李婧 揣峻峰 王磊

摘要 采用盆栽試驗(yàn)研究枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液沖施對(duì)玉米植株生長(zhǎng)和養(yǎng)分吸收的影響。結(jié)果表明，不同用量上清液沖施均能明顯地促進(jìn)玉米生長(zhǎng)，增加干物質(zhì)累積量，促進(jìn)植株對(duì)氮、磷、鉀的吸收和利用。其中30 000 L/hm2沖施處理表現(xiàn)最好，與對(duì)照相比，可使玉米株高增加10.9%，莖粗增加10.0%，葉綠素SPAD值增加29.2%，地上部干重增加27.4%，根系干重增加51.1%，玉米地上部氮、磷、鉀含量增加15.1%、25.1%、32.9%;根系氮、磷、鉀含量增加30.6%、38.4%和22.1%。由此可見，枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液在作物生長(zhǎng)期內(nèi)可以作為一種肥料進(jìn)行沖施，既能促進(jìn)作物生長(zhǎng)，又能實(shí)現(xiàn)資源的再利用。

關(guān)鍵詞 玉米;枯草芽孢桿菌;發(fā)酵上清液;生長(zhǎng);養(yǎng)分吸收

中圖分類號(hào) S144文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2019）10-0138-03

Abstract A potted trial was carried out to study the effects of rushing liquid supernatant in the fermentation of Bacillus subtilis on growth and nutrients uptake of maize. Results showed that rushing different dosages of liquid supernatant all could? obviously promote the growth character，increase dry weight accumulation ，promote the absorption and utilization of nitrogen， phosphorus and potassium. Among them，rushing by 30 000 L/hm2 showed the most significant promotion effects. This treatment enhanced the plant height by 10.9%，stem diameter by 10.0%，chlorophyll SPAD value by 29.2%，aboveground dry weight by 27.4%，the root dry weight by 51.1%，the content of nitrogen， phosphorus and potassium by 15.1%， 25.1% and 32.9% of? aboveground;and the content of nitrogen， phosphorus and potassium by 30.6%，38.4% and 22.1% of? root， respectively compared with control treatment.So this research? showed that the liquid supernatant in the fermentation of Bacillus subtilis could be used as a fertilizer in the growing period of crops. It could not only promote the growth of crops， but also realize the reuse of resources.

Key words Maize;Bacillus subtilis;Liquid supernatant;Growth;Nutrients uptake

枯草芽孢桿菌作為一種環(huán)境友好型微生物，具有改善土壤微環(huán)境、促進(jìn)作物生長(zhǎng)、提高作物產(chǎn)量、防治病害的作用[1-5]?？莶菅挎邨U菌在發(fā)酵過程中會(huì)產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物，包括抗生素、細(xì)菌素、幾丁質(zhì)酶、葡聚糖類、抗菌蛋白、植物激素等。國(guó)內(nèi)外在發(fā)酵枯草芽孢桿菌生產(chǎn)上后處理以得到芽孢為目的，一般采用離心濃縮干燥技術(shù)得到芽孢后，含有大量次生代謝產(chǎn)物的離心上清液并未合理充分的利用[6]。近年來，部分學(xué)者對(duì)枯草發(fā)酵上清液代謝產(chǎn)物的生防效果進(jìn)行了研究。夏彥飛等[7]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌OKB105的發(fā)酵上清液對(duì)4種標(biāo)靶線蟲表現(xiàn)較好的防治效果。而關(guān)于上清液對(duì)作物的促生研究較少。段海明等[8]研究表明解淀粉芽孢桿菌gfj-4的發(fā)酵上清液對(duì)葡萄白腐病具有較強(qiáng)的抑制作用，最高可達(dá)90.0%。魏林等[9]研究哈茨木霉T2-16的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)豇豆枯萎病的防治效果，結(jié)果表明木霉 T2-16發(fā)酵產(chǎn)物浸種處理后，豇豆幼苗枯萎病的發(fā)病率為 16.7%，極顯著低于清水浸種處理的發(fā)病率（63.3%）。

領(lǐng)先生物農(nóng)業(yè)股份有限公司發(fā)酵生產(chǎn)枯草芽孢桿菌后處理得到的上清液中含有豐富的有機(jī)質(zhì)，多種作物生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)元素（鈣、鎂、錳、鉀、磷），以及發(fā)酵過程中產(chǎn)生的有機(jī)代謝物（脂類、多糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)），這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是潛在的肥料資源。筆者旨在將枯草發(fā)酵液離心后得到的上清液變廢為寶，探究其對(duì)作物生長(zhǎng)的影響，實(shí)現(xiàn)其在農(nóng)業(yè)種植領(lǐng)域中的再利用，避免排放后對(duì)環(huán)境的污染，實(shí)現(xiàn)發(fā)酵工業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，為實(shí)現(xiàn)清潔生產(chǎn)的目標(biāo)提供切實(shí)可行的途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)地位于河北省秦皇島市領(lǐng)先生物農(nóng)業(yè)股份有限公司溫室內(nèi)。供試土壤采自公司園區(qū)的裸荒地，基本理化性狀：有機(jī)質(zhì)10.30 g/kg，堿解氮64.75 mg/kg，有效磷70.40 mg/kg，速效鉀141.00 mg/kg，pH 6.56。土壤樣品過2 mm篩后風(fēng)干備用。

