楊志明,趙劍平

(1 邯鄲市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科,邯鄲 056000;2 邯鄲市中心醫(yī)院眼科;*通訊作者,E-mail:214922292@qq.com)

慢性丙型肝炎嚴(yán)重威脅人類健康,主要經(jīng)輸血、吸毒等途徑而感染丙型肝炎病毒(HCV)所致。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,全球HCV的感染率約為3%,估計約1.8億人感染了HCV,每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例[1],其中約有75% -85%的患者呈慢性持續(xù)性感染,未來20年與HCV感染相關(guān)死亡還會進(jìn)一步上升[2],因此積極治療慢性丙型肝炎具有很重要的意義。在直接抗病毒藥物(DAA)上市前，PEG IFNα聯(lián)合RBV仍然是我國目前慢性丙型肝炎主要的抗病毒治療方案，但在治療中發(fā)現(xiàn)，不同患者使用相同的治療方案，療效也會出現(xiàn)較大的差異，在接受治療過程中應(yīng)根據(jù)治療中病毒學(xué)應(yīng)答情況進(jìn)行個體化治療[3],因此了解應(yīng)答差異形成的原因?qū)χ笇?dǎo)治療的個體化具有重要意義。HLA是人類6號染色體臂上的一段緊密連鎖的抗原基因,是迄今所知最復(fù)雜的人類遺傳多態(tài)性系統(tǒng),也是機(jī)體最重要的遺傳因素[4]。國外有研究表明HLA-DQ參與免疫調(diào)節(jié)和抗原呈遞等,可能影響HCV感染的病程和結(jié)局[5]。HLA-DQA和HLA-DQB是HLA-DQ亞區(qū)表達(dá)的兩個基因座,前期研究結(jié)果表明HLA-DQB1與丙型肝炎病毒感染易感性相關(guān)[6]。本文進(jìn)一步探討HLA-DQA1等位基因多態(tài)性與慢性丙型肝炎之間的相關(guān)性,為慢性丙型肝炎的預(yù)防和治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

依據(jù)2015年《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》[3],選取2013-02～2016-03來我院體檢并在我院接受治療的慢性丙型肝炎患者171例(男性82例,女性89例)。納入標(biāo)準(zhǔn):漢族,年齡18-80歲,均初次接受抗病毒治療。無已知嚴(yán)重遺傳疾病,一個月內(nèi)未經(jīng)輸血治療且知情同意,排除其他型別的病毒性肝炎及其他導(dǎo)致肝臟病變的疾病,排除丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者,排除對PEG IFNα聯(lián)合利巴韋林治療有絕對禁忌證和相對禁忌證患者。選取來我院體檢的健康人群162例(男性75例,女性87例)。各組間一般資料可比。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)后入組調(diào)查。

1.2 儀器

上海宏石熒光定量PCR儀,日本奧林巴斯5400全自動生化儀,美國AB PCR擴(kuò)增儀、美國Gel全自動凝膠成像系統(tǒng)、電泳儀(北京六一儀器廠)。

1.3 方法

1.3.1 HCV-RNA檢測 采用2個不同廠家的試劑盒,從而避免試劑盒的假陰性。分別為圣湘丙型肝炎病毒核酸檢測定量試劑盒和上?？迫A丙型肝炎病毒核酸檢測定量試劑盒,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3.2 ALT檢測 采用日本奧林巴斯5400全自動生化儀對待測血清進(jìn)行ALT檢測。按ALT水平分為ALT正常組69例,連續(xù)6個月進(jìn)行檢測(每兩月檢測一次),3次結(jié)果ALT值均≤40 U/L;其余為ALT持續(xù)升高組,102例。

1.3.3 治療方案 PEG IFNα-2a給藥劑量為180 μg,每周一次皮下注射;RBV劑量800-1 200 mg/d,分3次口服,治療48周。療程結(jié)束后24周檢測HCV-RNA,持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR24)作為療效監(jiān)測指標(biāo)。

1.3.4 DNA提取 試劑盒購自天根公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,純化后的DNA放在-20 ℃冰箱保存。

1.3.5 HLA-DQA1等位基因多態(tài)性檢測 采用PCR-SSP方法,選用天津秀鵬公司生產(chǎn)的HLA-DQA1基因分型測定試劑盒,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳,于紫外凝膠成像系統(tǒng)中成像,然后進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

以直接計算法統(tǒng)計各等位基因的基因頻率,采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,各組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher’s檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,計算OR值及95%置信區(qū)間(95%CI)用于患病風(fēng)險的評價。

2 結(jié)果

2.1 慢性丙型肝炎組和健康對照組HLA-DQA1等位基因頻率比較

結(jié)果顯示,慢性丙型肝炎組HLA-DQA1*0103等位基因頻率明顯低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,OR=0.69,95%CI 0.43-1.09),HLA-DQA1*0101/0102/0104/0201/0301/0302/0401/0501/0601等位基因在兩組間的表達(dá)頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05,見表1)。

2.2 慢性丙型肝炎患者中,ALT正常組與持續(xù)ALT升高組間HLA-DQA1等位基因頻率比較

結(jié)果顯示,ALT正常組患者HLA-DQA1*0501等位基因頻率明顯高于持續(xù)ALT升高組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,OR=1.66,95%CI 1.11-2.46),HLA-DQA1*0101/0102/0103/0104/0201/0301/0302/0401/0601等位基因在兩組間的表達(dá)頻率分布均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05,見表2)。

