劉德興 虞莉（通訊作者）

（揚州市中心血站 江蘇 揚州 22507）

正確鑒定ABO血型是輸血前的最重要的一項檢測，也是血和站最基本的一項業(yè)務技能，在對無償獻血者進行ABO血型鑒定時，經(jīng)常會出現(xiàn)街頭初篩和實驗室復核血型不一致、實驗室一檢和二檢血型不一致、正定型和反定型不一致的現(xiàn)象。如何聯(lián)合使用多種檢測方法，對無償獻血者的血型進行鑒定，找出血型鑒定不一致的原因，確保血液檢測血型報告的準確性，也就成為血站檢驗科一個經(jīng)常遇到但又必須正確解決的問題[1]。在血站ABO血型鑒定結果不一致中，大部分都是由于街頭血液初篩工作人員的責任心問題而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技術性原因，如何保證街頭初篩血型準確率及提高實驗室血型鑒定的技術水平是解決血型鑒定不一致的兩個主要方面。保證初篩血型的正確率和提高正反定型不一致時的技術分析水平，也就能夠基本解決絕大部分的血型不符的情況，下面重點對這兩個方面的問題如何解決進行設計和討論研究。

1.資料與方法

1.1 一般資料

從2009年到2014年，血站檢驗科共檢測249082人次，調(diào)查發(fā)現(xiàn)有157例血型鑒定不一致的情況。

1.2 試劑和材料

抗A抗B標準血清（單克隆抗體，上海血液生物醫(yī)藥）、標準紅細胞（上海血液生物醫(yī)藥）、不規(guī)則抗體篩選細胞（上海血液中心）；全自動血型儀（漢泰HEMOtype）。

1.3 方法

嚴格按照我站實驗室ABO血型鑒定的標準操作規(guī)程進行操作和漢泰全自動血型分析儀的SOP進行實驗。

1.4 正反定型結果不一致的處置方法

如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型不一致，首先要重復做試驗一次。嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細心觀察和分析試驗結果和臨床癥狀，就可以解決問題[2]。對一些疑難問題必須進一步研究，初步檢查步驟包括：

（1）首先用鹽水試管法對血型不一致進行檢測，如果檢測結果一致則說明血型不一致由于全自動血型儀檢測過程中出現(xiàn)判讀失誤；如果檢測結果不一致，應將紅細胞及血清試驗在水浴箱中孵育（37℃）和然后用顯微鏡檢查核實，以排除冷凝集素影響。

（2）如果檢測結果仍然不一致，可以進行吸收放散試驗，根據(jù)結果來判定是否為抗體或抗原減弱導致結果不一致。如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應考慮由遺傳產(chǎn)生的Cad抗原活性；被細菌酶激活的TK受體；或產(chǎn)生機制不大明了的Tn受體所引起。

（3）如果仍然不一致，可以進一步采用篩選譜細胞或亞型試劑進行檢測，檢測出不同的血型亞型。

2.結果

2.1 2009年—2014年我站各種血型錯誤及具體原因一覽，見表1。

表1 2009年—2014年我站血型不一致情況統(tǒng)計表

2.2 針對表1結果中正反定型不一致的42例標本進行進一步檢測，查找不一致原因，具體見表2。

表2 42例標本正反定型不一致結果分析表

3.討論

從表1中可以看出在血站ABO血型鑒定結果不一致中，大部分都是由于街頭血液初篩工作人員的責任心問題而造成血型不符，另有一部分正反定型不一致是技術性原因，如何保證街頭初篩血型準確率及提高實驗室血型鑒定的技術水平是解決血型鑒定不一致的兩個主要方面。保證初篩血型的正確率和提高正反定型不一致時的技術分析水平，也就能夠基本解決絕大部分的血型不符的情況[3]。

針對以上情況，我站為了提高街頭血型初篩正確率設計了一套方案來規(guī)范街頭的初篩工作。每日街頭初篩后要求在全血提交前再次復核一次血型（同時核對電腦登記血型），并且詳細規(guī)定日常工作中注意事項，包括試劑的儲存和使用注意點，街頭采血車的工作環(huán)境溫度，初篩血型讀結果的最少時間，紅細胞的吸取量（保證抗原抗體反應比例），遇到可疑結果時應用試管法復查，遇有單位集體獻血時合理配備人員的數(shù)量，加強工作人員的責任心教育。提高血站ABO血型鑒定的正確率，首先從源頭和流程上對街頭血型初篩進行質(zhì)量控制，加強初篩工作人員的責任心教育，遵守規(guī)定的流程和操作規(guī)范，保證采血車的環(huán)境溫度，嚴格控制好試劑的儲存條件和使用時間，把握好抗原抗體比例，規(guī)范的進行血型鑒定操作，認證審核結果，出現(xiàn)可疑結果時不輕易下結論，及時進行復核，能夠大大提高血型初篩的準確率。此套方案的實施，我站街頭初篩血型錯誤由以前的平均每年26例下降到目前現(xiàn)在的每年13例。

