張瑞 韓加 呂梅霞 吾布力卡司木·艾克拜爾 彭冰鑫 吐爾孫拜克·葉爾達(dá)

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（21462046）。

作者簡(jiǎn)介：張瑞（1994-），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)流行病。E-mail：544567951@qq.com

通信作者：吐爾孫拜克·葉爾達(dá)（1962-），男，蒙古族，博士，副教授，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)。E-mail：cerendorj@126.com

【摘 要】 目的：研究胡椒酸乙二胺（PAE）的急性毒性作用及安全性。方法：40只昆明種小鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各20只，實(shí)驗(yàn)組用0.5% 羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配制的PAE混懸液對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，對(duì)照組用0.5% CMC-Na溶液灌胃，采用最大耐受量（MTD）法，給藥劑量為5g/kg，每天1次，連續(xù)14d，觀察給藥后小鼠有無異常反應(yīng)及死亡情況，期間記錄體重變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)束解剖動(dòng)物，稱量臟器濕重，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果：給藥后小鼠未出現(xiàn)死亡和毒性反應(yīng)，解剖肉眼觀臟器未見病變，分析比較兩組小鼠體重、臟器濕重及臟器系數(shù)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：胡椒酸乙二胺屬低毒性化合物。

【關(guān)鍵詞】 胡椒酸乙二胺;小鼠;急性毒性

【中圖分類號(hào)】R285.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）7-0021-03

Abstract：Objective To study the acute toxicity and safety of the piperic acid ethylenediamine （PAE）. Methods 40 Kunming mice were randomly divided into experimental group and control group， with 20 mice in each group. The experimental group was intragastrically administered with PAE suspension formulated with 0.5% Sodium carboxymethyl cellulose （CMC-Na）， and the control group was gavaged with 0.5% CMC-Na solution. Use the maximum tolerance method （MTD）， the intragastric dose was 5 g/kg， the mice were given by gavage once a day for 14 days， observed any adverse reactions and deaths after the treatment， and the body weight changes were recorded during the experiment. At the end of the experiment dissected the animal， weighed the wet weight of the organ， and calculated the organ coefficient. Results There was no death and toxicity in the mice after administration， and no pathological changes were observed in the naked eye， analysis and comparison of body weight， organ wet weight and organ coefficient of the two groups of mice， the difference was not statistically significant （P>0.05）. Conclusion Piperonic acid ethylenediamine is a low toxicity compound.

Keywords：Piperic Acid Ethylenediamine （PAE）;? Mice; Acute Toxicity

胡椒堿是從胡椒蓽菱等中提取的有效成分，是中、蒙醫(yī)常用藥物。近年來，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們膳食結(jié)構(gòu)的改變，血脂異常越來越常見。研究報(bào)道高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化和冠心?。–HD）的潛在危險(xiǎn)因素[1]，嚴(yán)重威脅著人類健康。許多降高脂血癥西藥（如他汀類和貝特類藥物等）雖然降脂作用明顯，但同時(shí)有許多不良的反應(yīng)[2]。天然藥用植物在促進(jìn)人類健康和治療疾病方面起著關(guān)鍵作用，與合成藥物相比，藥用植物被認(rèn)為毒性更低，并在調(diào)節(jié)血清TC、TG水平上發(fā)揮著有效的作用，因而對(duì)于藥用植物產(chǎn)品的研究已成為熱點(diǎn)[3]。研究表明[4-5]，胡椒堿及其衍生物具有顯著的降脂效果。但由于胡椒堿具有毒性，極大地限制了其臨床應(yīng)用開發(fā)[6]。有研究發(fā)現(xiàn)胡椒堿的某些衍生物即具有良好調(diào)血脂效果且毒性較低[7]。胡椒酸乙二胺是新近合成的胡椒堿衍生物，為評(píng)價(jià)其安全性，并為其后續(xù)的藥用價(jià)值研究提供理論依據(jù)，本研究對(duì)胡椒酸乙二胺的急性毒性進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠48只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～22g，購(gòu)于新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（新）2016-0003，使用許可證號(hào)：SYXK（新）2016-0002）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在SPF級(jí)動(dòng)物屏障實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度20～25℃，相對(duì)濕度45%～80%。

1.2 受試物 胡椒酸乙二胺（piperic acid ethylenediamine，PAE）由新疆伊犁師范學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)教研室合成提供。化學(xué)名稱：（2E，4E）-N-（2-氨基乙基-5-（苯并[d][1，3][二氧雜環(huán)戊烯]-5基）戊-2，4-二烯酰胺;英文名稱：（2E，4E）-N-（2-amino ethyl -5-（benzo[d][1，3][dioxol]-5-yl）penta-2，4-dien acid amide。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 胡椒酸乙二胺不溶于水，可溶解于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的CMC-Na溶液，將其配成最大溶解度為0.165g/mL的均勻混懸液。隨機(jī)抽取8只小鼠，分成兩組（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），雌雄各半，每組4只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，禁食不禁水12h后，實(shí)驗(yàn)組以小鼠灌胃可承受的最大體積（0.8mL/20g）灌胃PAE混懸液，即相當(dāng)于胡椒酸乙二胺6.6g/kg，對(duì)照組灌胃等體積的0.5% CMC-Na。灌胃給藥后兩組均自由攝食及飲水，密切觀察30min，再于給藥2h后觀察一次，之后每天觀察1次，連續(xù)觀察7d。測(cè)量胡椒酸乙二胺對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的半數(shù)致死量（LD50）。

