林茂祥 韓鳳 羅川 譚秋生 章文偉 王黎 韓如剛

摘要：目的? 比較重慶巫山獨活不同采收期產(chǎn)量性狀及蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量，為確定合理的采收期提供參考依據(jù)。方法? 采用田間小區(qū)試驗法，于2015年9月5日-2016年3月3日，每20 d采收1次，共10個不同采收時期，以獨活主根長、根直徑、鮮重、干重、折干率為考察指標，以蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯為指標成分，應(yīng)用HPLC對其進行測定，并運用主成分分析法進行綜合評價。結(jié)果? 隨著采收期的延遲，獨活主根長、直徑、鮮重、干重、折干率呈先增加后降低的趨勢;蛇床子素含量前期不斷增加，12月中旬到達最高值，隨后逐漸降低;二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量呈曲線變化，分別于11月下旬和2月中旬出現(xiàn)高峰，但差異不明顯。結(jié)論? 重慶巫山獨活單株鮮重和蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量與采收期有一定關(guān)系;結(jié)合鮮重和指標成分含量，其最適合的采收期應(yīng)為12月中旬。本研究可為獨活采收期的選擇提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：獨活;采收期;產(chǎn)量性狀;蛇床子素;二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯;高效液相色譜法;含量測定

中圖分類號：R282.4??? 文獻標識碼：A??? 文章編號：1005-5304（2019）06-0070-05

Abstract： Objective To compare yield characteristics， contents of osthole and columbianadin of Angelicae Pubescentis Radix of different collecting time in Wushan of Chongqing; To provide references for reasonable collecting time. Methods Adopting small plot experiment in the field， taking the main root length， root diameter， fresh root weight， dry root weight and drying rate as investigation basis， collecting time from September 5th 2015 to March 3rd 2016 was divided into ten collecting time， collecting every 20 d. Taking osthole and columbianadin as the index components， the HPLC was used to determine them， and the principal component analysis method was used for comprehensive evaluation. Results Root length， root diameter， fresh root weight， dry root weight and drying rate increased first then decreased along with the collecting time. Osthole increased first， then decreased gradually after reaching a peak value in the middle of December. The change of columbianadin was a quadratic curve with the collecting time， and reached the peak at the end of November and mid-February， but there was not significant difference. Conclusion The fresh root weight and contents of osthole and columbianadin in Angelicae Pubescentis Radix has a certain relationship with the collecting time， combined with the fresh root weight and index components， the optimum collecting time of Angelicae Pubescentis Radix in Wushan of Chongqing is mid-December， which can provide theoretical basis for the choice of collecting time of Angelicae Pubescentis Radix.

Keywords： Angelicae Pubescentis Radix; collecting time; yield characteristics; osthole; columbianadin; HPLC; content determination

獨活是傘形科植物重齒毛當(dāng)歸Angelica pubeseeas Maxim. f. biserrata Shan et Yuan的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具祛風(fēng)除濕、通痹止痛之功效[1]。迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者對獨活資源[2]、本草考證[3-5]、化學(xué)成分[6-10]、藥理作用[11]、臨床應(yīng)用[12]和栽培技術(shù)[13-15]等方面進行了大量研究，其研究結(jié)果對獨活資源的有效利用具有重要的理論價值。采收期對中藥材的產(chǎn)量、有效成分量、臨床療效等方面均有直接影響[16]，2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定獨活藥材“春初苗剛發(fā)芽或秋末莖葉枯萎時采挖”，有關(guān)獨活不同采收期產(chǎn)量、指標成分含量的變化及其合理采收期選擇等方面的研究目前尚未見相關(guān)報道。為適時采收高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)獨活，從而提高臨床療效，本研究在重慶巫山獨活基地采集10批次不同采收期的獨活藥材樣品，對其產(chǎn)量性狀、蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯、總灰分和酸不溶灰分進行測定，為該地獨活最佳采收期的確定提供參考。