對于正反定型不一致的情況，我們對42例ABO正反定型不符標本分別通過在不同溫度條件下進行正反定型檢測并結合吸收放散試驗或篩選細胞試劑檢測結果，ABO血型鑒定結果不一致結果顯示：待檢血球抗原效價降低12例；有冷凝集素11例；年齡因素導致抗體效價降低11例；人為判斷原因2例經(jīng)正反定型試管法重新鑒定正反定型符合；通過吸收放散試驗鑒定出亞型2例；通過不規(guī)則抗體篩查出不規(guī)則抗體4例。提高實驗室的血型鑒定技術水平，對疑難血型鑒定，特別是ABO血型正反定型不符合，切不可以正定型結果作為最后鑒定結果，會造成血型的誤判，造成不必要的輸血反應，引起嚴重后果。以ABO血型抗原效價減弱是ABO正反定型不符的最常見的原因，占28.57%。紅細胞A或B抗原的弱化也是造成正反定型不符合的主要原因，抗原弱化是遺傳基因所決定的弱表現(xiàn)型（即亞型），12例抗原效價降低中，9例為B抗原效價降低，3例為A抗原效價降低；1例表現(xiàn)為Am亞型，1例表現(xiàn)為Bm亞型。無論是弱A或是弱B，正定型都容易漏檢出，A抗原和B抗原的弱化既可能是遺傳基因?qū)е碌娜醣憩F(xiàn)型，也可能是某些疾病導致的發(fā)生的，抗原減弱正定型中應加做抗A抗體、抗B抗體檢測，必要情況可以進行抗H的檢測，并觀察紅細胞凝集強度，以鑒別是抗原減弱引起的血型正反定型不符，同時通過吸收放散試驗、唾液血型物質(zhì)檢測，以得到正確的血型結果[4]。冷凝集也是常見的原因，占26.19%，一般只要測定時，保持37℃，冷凝集即可消失。冷凝集素，使用不同溫度條件的正反定型檢測都能夠得到確證。正常人血清中含有少量冷凝集素且效價很低，同時其只有在溫度為4℃左右才具有活性，室溫或37℃均不凝集，對ABO定型一般均無影響。但是由于個體差異，個別人有冷凝集素大量增高的特例，是室溫環(huán)境下常見ABO血型正反定型不一致或交叉配血不相符的原因之一。當血清學反應特點考慮是冷凝集素時，同時將正、反定型管放置37℃水浴箱孵育30min后用顯微鏡觀察結果，可以獲得正確的定型結果。ABO血型系統(tǒng)的抗體丟失或減弱是正反鑒定不一致的原因之一，一般加大反定型管血清量（2倍或數(shù)倍）可出現(xiàn)紅細胞凝集，表明血型抗體減弱降低，而不是完全缺失；如果是抗體完全缺失，ABO定型通過正定型確定的同時進一步通過吸收放散試驗確證比較合理[5]。人為原因多為抗原抗體比例不當。ABO以外抗體的存在即不規(guī)則抗體的存在也是正反定型不符的原因。血清中有抗M等不規(guī)則抗體存在時使用不同溫度條件下的正反定型結合譜細胞試劑檢測可以得到滿意的結果。此外，環(huán)境溫度高對標準血清抗A、抗B效價影響較大，血型試劑應避免長時間高溫環(huán)境放置，以確保血型出篩結果的準確性。血型鑒定錯誤還與檢驗人員責任心及專業(yè)素質(zhì)相關，試劑反應時間不足、沒有及時核對初篩血型或者馬虎填寫都可以導致差錯的發(fā)生。把握好試劑反應時間、加強工作責任心和提高專業(yè)素質(zhì)對減少人為差錯發(fā)生，確保臨床輸血安全有重要意義。由于無償獻血的血液均經(jīng)過初篩的健康人的血液，出現(xiàn)正反定型不符的情況較少，一般出現(xiàn)的正反定型不符合也容易解決。

綜上所述，采供血機構應進一步加強對街頭采血人員的培訓，不斷增強員工的責任心，減少因人為因素導致的血型鑒定或者錄入錯誤；同時加強實驗室建設，提升實驗室技術，特別是相關疑難血型鑒定試劑的采購，從而提升實驗室檢測能力。如部分血型試劑使用較少，可以委托上一級采供血機構進行疑難血型鑒定，以降低成本。