包正 劉辰 徐文玲 劉賢嫻 付衛(wèi)民 王淑芬

摘要：以綠皮綠肉型蘿卜品種‘濰縣青為試驗(yàn)材料，設(shè)6個(gè)施肥處理，用高效液相色譜法測定其蘿卜萊菔子素含量。結(jié)果表明：生長前期葉片中萊菔子素含量較高，肉質(zhì)根進(jìn)入膨大期后萊菔子素主要在肉質(zhì)根中積累;666.7m2有機(jī)肥施用量150kg、配合施用氮肥和復(fù)合肥，葉片和肉質(zhì)根萊菔子素含量均可達(dá)到較高水平;有機(jī)肥有利于蘿卜幼苗萊菔子素的積累。

關(guān)鍵詞：蘿卜;施肥處理;萊菔子素

中圖分類號(hào)：S631.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2019）05-0094-04

蘿卜（RaphanussativusL.）又名萊菔、蘆菔，屬十字花科一、二年生草本植物，具有較高的食用價(jià)值和醫(yī)用價(jià)值[1]。萊菔子素（4-甲基亞磺?；?3-丁烯基異硫氰酸酯）是蘿卜中主要的硫代葡萄糖苷成分蘿卜甙在黑芥子酶催化下的酶解產(chǎn)物，在抗氧化活性、抗細(xì)胞突變能力等方面具有很強(qiáng)的生物活性，能抑制細(xì)胞的突變，對防癌、抗癌有重要意義[2-4]。目前關(guān)于蘿卜中萊菔子素的研究相對較少，主要包括對不同來源地、不同類型種質(zhì)中萊菔子素的含量分析，以及肉質(zhì)根貯藏過程中萊菔子素的含量變化分析等[5，6]。本試驗(yàn)擬以肥料這一影響蘿卜生長的重要因素為研究對象，探討不同施肥處理下蘿卜生長過程中葉片和肉質(zhì)根中萊菔子素含量的變化規(guī)律，以期為通過合理施肥提高蘿卜中萊菔子素含量提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試品種為綠皮綠肉型蘿卜品種‘濰縣青，種子由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所提供。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2018年4月12日在山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所試驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)地0～20cm耕層土壤養(yǎng)分含量為有機(jī)質(zhì)23.46g/kg、堿解氮142.82mg/kg、有效磷59.23mg/kg、速效鉀139.34mg/kg。

蘿卜起壟種植，一壟雙行，株距20cm。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)施肥處理（表1），其中有機(jī)肥（有機(jī)質(zhì)≥50%）基施，氮肥（尿素）和復(fù)合肥（總養(yǎng)分≥45%，N-P2O5-K2O為15-15-15）播種20天后追施。其它栽培管理措施同常規(guī)管理。

播種后兩周開始取樣，間隔兩周取樣一次。幼苗期取整株，肉質(zhì)根開始膨大后葉片和肉質(zhì)根分別取樣。選取大小一致、無損傷、無病蟲害的植株，切碎后混合取樣，冷凍干燥機(jī)干燥，研磨成粉末狀，過60目篩，置于超低溫冰箱中備用。

1.3測定指標(biāo)及方法

取0.2g研磨后樣品加入3mLpH=5磷酸緩沖液，25℃恒溫水浴1h，加入45mL乙酸乙酯萃取30min，取上清液，重復(fù)萃取2次，合并萃取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干，5mL甲醇復(fù)溶，過0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)行HPLC分析。

HPLC分析：采用安捷倫HPLC-1200進(jìn)行高效液相色譜分析。色譜柱為C18柱（250mm×4.6mm，5.0μm），柱溫40℃;檢測波長254nm;自動(dòng)進(jìn)樣量10μL;流動(dòng)相甲醇∶水=3∶7（V/V），流速1mL/min;分析時(shí)間25min。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將萊菔子素標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純，LKT公司，USA）溶于色譜甲醇中，分別配置成5、10、15、25、50、75、100、150、200μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以目標(biāo)峰峰面積為橫坐標(biāo)，萊菔子素濃度為縱坐標(biāo)制作萊菔子素標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中萊菔子素的濃度并計(jì)算其含量。

1.4數(shù)據(jù)分析

采用MicrosoftExcel2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理并作圖。利用SPSS25進(jìn)行差異顯著性分析，顯著水平為0.05。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析得回歸方程y=0.2998x+0.1697（R2=0.9991），說明萊菔子素濃度在5～200μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2蘿卜葉片和肉質(zhì)根中含量的差異

由圖2可知，處理M2，蘿卜生長進(jìn)入肉質(zhì)根膨大期時(shí)，根中萊菔子素含量迅速積累，并在第8周達(dá)到高峰，之后逐漸下降;而葉片中萊菔子素含量呈先降低后升高趨勢，在第10周達(dá)到最高值，隨后下降。整個(gè)生長過程中，前期葉片中萊菔子素含量略高于肉質(zhì)根，但隨著肉質(zhì)根膨大，根中萊菔子素含量顯著高于葉片。表明萊菔子素主要在肉質(zhì)根中積累。