1? 儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津;CPA225型分析天平，德國賽多利斯;SX2-8-10型箱式電阻爐，上海龍躍儀器設(shè)備有限公司;DJ-04B型中藥粉碎機，上海淀久中藥機械制造有限公司;DHG-9623A型立式鼓風(fēng)干燥器，上海龍躍儀器設(shè)備有限公司;KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器，江蘇昆山超聲儀器有限公司;1810型摩爾純水機，上海摩勒科學(xué)儀器有限公司。

蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對照品（批號分別為110822-201308、111583-201304），中國食品藥品檢定研究院。乙腈（色譜純），成都科龍化工試劑廠，甲醇為分析純，水為現(xiàn)制超純水。供試材料經(jīng)重慶市藥物種植研究所劉正宇研究員鑒定為重齒毛當(dāng)歸Angelica pubeseeas Maxim. f. biserrata Shan et Yuan干燥的根。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 測量指標與方法

選取巫山獨活基地（海拔1788 m，31°36'14"N，109°89'40"E）的兩年生獨活，于2015年9月5日-2016年3月3日分批采樣，每20 d采收1次。每次隨機采挖試驗小區(qū)的獨活各20株樣品，用水洗凈，晾干表皮水分，用游標卡尺測量鮮重、主根長、根直徑，40 ℃干燥恒重后稱干重，計算折干率。取每一單株干燥獨活根的中部，粉碎后過100目篩，保存?zhèn)溆?，?015年版《中華人民共和國藥典》獨活項下分析方法[1]測定蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯、總灰分及酸不溶灰分含量。

2.2? 不同采收期對獨活產(chǎn)量性狀的影響

10個不同采收期的獨活主根長為25.38～33.88 cm，1月最長（33.88 cm），9月5日最短（25.38 cm）;主根長在9-12月依次較上一采收期增加11.78%、8.89%、3.01%、-2.22%、2.46%，表明主根長在進入11月后增長速度減慢。不同采收期的根直徑為2.92～4.25 cm，1月根直徑為4.15 cm，根直徑在9-12月依次較上一采收期增加14.29%、23.21%、8.70%、21.33%、1.10%。不同采收期鮮重變化較明顯，9-12月依次較上一采收期增加22.32%、26.84%、11.07%、10.95%、17.25%，12月單株鮮重最重（P<0.05），此后，鮮重不再增加，表明其生長停止，處于休眠期。干重在9-12月依次較上一采收期增加26.05%、33.53%、15.14%、11.34%、23.62%。折干率是衡量中藥材質(zhì)量的重要指標[17]，不同采收期的獨活折干率介于22.46%～26.73%，其動態(tài)變化與鮮重、干重基本一致。獨活單株鮮重、干重、折干率均隨采收期的延遲而增加，12月的鮮重、干重、折干率最高，1月后逐漸下降，可能是獨活為來年萌發(fā)消耗了一部分物質(zhì)。整體來看，不同采收期獨活主根長、根直徑、鮮重、干重、折干率呈先增加后降低的趨勢（見表1），表明在該試驗區(qū)采收過早或過晚均影響?yīng)毣町a(chǎn)量。

