陳哲 張群英 楊鼎元 嚴(yán)凱

摘要：通過(guò)調(diào)查貴陽(yáng)市樹(shù)莓園主要病害為害情況，利用PDA、PDB培養(yǎng)基對(duì)病菌進(jìn)行培養(yǎng)，初步判斷病害種類(lèi)，最后利用rDNA序列分析對(duì)主要病害進(jìn)行了分子測(cè)序，并制定了針對(duì)樹(shù)莓主要病害的防控措施，為樹(shù)莓病害的綜合防控提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：樹(shù)莓;病害;鑒定;防控

樹(shù)莓（Rubus corchorifolius L）是薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（Rubus L）植物，果實(shí)以其酸甜可口、風(fēng)味獨(dú)特及較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，成為了風(fēng)靡世界的第三代水果，同時(shí)其適應(yīng)性廣，目前在貴州已有700多hm2的種植規(guī)模，形成了具有地域特色的產(chǎn)業(yè)體系，是貴州省山地特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)扶貧的一大支柱。但隨著種植面積的擴(kuò)大，病害問(wèn)題日益嚴(yán)重，危害率在70%以上的有黑斑病、根腐病，大大縮短了樹(shù)莓采收期時(shí)間，產(chǎn)量相繼受限。通過(guò)對(duì)樹(shù)莓2大主要病害進(jìn)行采集鑒定，制定相應(yīng)防控措施，以期為樹(shù)莓種植者提供科學(xué)依據(jù)。

1黑斑病癥狀特征及病原菌培養(yǎng)

1.1黑斑病癥狀特征

該病害受害樹(shù)莓葉片大多都是從葉緣發(fā)病，后期枯萎，樹(shù)莓葉部正面病斑褐色，葉尖發(fā)病較重，嚴(yán)重時(shí)整片葉子枯萎，根部和頸部都有腐爛現(xiàn)象（見(jiàn)圖1）。

1.2黑斑病病原菌培養(yǎng)

1.2.1病原菌分離純化。采用常規(guī)分離和單孢分離相結(jié)合的方法，在病斑處切取約5mm的小塊病組織，用70%酒精浸幾秒鐘，再在3%～5%次氯酸鈉水溶液中浸2～3min;用滅菌水洗3次，將其移置在PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。

1.2.2培養(yǎng)特性。病原菌通過(guò)PDA培養(yǎng)基28℃培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，菌絲白色，中間產(chǎn)生一些黃色色素，氣生菌絲較發(fā)達(dá)，菌絲致密，生長(zhǎng)速度較快，基質(zhì)背面呈白色（見(jiàn)圖2）。

1.2.3分生孢子梗和分子孢子形態(tài)觀察。病原菌通過(guò)PDB培養(yǎng)基28%培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，病原菌分生孢子梗單生，細(xì)長(zhǎng)，單枝或分枝，分生孢子無(wú)色，多孢型，鐮刀型，微彎或兩端尖而彎曲顯著。初步斷定其為鐮刀屬（Fusarium）菌物（見(jiàn)圖5）。

2根腐病癥狀特征及病原菌培養(yǎng)

2.1根腐病癥狀特征

該病害受害樹(shù)莓葉片大多都是從葉緣發(fā)病，與藍(lán)莓黑斑病相似，樹(shù)莓葉部正面病斑褐色至黑色，葉緣發(fā)病較重，表面有灰色至黑色霉層（見(jiàn)圖3）。

2.2根腐病病原菌培養(yǎng)

2.2.1病原菌分離純化。采用常規(guī)分離和單孢分離相結(jié)合的方法，在病斑處切取約5mm的小塊病組織，用70%酒精浸幾秒鐘，再在3%～5%次氯酸鈉水溶液中浸2～3min;用滅菌水洗3次，將其移置在PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。

2.2.2培養(yǎng)特性。病原菌通過(guò)PDA培養(yǎng)基28%培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，菌絲灰色至黑色，氣生菌絲并不發(fā)達(dá)，但較致密，生長(zhǎng)速度較快，基質(zhì)背面呈黑灰色（見(jiàn)圖4）。

