牛德芳,王 波,陳玉勇,張 靜,殷 玲,*,戰(zhàn)旭梅,徐傳松,王一峰

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院食品科技學(xué)院,江蘇泰州 225300; 2.黑龍江省蠶業(yè)研究所,黑龍江哈爾濱 150086)

國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)杏仁、蘆薈和茶等不同植物來(lái)源的蜂糧進(jìn)行了研究。Loper等[6]測(cè)定杏仁蜂糧在釀制過(guò)程中滴定酸度、泛酸、煙酸和肌醇含量增加。Human[7]等測(cè)定蘆薈蜂糧水分、脂肪含量高于蜂花粉,必需氨基酸含量均滿(mǎn)足蜜蜂發(fā)育所需的最低水平。蘇松坤等[8-9]測(cè)定茶蜂糧中蛋白質(zhì)、總糖、水解氨基酸含量比蜂花粉高,證實(shí)茶蜂糧比茶蜂花粉更易于被消化。Tavdidishvili等[10]測(cè)定蜂糧的黃酮類(lèi)化合物含量高于蜂花粉。此外,研究表明蜂糧具有明顯的抑菌[11-12]、抗氧化[3]和抗腫瘤功效[4,13-14]。蜂糧作為一種天然的健康食品,越來(lái)越受到人們的重視。

油菜蜂花粉作為我國(guó)主要的商品蜂花粉之一,在食品、醫(yī)療保健等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,但關(guān)于油菜蜂糧的研究甚少。本文以油菜蜂花粉和蜂糧為研究對(duì)象,對(duì)其水分、灰分、還原糖、蛋白質(zhì)、粗脂肪和總黃酮的含量、氨基酸和脂肪酸組成等進(jìn)行比較分析,這對(duì)深入了解油菜蜂糧的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值具有重要意義,為其在食品和制藥等領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

油菜蜂花粉、油菜蜂糧 云南蜂知道蜂業(yè)科技有限公司;蘆丁、色氨酸、17種氨基酸酸混合標(biāo)準(zhǔn)品 Sigma公司;乙腈、甲醇、正庚烷(色譜純),其他(分析純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

AL204電子天平 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司;DHG-9101-2SD電熱鼓風(fēng)干燥箱 常州智博瑞儀有限公司;SXL-1200C 1200 ℃箱式電爐 上海鉅晶精密儀器制造有限公司;T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;HHS-11-2電熱恒溫水浴鍋 上海簡(jiǎn)譜儀器有限公司;7980A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、Agilent 1260 高效液相色譜儀 安捷倫科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理 將油菜蜂花粉和蜂糧樣品研磨成粉末狀儲(chǔ)存于玻璃瓶中,密閉、避光、-18 ℃保存,待用。

1.2.2 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定 水分含量測(cè)定參照GB5009.3-2016中直接干燥法[15];灰分含量測(cè)定參照GB/T 5009.4-2016中灼燒法[16];還原糖含量測(cè)定參照GB/T 5009.7-2016中直接滴定法[17];蛋白質(zhì)含量測(cè)定參照GB/T 5009.5-2016法[18];粗脂肪含量測(cè)定參照GB/T 5009.6-2003法[19]。

1.2.3 總黃酮含量的測(cè)定 總黃酮含量參照GB/T 30359-2013中黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定法[20]。

1.2.4 氨基酸的測(cè)定 取0.1 g樣品于20 mL水解管中,加入8 mL的 6 mol/L鹽酸溶液,真空脫氣30 min,充氮封管,110 ℃下水解24 h,取出冷卻開(kāi)管,用去離子水無(wú)損轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中定容。準(zhǔn)確移取1 mL 水解液于小瓶中,在真空中脫酸抽干,加1 mL水再抽干,再加1 mL水再抽干,備用。準(zhǔn)確加入10 mL的0.02 mol/L鹽酸溶液,充分溶解,準(zhǔn)確移取鹽酸溶解液500 μL,置于5 mL塑料離心管中,精密加入1 mol/L三乙胺乙腈溶液250 μL,混勻,準(zhǔn)確加入0.1 mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液250 μL,混勻,室溫放置1 h,加2 mL正己烷,劇烈振搖,放置10 min,取下層溶液用0.45 μm的濾膜過(guò)濾上機(jī)分析。