表1 慢性丙型肝炎組和健康對照組HLA-DQA1等位基因頻率比較 例(%)Table 1 Comparison of HLA-DQA1 allele frequencies between chronic hepatitis C group and healthy control group cases(%)

表2 ALT正常組與持續(xù)ALT升高組間HLA-DQA1等位基因頻率比較 例(%)Table 2 Comparison of HLA-DQA1 allele frequencies between normal ALT group and persistent ALT elevation group cases(%)

2.3 PEG IFNα-2a聯(lián)合利巴韋林治療后療效與HLA-DQA1等位基因頻率的相關(guān)性

結(jié)果顯示,獲得SVR24患者DQA1*0601等位基因頻率顯著低于未獲得SVR24患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,OR=0.61,95%CI 0.36-1.04),HLA-DQA1*0101/0102/0103/0104/0201/0301/0302/0401/0501等位基因在兩組間的表達(dá)頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05,見表3)。

表3 獲得SVR24和未獲得SVR24患者HLA-DQA1等位基因頻率比較 例(%)Table 3 Comparison of HLA-DQA1 allele frequencies between patients with and without SVR24 cases(%)

3 討論

丙型肝炎為由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一種疾病，由于缺乏預(yù)防性疫苗且治療費(fèi)用昂貴，慢性丙型肝炎仍然是世界范圍內(nèi)重大的公共衛(wèi)生難題[7]。2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，丙型肝炎病毒(慢性感染)在一類致癌物清單中[8]。我國屬于中高度HCV感染區(qū)域，在DAA上市之前，國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化治療方案為PEG IFNα-2a和RBV聯(lián)合抗病毒治療，治愈率為44% -77%，有良好的治療效果[9]。但在治療中發(fā)現(xiàn)，不同患者使用相同的治療方案,療效也會出現(xiàn)較大的差異。

HLA作為一個與疾病關(guān)聯(lián)最為密切的基因復(fù)合體,包含大量與人類免疫功能相關(guān)的基因,其基因的多態(tài)性是調(diào)控人體特異性免疫應(yīng)答和決定疾病易患性個體差異的分子基礎(chǔ),不同HLA基因型的個體對感染性病原體具有不同的易感性和臨床轉(zhuǎn)歸。

近年來,HCV感染與HLA-DQA1之間的聯(lián)系在國內(nèi)外已有一定的研究和報道。喻榮彬等[10]研究證明HLA-DQA1*0501、DQB1*0301/09、DRB1*0401等位基因和DQA1*0301/02/03-DQB1*0301/09、DQA1*0501-DQB1*0301/09、DRB1*1101-DQB1*0301/09單倍型可能是慢性丙型肝炎的抗性基因,與ALT正常水平呈正相關(guān),減緩病程發(fā)展和進(jìn)行性肝損傷;DQB1*0201/02等位基因與ALT正常水平呈負(fù)相關(guān),是易感基因,可促進(jìn)HCV感染后肝功能損傷。Esumi等[11]研究表明HLA-DQA1在高載量HCV感染肝臟中表達(dá)比在低載量HCV感染肝臟中表達(dá)明顯增高。Ishibashi等[12]研究進(jìn)一步闡明HLA-DQA1在高載量HCV感染肝臟中表達(dá)較高的分子機(jī)制:其一為增加APC細(xì)胞數(shù)和固有免疫,其二為誘導(dǎo)免疫耐受。這些研究提示HLA-DQA1基因與丙型肝炎關(guān)系密切。

本研究結(jié)果顯示,HLA-DQA1*0103等位基因頻率在慢性丙型肝炎組明顯低于健康對照組(P<0.05),表明HLA-DQA1*0103等位基因可能是慢性丙型肝炎的拮抗基因,而其他等位基因與慢性丙型肝炎的易感性無關(guān)。ALT正常組患者HLA-DQA1*0501等位基因頻率明顯高于持續(xù)ALT升高組(P<0.05),表明HLA-DQA1*0501等位基因可能會抑制轉(zhuǎn)氨酶升高,從而減緩病程發(fā)展和進(jìn)行性肝損傷,影響慢性丙型肝炎的臨床轉(zhuǎn)歸。獲得SVR24患者DQA1*0601等位基因頻率顯著低于未獲得SVR24患者(P<0.05),表明DQA1*0601等位基因不利于PEG IFNα-2a和RBV聯(lián)合抗病毒治療的應(yīng)答,臨床效果不好。但結(jié)果與國內(nèi)喻榮彬[10]研究結(jié)果有差異,考慮原因可能與地域有關(guān)系,也可能是單倍型分析存在一定的局限性,且樣本量有限,從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述,本研究探討了HLA-DQA1與慢性丙型肝炎的相關(guān)性,HLA-DQA1*0103和*0501有可能參與了HCV感染的預(yù)防及其臨床轉(zhuǎn)歸,HLA-DQA1*0601基因型可能與丙型肝炎的干擾素治療效果有關(guān),但具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步明確?？傊?作為重要的因素,HLA-DQA1在丙型肝炎的預(yù)防和治療中值得深入研究。