌株和口咽部分離的臨床菌株作為研究對象，觀察不同細菌對培養(yǎng)結果的影響。結果? 標準菌株肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、白念珠菌在試劑盒中的培養(yǎng)陽性率分別為0，10.00%，10.00%，10.00%，20.00%，臨床分離的野生型和耐藥型草綠色鏈球菌培養(yǎng)陽性率分別為5.00%，80.00%;表皮葡萄球菌為15.00%，90.00%;肺炎克雷伯菌為25.00%，80.00%，白念珠菌為20.00%，85.00%;鮑曼不動桿菌為90.00%，100.00%。除鮑曼不動桿菌外其它四種耐藥型菌株的培養(yǎng)陽性率明顯增高。結論? 口咽部若存在耐藥菌或多重耐藥菌以及對某些抗生素有天然耐藥機制的細菌時會造成肺炎支原體快速培養(yǎng)法檢測結果出現(xiàn)假陽性，在試驗結果報告中應注意其假陽性的問題。

關鍵詞：肺炎支原體;快速培養(yǎng);假陽性

中圖分類號：R446.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.053

文章編號：1006-1959（2019）11-0171-03

Abstract：Objective? To observe the effect of common oropharyngeal normal flora on the results of the rapid culture method of Mycoplasma pneumoniae and evaluate its clinical applicability and reliability.Methods? The clinical strains isolated from standard strains and oropharynx were used as research objects to observe the effects of different bacteria on the culture results. Results? The positive rates of standard strains of Streptococcus pneumoniae， Staphylococcus aureus， Haemophilus influenzae， Escherichia coli and Candida albicans in the kit were 0， 10.00%， 10.00%， 10.00%， 20.00%， clinical The positive rates of isolated wild-type and drug-resistant S. cerevisiae cultures were 5.00% and 80.00%， respectively; Staphylococcus epidermidis was 15.00%， 90.00%; Klebsiella pneumoniae was 25.00%， 80.00%， and Candida albicans was 20.00%，85.00%; Acinetobacter baumannii was 90.00%， 100.00%. The positive rate of culture of the four drug-resistant strains except Acinetobacter baumannii was significantly increased.Conclusion If there are resistant or multi-drug resistant bacteria in the oropharynx and bacteria with natural resistance to certain antibiotics， the results of the rapid culture method of mycoplasma pneumoniae will be false positive， and the problem of false positives should be noted in the test results report.

Key words：Mycoplasma pneumoniae;Rapid culture;False positive

肺炎支原體（mycoplasma pneumonia，MP）可引起氣管支氣管炎和肺炎，學齡期兒童和青壯年是易感人群。這種感染在每3～7年間可呈現(xiàn)地區(qū)性或世界范圍的流行。由于典型或非典型病原體引起的肺炎其臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結果會不同，并且臨床常用的β內(nèi)酰胺類抗生素對肺炎支原體無效，因此肺炎支原體肺炎獲得病原學診斷非常重要[1]。研究顯示，MP感染后 IgM抗體在1周后升高，在第3周達到峰值，其診斷MP敏感性為7.4%～33.3%，在部分成年患者中MP IgM可持續(xù)陰性。因此，如果將IgM檢查作為唯一的實驗室證據(jù)并不能提供正確的信息。與PCR方法相比時，收集呼吸道標本采用培養(yǎng)法檢測MP敏感性為61.5%[2]。但是也有研究報道[3]，培養(yǎng)方法診斷MP感染時其不敏感性不能接受。國內(nèi)的一項研究報道[1]，兩種方法的陽性率沒有區(qū)別。此外，診斷參數(shù)的價值包括特異性、敏感性、陽性和陰性預測值以及陽性似然比，培養(yǎng)法是3種方法中最高的[3]。然而，較長的培養(yǎng)時間影響了其臨床應用價值。肺炎支原體快速培養(yǎng)法試劑盒其檢測原理是樣本洗脫在培養(yǎng)液中經(jīng)適宜溫度下恒溫培養(yǎng)，若標本中含有肺炎支原體則快速繁衍增殖，通過快速生長，其代謝產(chǎn)物分解葡萄糖產(chǎn)酸，使介質pH值降低，培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色即為陽性。既往研究顯示，肺炎支原體快速培養(yǎng)法比血清學檢測有更高的假陽性率，有部分假陽性樣本中能分離出一些臨床常見的口腔正常菌群或致病菌。本研究旨在利用標準菌株和臨床分離的耐藥菌研究不同細菌對MP快速培養(yǎng)法結果是否有干擾作用，以及不同采樣拭子對快速培養(yǎng)結果的影響。

1材料與方法

1.1一般資料? 選擇5株有溯源性的標準菌株和10株來自天津市寧河區(qū)醫(yī)院住院患者口咽部標本分離的臨床菌株（野生型和耐藥型菌株各5株）作為研究對象，其中革蘭陽性球菌6株，革蘭陰性桿菌6株，酵母菌3株。標準菌株來源于美國菌種保藏中心（ATCC），由天津市臨床檢驗中心提供。臨床菌株分離自住院患者呼吸道標本，所有菌株經(jīng)法國梅里埃Vitek 2compact 全自動細菌鑒定儀鑒定到種后留存?zhèn)溆?。質控菌株ATCC15531肺炎支原體購自美國MBL公司。