2.3不同施肥處理蘿卜葉片萊菔子素含量變化

不同施肥處理下，葉片的萊菔子素含量變化趨勢一致，均表現(xiàn)為先降低后升高再降低，第6周時(shí)含量最低，第10周時(shí)含量最高（圖3），表明第6至8周是葉片萊菔子素積累的關(guān)鍵時(shí)期。M4和M5處理的萊菔子素含量第10周時(shí)顯著高于其它處理，其中M4處理的含量高達(dá)600.80μg/gDW，其它處理間差異不顯著。

2.4不同施肥處理蘿卜肉質(zhì)根萊菔子素含量變化

不同施肥處理下，肉質(zhì)根萊菔子素含量變化趨勢一致，均在經(jīng)過第4周至6周緩慢增長后，于第6周隨著肉質(zhì)根的膨大迅速積累，并在第8周時(shí)達(dá)到高峰，此時(shí)各處理含量大小關(guān)系為CK

2.5有機(jī)肥對蘿卜幼苗萊菔子素含量的影響

播種后兩周（未追施氮肥和復(fù)合肥）取整株幼苗測定有機(jī)肥對萊菔子素含量的影響，結(jié)果如圖5所示。幼苗萊菔子素含量與有機(jī)肥基施量呈正相關(guān)，與CK相比，666.7m2基施有機(jī)肥75、150、300kg萊菔子素含量分別提高74.36%、95.46%和137.01%。

3討論與結(jié)論

硫代葡萄糖苷是十字花科植物重要的次生代謝物質(zhì)。其中，蘿卜甙為蘿卜所特有，其降解產(chǎn)物萊菔子素與研究較為深入的萊菔硫烷結(jié)構(gòu)相似，僅在R基側(cè)鏈烴基鏈上多一個(gè)不飽和雙鍵，但在生物活性方面高于后者。然而，目前關(guān)于萊菔子素的研究還相對較少，萊菔子素在蘿卜生長過程中的變化規(guī)律以及在不同器官中含量的關(guān)系仍不明確。前人研究表明，蘿卜肉質(zhì)根的萊菔子素含量高于葉片[5]，而本研究通過檢測蘿卜整個(gè)生長過程中肉質(zhì)根和葉片中的萊菔子素含量發(fā)現(xiàn)，兩者的關(guān)系并不固定，而是動(dòng)態(tài)變化的：生長前期葉片中萊菔子素含量略高于肉質(zhì)根，之后隨著肉質(zhì)根膨大，根中萊菔子素含量顯著高于葉片。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)不同器官萊菔子素含量的變化規(guī)律也不同，葉片中萊菔子素含量表現(xiàn)為先降低后升高再降低，第10周時(shí)達(dá)到最高;而肉質(zhì)根的萊菔子素含量則表現(xiàn)為先升高后降低，第8周時(shí)達(dá)到最高。

本課題組已有的研究表明，不同的異硫氰酸酯類物質(zhì)含量受肥料的影響并不相同[7]。目前，關(guān)于不同施肥配方對蘿卜萊菔子素含量影響的研究尚未見報(bào)道。本研究，以M2和M3處理分析氮肥和復(fù)合肥對蘿卜萊菔子素含量的影響發(fā)現(xiàn)，氮對葉片中萊菔子素含量的影響高于磷、鉀，而在肉質(zhì)根中則低于磷、鉀。此外，施用有機(jī)肥可以提高蘿卜幼苗和肉質(zhì)根的萊菔子素含量，并且當(dāng)有機(jī)肥666.7m2施用量達(dá)到150kg時(shí)，蘿卜肉質(zhì)根中萊菔子素的含量顯著高于其它施肥處理。本試驗(yàn)得出，666.7m2有機(jī)肥施用量150kg、配合施用氮肥和復(fù)合肥，葉片和肉質(zhì)根的萊菔子素含量均可達(dá)到較高水平。

參考文獻(xiàn)：

[1]CurtisIS.Thenobleradish：past，presentandfuture[J].TrendsinPlantScience，2003，8（7）：305-307.

[2]Martinez-VillaluengaC，ElenaPeas，CiskaE，etal.Timedependenceofbioactivecompoundsandantioxidantcapacityduringgerminationofdifferentcultivarsofbroccoliandradishseeds[J].FoodChemistry，2010，120（3）：710-716.

[3]O′HareTJ，WilliamsDJ，ZhangB，etal.Radishsproutsversusbroccolisprouts：acomparisonofanti-cancerpotentialbasedonglucosinolatebreakdownproducts[J].ActaHorticulturae，2009，841（1）：187-192.

[4]Shishu，KaurIP.Inhibitionofcookedfood-inducedmutagenesisbydietaryconstituents：comparisonoftwonaturalisothiocyanates[J].FoodChemistry，2009，112（4）：977-981.

[5]華貝貝.蘿卜種質(zhì)硫代葡萄糖苷組分及萊菔子素含量分析與評(píng)價(jià)[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2013.

[6]姚玉慶，普布多吉，劉辰，等.蘿卜中萊菔子素含量及其在冷藏過程中的變化分析[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（1）：29-33.

[7]王萍，魏珉，劉賢嫻，等.不同施肥處理對蘿卜風(fēng)味物質(zhì)影響的GC-MS分析[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，46（9）：74-77.