1.2 試驗(yàn)材料

供試枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液由河北省領(lǐng)先生物農(nóng)業(yè)股份有限公司發(fā)酵車間提供。供試作物為玉米，品種為鄭單958。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)以盆栽方式進(jìn)行，盆栽塑料花盆尺寸為130 mm × 88 mm × 115 mm，每盆裝風(fēng)干土1.5 kg。稱取復(fù)合肥（15-15-15）0.1 g/kg土作為底肥。將土樣與固體肥料攪拌均勻，倒入塑料盆中。玉米于2018年8月10日進(jìn)行播種，每盆4株，玉米兩葉一心期間苗，每盆定苗3株。于9月20日收獲，生長(zhǎng)周期為40 d。為了避免光線異同，每3 d調(diào)換一次位置。試驗(yàn)期間其他管理栽培措施按照常規(guī)方法進(jìn)行。

試驗(yàn)共設(shè)置6個(gè)沖施處理：750、1 500、7 500、15 000、30 000 L/hm2沖施處理，空白對(duì)照（CK）為清水沖施。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。

1.4 測(cè)定項(xiàng)目與方法

株高：用直尺測(cè)量，從露出土壤根部至頂端距離。 莖粗：為莖基部直徑，用游標(biāo)卡尺測(cè)得。 植株葉片葉綠素SPAD值[10]：玉米生長(zhǎng)期間，采用 SPAD–502 葉綠素測(cè)定儀分別測(cè)定各處理植株倒數(shù)第3片葉。植物干物質(zhì)質(zhì)量：收獲時(shí)將玉米地上部和地下部分開，沖洗干凈后105 ℃殺青1 h，然后80 ℃ 烘干至恒重，并稱質(zhì)量。植株地上部和根系氮、磷、鉀含量：地上部和根系烘干后粉碎所得樣品采用H2SO4-H2O2法消解，凱氏定氮儀測(cè)定氮含量，火焰光度法測(cè)定鉀含量，鉬藍(lán)比色法測(cè)定土壤磷含量。以上方法均參照《土壤農(nóng)化分析》[11]中相關(guān)方法進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Microsoft Excel 2010 和SAS 9.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米生長(zhǎng)發(fā)育的影響

株高和莖粗是枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米生長(zhǎng)影響最直觀的指標(biāo)。通過分析各處理的株高和莖粗發(fā)現(xiàn)，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液處理具有增加玉米株高和促進(jìn)玉米莖稈粗壯的作用。由圖1可知，各處理玉米株高差異顯著，玉米株高隨著枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液沖施用量的增加而增加。750～15 000 L/hm2沖施處理與對(duì)照間差異不顯著，而30 000 L/hm2沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液處理的玉米株高顯著高于對(duì)照，為37.9 cm，較對(duì)照增加10.9%。沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液各處理雖能增加玉米植株莖粗，但與對(duì)照間未達(dá)顯著差異，增幅為5.1%～10.0%。其中表現(xiàn)最好的為30 000 L/hm2處理，莖粗為0.79 cm。可見30 000 L/hm2沖施處理對(duì)玉米植株生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用。

2.3 枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米干物質(zhì)累積的影響

地上部干物質(zhì)積累是玉米產(chǎn)量形成的物質(zhì)基礎(chǔ)，增加干物質(zhì)產(chǎn)量對(duì)實(shí)現(xiàn)玉米高產(chǎn)具有重要意義[13]。由圖3可知，不同枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液沖施處理下玉米苗期地上部干物質(zhì)的積累表現(xiàn)為30 000 L/hm2>15 000 L/hm2>7 500 L/hm2>1 500 L/hm2>750 L/hm2，即沖施用量為30 000 L/hm2時(shí)地上部干重最大，為0.827 g/株。其中15 000? L/hm2和30 000 L/hm2顯著高于對(duì)照（0.649 g/株）。