1.2試劑和儀器? 肺炎支原體6 h快檢試劑盒（快速培養(yǎng)法）購自武漢菁華時間科技有限公司。MJX-250BⅢ細菌培養(yǎng)箱購自天津泰斯特儀器有限公司。一次性塑料棉拭子為肺炎支原體快檢試劑盒配套產(chǎn)品，哥倫比亞血瓊脂平板購自梅里埃（上海）生物制品有限公司，念珠菌顯色平板購自鄭州安圖生物工程有限公司。

1.3方法? 將待檢菌株傳代分別接種至哥倫比亞血瓊脂平板和念珠菌顯色平板35℃孵育過夜，用無菌棉拭子挑取數(shù)個單菌落置于0.9%NaCl中制成0.5麥氏單位的菌懸液（細菌個數(shù)相當于1.5×108/ml）。肺炎支原體試劑盒樣本取材操作步驟按照說明書進行，將棉拭子在無菌生理鹽水中浸濕后沾取菌液，在試管內(nèi)壁擠壓拭子上多余的液體，然后將棉拭子放入培養(yǎng)小瓶內(nèi)攪動混勻數(shù)次，去除拭子的瓶外部分，旋緊瓶蓋（35±1）℃孵育箱中培養(yǎng)6 h，液體培養(yǎng)基由紅色變?yōu)榍辶恋狞S色為陽性。培養(yǎng)液不變色或變淡為陰性，培養(yǎng)后試劑變黃色但是出現(xiàn)渾濁或出現(xiàn)絮狀物判斷為假陽性。每次試驗在質控在控的情況下記錄試驗結果。

1.4統(tǒng)計學處理? 使用SPSS 22.0進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料多個率的比較采用行×列表的？字2檢驗，多個樣本之間的兩兩比較采用多個樣本率之間的多重比較。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.01表示統(tǒng)計學意義顯著。

2結果

2.1標準菌株對肺炎支原體快速檢測試劑的影響? 本研究使用的5株ATCC來源的標準菌株中，肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、白念珠菌在肺炎支原體快檢培養(yǎng)法試劑盒的培養(yǎng)陽性率分別為0，10.00%，10.00%，10.00%，20.00%，各細菌間的培養(yǎng)陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（？字2=2.22，P=0.69）。

2.2臨床菌株對肺炎支原體快速檢測試劑的影響? 在臨床菌株試驗中，5種細菌同時選擇野生型和耐藥型菌株進行比較研究。對臨床常用抗生素全敏感的野生型菌株：草綠色鏈球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、白念珠菌在肺炎支原體快速檢測試劑中培養(yǎng)后結果陽性率顯著低于耐藥型菌株（P<0.01）。野生型和耐藥型菌株比較，草綠色鏈球菌分別為5.00%，80.00%;表皮葡萄球菌為15.00%，90.00%;肺炎克雷伯菌為25.00%，80.00%，白念珠菌為20.00%，85.00%;各組兩兩比較統(tǒng)計學意義顯著（P<0.01）。但鮑曼不動桿菌野生型和耐藥型之間的培養(yǎng)陽性率分別為90.00%，100.00%，組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

3討論

針對肺炎支原體快速培養(yǎng)試劑盒的臨床研究有很多，但大多數(shù)集中在其與血清學抗體檢測、PCR法基因檢測等方法學的比較研究[4，5]。對快速培養(yǎng)法的敏感性、特異性的研究也有很多不同的報道。趙漢青等[6]研究顯示，從培養(yǎng)陽性但PCR檢測陰性的標本中進行真菌和細菌16S rRNA檢測發(fā)現(xiàn)真菌污染是引起MP快速鑒定培養(yǎng)基特異性差的主要原因。郭義兵[7]研究發(fā)現(xiàn)，某些細菌能夠分解尿素，產(chǎn)生二氧化碳改變培養(yǎng)液PH值，從而影響結果。

本研究發(fā)現(xiàn)，不論是使用標準菌株還是臨床分離菌株，口咽部常見細菌和真菌如果對常用抗菌藥物敏感（主要是β內(nèi)酰胺類藥物），則對肺炎支原體6 h快速檢測試劑盒結果無明顯影響。如果培養(yǎng)液中加入的是對β內(nèi)酰胺類藥物耐藥的細菌或多重耐藥菌則會嚴重干擾檢測結果造成較高的假陽性率，這可能是由于該試劑盒中加入的抗生素不能抑制所耐藥細菌有關。這與李昌慶等[8]的研究結果有所不同，其研究結果顯示，咽拭子中若含有口腔細菌則會使肺炎支原體培養(yǎng)假陽性率增高。但該研究未明確口腔菌群是否為耐藥菌。因此，在結果判讀時，有必要將陽性培養(yǎng)物涂片后革蘭染色鏡檢，這樣可在一定程度上排除耐藥性細菌和真菌對結果的干擾。

從本研究來看，肺炎支原體6 h快檢試劑對的口腔常見的對抗生素敏感的正常菌群和呼吸道常見致病菌有良好的抗干擾作用，而且酵母菌對該試劑培養(yǎng)結果也無明顯的影響。但是耐藥菌株增加了肺炎支原體培養(yǎng)的假陽性。因此，在使用該試劑盒進行MP培養(yǎng)時要注意口腔耐藥菌的影響。

參考文獻：

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[7]郭義兵.影響肺炎支原體液體培養(yǎng)假陽性的因素分析[J].醫(yī)藥前沿，2016，6（13）：393-394.

[8]李昌慶，李岑，熊燕，等.肺炎支原體液體培養(yǎng)法的實驗診斷學評價[J].四川醫(yī)學，2016，37（12）：1362-1366.

收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-2-23

編輯/成森