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        從進(jìn)境草籽中截獲剪股穎粒線蟲的體會(huì)

        2019-07-02 01:21:53王晨
        現(xiàn)代園藝·綜合版 2019年6期

        王晨

        摘要:剪股穎粒線蟲是我國檢疫性有害生物,但該線蟲截獲較難。上??诎哆B續(xù)2年在進(jìn)境草籽中截獲該線蟲,現(xiàn)將截獲經(jīng)驗(yàn)整理總結(jié),以期為其他口岸提供參考借鑒。

        關(guān)鍵詞:剪股穎粒線蟲;牧草種子;截獲

        剪股穎粒線蟲(Anguina agrostis)是牧草和草坪上重要的有害生物,被我國列入檢疫性有害生物名錄。1997年~2003年,我國口岸曾數(shù)次在進(jìn)口草籽中截獲該線蟲,但此后10余年來我國未見有記錄截獲該線蟲。2017~2018年,上海口岸先后2次分別在進(jìn)境草籽中截獲該線蟲,現(xiàn)將檢疫過程中的體會(huì)整理如下,以期為口岸檢疫部門提供技術(shù)參考。

        1截獲

        2018年3月,上海進(jìn)口一批美國俄勒岡州細(xì)弱剪股穎(Agrostis tenuis)草種,總重11.34t。3月28日在外高橋港口采集樣品并送到實(shí)驗(yàn)室。鑒于美國是剪股穎粒線蟲的分布區(qū),且剪股穎植物是該線蟲的典型寄主,故對送檢的樣品進(jìn)行仔細(xì)檢查。經(jīng)前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),采用直接挑取蟲癭法分離獲得的粒線蟲數(shù)量較多,故采用直接挑取蟲癭法檢驗(yàn)該批樣品。獲取蟲癭后,用挑針刺破蟲癭,有大量線蟲逸出。將獲得的線蟲采用形態(tài)學(xué)及分子相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定,經(jīng)確認(rèn)該線蟲是剪股穎粒線蟲。

        2檢測過程中的體會(huì)

        2.1加大對重點(diǎn)樣品的檢測力度

        近年來,我國草籽進(jìn)口量越來越大,其中禾本科草籽占多數(shù)。剪股穎粒線蟲的寄主較廣泛,可為害禾本科植物10多個(gè)屬,其中黑麥草屬(Lolium s p.)、早熟禾屬(Poa spp.)、羊茅屬(Festuca spp.)等草籽都是我國進(jìn)口量較大的草籽。據(jù)統(tǒng)計(jì),美國、加拿大、丹麥、新西蘭、荷蘭等國是我國草種進(jìn)口的主要國家,上述國家均有剪股穎粒線蟲分布,應(yīng)引起檢疫部門高度重視。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國口岸曾在彎葉畫眉草、剪股穎、匍匐莖剪股穎(Agrostis stolonKera)、細(xì)弱剪股穎(Agrostis tenuis)中截獲剪股穎粒線蟲,口岸若發(fā)現(xiàn)這類樣品應(yīng)重點(diǎn)查驗(yàn)。

        2.2線蟲的分離方法

        本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),對剪股穎草籽、匍匐莖剪股穎、細(xì)弱剪股穎等剪股穎屬(Agrostis)草籽類樣品,采用直接挑取蟲癭法分離粒線蟲具有分離數(shù)量大、耗時(shí)少的優(yōu)點(diǎn),故對該類樣品采用直接挑取蟲癭法進(jìn)行分離。挑取時(shí)要注意每次選取的樣品盡量少,以使樣品盡量散開平鋪,互相不重疊。當(dāng)發(fā)現(xiàn)顏色較深(黑色或棕色)的雜質(zhì)時(shí)(見圖1),盡量都挑取出來。進(jìn)一步置于解剖鏡下觀察。

        經(jīng)觀察,典型的剪股穎粒線蟲草籽,頭尾略尖,中間較寬,呈紡錘形;比正常的植物種子大一些(圖2)。對疑似蟲癭的雜質(zhì),滴入數(shù)滴清水,稍加濕潤后,采用解剖針挑破、刺破,進(jìn)一步觀察是否有線蟲逸出。

        2.3線蟲的鑒定

        采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定??刹捎?8S和ITS區(qū)通用引物擴(kuò)增線蟲核糖體DNA,將所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序,并進(jìn)行序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析;也可參照國標(biāo)中的特異引物對線蟲進(jìn)行PCR擴(kuò)增,觀察是否產(chǎn)生特異性條帶。

        3總結(jié)

        近年來,我國牧草及草坪草種子進(jìn)口量較大。據(jù)統(tǒng)計(jì),2011~2014年,上??诎哆M(jìn)境種子數(shù)量達(dá)5.373萬t,其中禾本科種子占絕大多數(shù),占總量的92.87%。剪股穎粒線蟲是禾本科植物非常重要的病原線蟲,口岸應(yīng)加大檢疫力度,以防該線蟲傳人我國。

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