根系是作物重要的吸收器官，在植物生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量形成中起著重要作用。根系的發(fā)達(dá)與否直接決定作物的長(zhǎng)勢(shì)，因此根系干重也是衡量玉米生長(zhǎng)的一個(gè)重要指標(biāo)[14]。由圖3可以看出，枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液沖施的玉米單株根干重均高于對(duì)照，且差異達(dá)顯著水平（P<0.05），表現(xiàn)最好的是30 000L/hm2處理（1.133 g/株），較不沖施處理（CK）增加51.1%;15 000 L/hm2次之，較不沖施處理（CK）增加27.5%?？赡苁且?yàn)楦邲_施用量處理帶入土壤的養(yǎng)分多，有利于根系吸收更多的養(yǎng)分，促進(jìn)根系的生長(zhǎng)，同時(shí)將這些養(yǎng)分運(yùn)輸?shù)降厣喜客?，既增加了地上部干重，同時(shí)也為后期玉米生殖生長(zhǎng)奠定了基礎(chǔ)。

2.4 枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米植株養(yǎng)分吸收利用的影響

由表1可知，與CK相比，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液后植株地上部和根系氮、磷、鉀養(yǎng)分含量均有不同程度的增加，且均表現(xiàn)為隨著沖施用量的增加含量和累積量越大的規(guī)律。地上部氮含量表現(xiàn)為30 000 L/hm2處理顯著高于對(duì)照和750、1 500、15 000 L/hm2處理，其中較對(duì)照增加15.1%。玉米植株地上部磷含量30 000 L/hm2處理最高為4.49 mg/kg，顯著高于對(duì)照，較對(duì)照（3.71 mg/kg）高21.1%。地上部鉀含量各處理間未達(dá)顯著差異，其中表現(xiàn)最好的同樣是30 000 L/hm2處理，較對(duì)照增加了32.9%。根系氮、磷、鉀含量各處理間均達(dá)顯著差異（P<0.05）。30 000 L/hm2處理根系氮、磷、鉀含量分別為13.83、1.47和20.63 mg/kg，分別比對(duì)照增加了30.6%、38.4%和22.1%。枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液沖施用量越大，帶給土壤的養(yǎng)分越豐富，根系吸收的養(yǎng)分越多，從而運(yùn)輸?shù)降厣喜康酿B(yǎng)分也相應(yīng)增多。

3 結(jié)論與討論

枯草芽孢桿菌發(fā)酵離心后處理得到的上清液中含有豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物以及培養(yǎng)基殘留物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。目前，大部分發(fā)酵工廠發(fā)酵后將其作為廢水進(jìn)行排放，有效利用的報(bào)道不多。在該試驗(yàn)中，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米幼苗的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用，直觀表現(xiàn)為植株更高，莖稈更粗壯，根系更發(fā)達(dá)。其中沖施30 000 L/hm2處理對(duì)玉米的促生作用最明顯，可使玉米株高增加10.9%，莖粗增加10.0%，地上部干重增加27.4%，根系干重增加51.1%，產(chǎn)生這種良好的促生效果的原因，一方面是次生代謝產(chǎn)物中包含植物激素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等生長(zhǎng)因子，這些物質(zhì)在適宜的用量下可以從生理和形態(tài)上調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)[15]。可促進(jìn)植物根系有效地吸收土壤中的水分和養(yǎng)分，以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)對(duì)植物體其他生命活動(dòng)進(jìn)行調(diào)控[16-17];另一方面在于上清液中含有培養(yǎng)基中殘留的無機(jī)和有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，這也能很好地供給植物營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)其健康生長(zhǎng)。

SPAD 值代表作物葉片葉綠素相對(duì)含量，葉綠素是植物代謝過程中進(jìn)行光合作用、同化作用的基礎(chǔ)，提高葉片SPAD 值，可以提高光合速率，加速光合產(chǎn)物的積累，更好地促進(jìn)作物生長(zhǎng)[18]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液后玉米葉片濃綠，葉綠素相對(duì)含量增加。其中表現(xiàn)最好的為30 000 L/hm2處理，良好的光合作用更好地促進(jìn)了玉米的生長(zhǎng)。

充足的養(yǎng)分供應(yīng)是作物高產(chǎn)的基礎(chǔ)。該研究發(fā)現(xiàn)，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液有利于促進(jìn)玉米植株氮、磷、鉀的吸收與利用。沖施30 000 L/hm2處理玉米地上部氮、磷、鉀含量分別較對(duì)照增加15.1%、25.1%、32.9%，根系氮、磷、鉀含量分別較對(duì)照增加30.6%，38.4%和22.1%。

綜上所述，沖施枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液有利于促進(jìn)玉米苗期的生長(zhǎng)、地上部和地下部干物質(zhì)積累以及養(yǎng)分的吸收利用，且表現(xiàn)為施用量越大促進(jìn)作用越明顯。該研究為枯草芽孢桿菌發(fā)酵上清液在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用推廣提供參考。

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