2.3? 不同采收期對指標成分的影響

根據(jù)不同采收期10批獨活樣品的HPLC圖色譜峰面積計算樣品中蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量，并對總灰分、酸不溶性灰分進行常規(guī)測定，結(jié)果見表2。可以看出，獨活中蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量在不同采收期有很大差異。蛇床子素含量于9月下旬-12月中旬，呈遞增趨勢，分別較上一采收期增加202.13%、33.06%、37.03%、35.16%、10.67%，蛇床子素含量于1月初-3月初呈遞減趨勢，分別較上一采收期增加-4.63%、-13.48%、-9.28%、-8.29%;二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量呈較為復(fù)雜的曲線變化，于9月下旬-3月初出現(xiàn)了2次高峰期，分別是11月下旬和2月中旬，9月下旬較9月初分別增加了12.05%，10月中旬較9月下旬增加12.94%，11月初較10月中旬增加-12.38%，11月下旬較11月上旬增加94.62%，12月中旬較11月下旬增加-29.30%，1月初較12月中旬增加-25.93%，1月下旬較1月初增加78.77%，2月中旬較1月下旬增加6.27%，3月初較2月中旬增加-5.82%。從蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量總和來看，9月初-3月初呈先增加后降低的趨勢，12月中旬到達最高值。不同采收期獨活中蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量變化趨勢見圖1?？梢?，9月初-12月中旬呈現(xiàn)極為明顯的增加趨勢，1月初-3月初逐漸降低。除9月初，不同采收期獨活中蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量均高于2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定。

2.4? 各指標間相關(guān)性分析

獨活產(chǎn)量性狀及指標成分含量的相關(guān)性見表3。不同采收期獨活各指標間具有較強的相關(guān)性。主根長與根直徑、鮮重、干重、折干率呈極顯著正相關(guān)，根直徑與鮮重、干重呈極顯著正相關(guān)，鮮重與折干率呈極顯著正相關(guān)。蛇床子素含量與主根長、根直徑、鮮重、干重、折干率呈極顯著正相關(guān)，二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量與主根長、根直徑、鮮重、干重、折干率呈顯著正相關(guān)。提高獨活產(chǎn)量和質(zhì)量應(yīng)綜合考慮各指標間的相關(guān)性。

2.5? 不同采收期獨活主成分分析

采用DPS7.05軟件對獨活產(chǎn)量性狀與指標成分含量進行主成分分析，其規(guī)格化特征向量、特征值、貢獻率、累計貢獻率見表4、表5。

3? 討論

重慶栽培獨活面積較大，由于缺少系統(tǒng)的采收期質(zhì)量評價，而不同采收期獨活收購價格相同，導(dǎo)致藥農(nóng)采收獨活時間較為隨意，難以保證藥材質(zhì)量，也不利于打造獨活地方品牌。獨活屬根莖類藥材，其產(chǎn)量高低與地下根的性狀有密切關(guān)系。本研究結(jié)果表明，9月初-12月中旬，獨活單株鮮重不斷增加，11月獨活開始倒苗后，地上部分營養(yǎng)向下運輸，根部繼續(xù)生長，直至12月中旬達到高峰，因此單株鮮重最高時期為12月中旬。1月下旬后獨活鮮重逐漸下降，可能是為初春萌發(fā)作準備，根部貯存的大量營養(yǎng)物質(zhì)開始分解，指標成分含量有所降低。本試驗對單株產(chǎn)量性狀進行分析，其結(jié)果是否適用于大田群體產(chǎn)量尚待深入研究。

不同采收期植物次生代謝物的積累量存在明顯差異[18]。藥材質(zhì)量的優(yōu)劣是氣候、土壤、生物、地形等各環(huán)境因子綜合作用的結(jié)果[19]，藥用植物次生代謝物是中藥發(fā)揮療效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[20]，而蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯屬于香豆素類化合物，是獨活的指標成分。2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定，獨活藥材總灰分≤8.0%，酸不溶性灰分≤3.0%，蛇床子素含量≥0.50%，二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量≥0.080%[1]。本研究中，不同采收期獨活總灰分為4.41%～7.90%，酸不溶性灰分為0.1%～2.2%，均符合藥典規(guī)定;除9月初蛇床子素含量低于0.5%外，其余采收期蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量均高于藥典規(guī)定。地理環(huán)境、氣候、土壤等環(huán)境因子不同，則獨活的生長發(fā)育進程不同，不同產(chǎn)地獨活的采收期存在差異符合自然規(guī)律。由于本研究材料僅取自重慶市巫山縣，其結(jié)論是否適合于其他產(chǎn)地有待進一步研究。