1.3.2 正式實(shí)驗(yàn) 40只小鼠隨機(jī)分為兩組（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），雌雄各半，每組20只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，灌胃前禁食不禁水12h。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，正式實(shí)驗(yàn)采用最大給藥量法[8]。以小鼠可承受的0.6mL/20g的灌胃體積，灌胃0.165g/mL的PAE均勻混懸液，即相當(dāng)于胡椒酸乙二胺5g/kg，對(duì)照組灌胃等體積的0.5% CMC-Na。連續(xù)觀察14d，期間記錄給藥前后小鼠的死亡及其他異常情況，包括小鼠的反應(yīng)、活動(dòng)、皮毛光澤度、攝食量、分泌物、糞便等，觀察結(jié)束時(shí)測(cè)小鼠體重，解剖并觀察各主要臟器顏色、形態(tài)，稱量肝臟腎臟質(zhì)量并計(jì)算臟器系數(shù)。各臟器系數(shù)（%）=臟器重量（g）/體重（g）×100。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x[TX-*3]±s）表示。服合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)兩組比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析;不服合正態(tài)分布的用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 與對(duì)照組比較，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)組小鼠毛色、行為、進(jìn)食、飲水、糞便等未見異常，也未見小鼠流淚、有眼屎、呼吸困難等異常生理現(xiàn)象。觀察期間小鼠全部存活，體重正常增長(zhǎng)，未能測(cè)出半數(shù)致死量（LD50）。觀察期結(jié)束，小鼠全部頸椎脫臼處死，解剖觀察內(nèi)臟器官，肉眼觀未見心、肝、脾、肺、腎、胃、腸等臟器有異常變化。

2.2 正式實(shí)驗(yàn) 與對(duì)照組小鼠相比，給藥后2周內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組小鼠未見任何中毒癥狀和死亡情況，觀察期間小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)肌肉系統(tǒng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、糞便硬度和顏色、皮膚和被毛、行為活動(dòng)均未見異常。實(shí)驗(yàn)組小鼠體重與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。觀察期結(jié)束，解剖觀察未見內(nèi)臟器官有異常變化，實(shí)驗(yàn)組臟器系數(shù)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3 討論

胡椒是東南亞國(guó)家最受歡迎的香料產(chǎn)品之一[9]。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)可用于治療瘧疾和癲癇[10]，胡椒的果實(shí)可用于治療霍亂和消化不良等胃腸道疾病[11]。胡椒堿是胡椒中含量最大、活性最高的生物堿[12]，是黑胡椒和長(zhǎng)胡椒的酚類成分[13]。胡椒堿不僅可用作調(diào)味品，還具有止痛、降血脂[14]、抗炎（包括胃潰瘍[15]、關(guān)節(jié)炎[16]和內(nèi)毒素誘導(dǎo)的休克[17]）、抗驚厥、抗氧化、抗抑郁[18]、抗癲癇[19]和增強(qiáng)認(rèn)知功能[20]的作用，此外胡椒堿也可減輕肥胖癥和糖尿病的發(fā)生[21-22]。

急性毒性實(shí)驗(yàn)是研究動(dòng)物一次或24h內(nèi)多次給予受試物后，一定時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。對(duì)于某些低毒的受試物可采用最大給藥量法[8]，即在合理的最大給藥濃度及給藥容量的前提下，以允許的最大劑量單次給藥或24h內(nèi)多次給藥（劑量一般不超過5g/kg BW），觀察動(dòng)物出現(xiàn)的反應(yīng)。根據(jù)受試物性質(zhì)、預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并參考其他胡椒堿衍生物急性毒性資料[5]，胡椒酸乙二胺毒性極小，故本實(shí)驗(yàn)中急性毒性實(shí)驗(yàn)采用動(dòng)物最大劑量法（最大使用濃度和最大灌胃體積）[23-24]。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未見小鼠死亡及中毒癥狀，體重自然增長(zhǎng)，說明胡椒酸乙二胺對(duì)小鼠體重?zé)o不良影響。解剖肉眼觀小鼠內(nèi)臟均未發(fā)現(xiàn)異常改變，統(tǒng)計(jì)分析兩組臟器系數(shù)無明顯差異，說明胡椒酸乙二胺對(duì)小鼠內(nèi)臟無影響。提示胡椒酸乙二胺屬低毒性的化合物，研究為后期胡椒酸乙二胺進(jìn)一步的藥用開發(fā)和臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2019-01-22 編輯：程鵬飛）