3分生孢子梗和分子孢子形態(tài)觀察

病原菌通過(guò)PDB培養(yǎng)基28～C培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，病原菌分生孢子梗暗色，單枝，長(zhǎng)短不一，頂生不分枝或偶爾分枝的孢子鏈;分生孢子暗色，有縱橫隔膜，倒棍棒形、橢圓形或卵形、長(zhǎng)形成鏈，單生的較少，頂端有喙?fàn)畹母綄俳z。初步斷定為鏈格孢屬（Alternada）菌物（見(jiàn)圖6）。

4真菌序列相似性分析

rDNA序列分析具有快速、簡(jiǎn)便和高特異性等特征，而真菌通過(guò)ITS區(qū)域比對(duì)，序列相似性大于99%可鑒別為同種，適用于真菌的快速檢測(cè)。本試驗(yàn)通過(guò)分子測(cè)序（見(jiàn)表1），研究獲得黑斑病的ITS序列（MG744419.1）和根腐病的ITS序列（FJ441009.1）。

5發(fā)病規(guī)律與防控措施

5.1黑斑病

5.1.1發(fā)病規(guī)律。病菌以菌絲體在落葉或枝梢的病斑中越冬，該病5月初開(kāi)始發(fā)生，夏秋最盛，直至冬季落葉為止，5～6月間病菌新產(chǎn)生的分生孢子借風(fēng)力傳播，落在幼苗葉片上，由氣孔侵入葉片，3～4天出現(xiàn)病狀，5～6天形成分生孢子盤(pán)，再進(jìn)行侵染。高溫高濕、悶熱不通風(fēng)的環(huán)境中發(fā)病尤為嚴(yán)重。

5.1.2防控措施。①及時(shí)清園，減少病原。冬季清園時(shí)徹底清除果園中枯枝落葉，清除雜草，并集中燒毀，以減少病原。②加強(qiáng)水肥管理。冬季定植樹(shù)莓時(shí)配合施用有機(jī)肥，增強(qiáng)樹(shù)勢(shì)，提高樹(shù)體抵抗力。③4～8月期間中耕除草，增加土壤通透性，通過(guò)起壟確保果園排水通暢，避免積水。④清園后藥劑防控。冬季清園后噴施5。Be石硫合劑1次，早春萌芽前噴施3～5。Be石硫合劑1次，6月上旬噴施40%多菌靈800倍液，可有效降低病原基數(shù)。

5.2根腐病

5.2.1發(fā)生規(guī)律。根腐病在貴陽(yáng)地區(qū)主要發(fā)生于植株旺盛生長(zhǎng)期，5月下旬開(kāi)始發(fā)病，7月中旬～8月中旬進(jìn)入發(fā)病盛期，土壤過(guò)干或水分長(zhǎng)期飽和，易誘發(fā)該病，低洼地塊和春季土壤溫度低的地塊易發(fā)病。

5.2.2防控措施。①冬季清園，清除所有病殘?bào)w。根腐病是土傳性病害，病菌一旦傳人很難根除，卵孢子在土壤、病殘?bào)w內(nèi)越冬，成為翌年初侵染源。因此冬季清園時(shí)務(wù)必將地上部分全部剪除，集中焚毀，壟面和壟下的病殘?bào)w也應(yīng)及時(shí)集中燒毀，減少侵染源。②起壟高度統(tǒng)一，避免水澇。根腐病的發(fā)生與土壤濕度有關(guān)，濕度越高，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越高，黏重、緊實(shí)、易澇土壤最易感病。因此在栽植樹(shù)莓前要起壟，壟面高30～40cm較好，同時(shí)注意排水。③水肥一體，增施有機(jī)肥。貴陽(yáng)地區(qū)雨水雖然較為充足，但主要集中于雨季，其他時(shí)間土壤水分難以保證，因此應(yīng)配備水肥一體化設(shè)施，保證土壤墑情，并增施有機(jī)肥，提高苗木抵抗力。④受害嚴(yán)重，及時(shí)藥劑防控。選用農(nóng)藥鏈霉素或甲霜靈錳鋅800倍液進(jìn)行土壤灌根，可以取得較好防控效果。