實際生產(chǎn)中，在有效成分含量達到藥典要求的基礎(chǔ)上，產(chǎn)量越高則經(jīng)濟效益越高。為了實現(xiàn)經(jīng)濟效益最大化，可同時兼顧產(chǎn)量與指標成分含量，確定合理的采收期，才能保證藥農(nóng)增產(chǎn)增收。本研究結(jié)果表明，獨活在同一田間管理、生態(tài)環(huán)境下，產(chǎn)量、指標成分與采收期有較大關(guān)系，確定藥材最佳采收期應(yīng)從藥材的產(chǎn)量與質(zhì)量等多方面考慮[20-21]，故12月中旬是獨活的最佳采收期。不同采收期獨活成分含量差異可能與不同時期植株生長所處的土壤營養(yǎng)、環(huán)境溫度、光照強度、光照時間、降雨量等因素密切相關(guān)，還有待進一步深入研究。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：263.

[2] 李雄建，袁桂香.藥用獨活的資源與鑒定[J].基層中藥雜志，1998， 12（2）：5-6.

[3] 陸大忠，朱山寅.獨活與香獨活的鑒別[J].中國藥業(yè)，2000，9（3）：53-54.

[4] 單峰，袁媛，郝近大，等.獨活、羌活的本草源流考[J].中國中藥雜志， 2014，39（17）：3399-3403.

[5] 曹雯，李崇超.獨活的本草考證及常用藥對[J].陜西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2018，41（1）：127-130.

[6] 才謙，沙明，楊松松，等.不同地區(qū)商品獨活中香豆素含量比較[J].中藥材，2003，26（12）：857-858.

[7] 張才煜，張本剛，楊秀偉.獨活化學(xué)成分的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報， 2007，23（4）：241-245.

[8] 丁希飛，馮煦，董云發(fā)，等.中藥獨活化學(xué)成分的研究[J].中藥材， 2008，31（4）：516-518.

[9] 鞠成國，王巍，姜海平.獨活HPLC指紋圖譜研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2007，9（2）：128-129.

[10] 胡太德，陳紹成，譚君.重慶道地藥材獨活與全國其他產(chǎn)區(qū)獨活主要藥效成分含量對比研究[J].中國藥房，2015，26（33）：4711-4713.

[11] 張志美，張春華，沈志強，等.中藥獨活藥理研究[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志， 2008（6）：42-43.

[12] 龔高柏，吳紅玲.獨活常見藥對的臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2005，20（14）：2653-2654.

[13] 嚴宜昌，廖瑋，李曉莉，等.獨活栽培中的主要因素及種植方案優(yōu)選試驗研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2012，34（2）：65-66.

[14] 王顯安，胡榜文，馬超，等.鎮(zhèn)坪縣獨活施肥效果對比試驗[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（23）：51，53

[15] 王康才，陳暄，唐曉清，等.獨活種子發(fā)芽特性研究[J].中草藥，2005， 36（4）：595-597.

[16] 田新村.中藥材采收期研究概述[J].中藥材，1989，12（8）：40-43.

[17] 賈樹幟，趙偉群，王桂嬡，等.桔梗最佳采收期實驗研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報，1997，25（4）：35-36.

[18] 董娟娥，梁宗鎖.植物次生代謝物積累量影響因素分析[J].西北植物學(xué)報，2004，24（10）：1979-1983.

[19] 吳洋，王慧，房敏峰，等.環(huán)境因子對藥用植物藥材形成的影響研究進展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2013，25（4）：416-420，429.

[20] 龍全江.中藥材加工學(xué)[M]：北京：中國中醫(yī)藥出版社，2006：18.

[21] 段金廒，嚴輝，宿樹蘭，等.藥材適宜采收期綜合評價模式的建立與實踐[J].中草藥，2010，41（11）：1755-1760.

（收稿日期：2018-07-10）

（修回日期：2018-11-08;編輯：陳靜）