其次，大數(shù)據(jù)下的開(kāi)放性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室能夠?yàn)閷W(xué)生提供實(shí)現(xiàn)自身價(jià)值的平臺(tái)。大數(shù)據(jù)下的開(kāi)放性創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理，可以更好地為學(xué)生營(yíng)造一個(gè)發(fā)散思維、實(shí)現(xiàn)自身創(chuàng)新想法的平臺(tái)，這樣也就為理工類(lèi)學(xué)生提供了一個(gè)實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想的機(jī)會(huì)，從這一個(gè)層面上展開(kāi)分析可知，這對(duì)于學(xué)生的吸引力仍然是非常重要的。從這個(gè)方面再次與傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理模式展開(kāi)比較可知，很顯然傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室教學(xué)管理模式與這樣的目標(biāo)是背道而馳的。充分采用大數(shù)據(jù)開(kāi)放性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理模式，可以很好地節(jié)省人力成本，同時(shí)還能更加規(guī)范化以及高效化地對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施展開(kāi)科學(xué)化的保管以及使用，所以這樣的模式受到了當(dāng)前全國(guó)范圍內(nèi)大部分業(yè)內(nèi)專(zhuān)家學(xué)者的廣泛關(guān)注與研究。

色譜條件:色譜柱為Aglient C18液相色譜柱(4.6×250 mm×5 μm);流動(dòng)相為乙腈-0.1 mol/L乙酸鈉(3∶97)(用乙酸調(diào)節(jié)pH6.5);柱溫為40 ℃;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

1.2.5 脂肪酸的測(cè)定 參照GB 5009.168-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》方法[21],稱(chēng)取0.1 g左右樣品于250 mL平底燒瓶中,加入100 mg焦性沒(méi)食子酸,幾粒沸石,2 mL的95%乙醇混勻,加入10 mL鹽酸溶液,并將燒瓶置于70～80 ℃的水浴鍋中加熱,水解后加入10 mL的95%乙醇,混勻。將水解液倒入分液漏斗中,用50 mL乙醚石油醚混合溶液沖洗蓋子及瓶子,振搖5 min,靜置10 min,將提取液收集到250 mL 燒瓶中,重復(fù)上述操作3次。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮致干后,加入8 mL的2%氫氧化鈉甲醇溶液,在79～81 ℃水浴上用回流冷凝器回流,直至油滴消失。從回流器上端加入7 mL的三氟化硼甲醇溶液,繼續(xù)在79～81 ℃水浴上回流2 min,取下燒瓶并冷卻至室溫后加入20 mL正庚烷,振搖,加入飽和氯化鈉水溶液,靜置分層,吸取上層提取液5 mL于25 mL的試管中,加3～5 g無(wú)水硫酸鈉,振搖1 min,吸取上清液待測(cè)。氣相色譜條件、質(zhì)譜條件參照董志儉等的方法[22]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)采用SPSS 25.0軟件,差異顯著性水平為p<0.05,所有表格均采用Microsoft Excel 2003軟件繪制。

2 結(jié)果與討論

2.1 油菜蜂花粉與蜂糧常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的檢測(cè)結(jié)果

表1中列出了本研究中油菜蜂花粉及其蜂糧,以及已有文獻(xiàn)中不同植物源蜂花粉和蜂糧的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量。由表1列出的本研究中油菜蜂花粉與蜂糧的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量可知,油菜蜂糧的水分含量、還原糖含量和粗脂肪含量顯著高于蜂花粉(p<0.05);而灰分含量和蛋白質(zhì)含量含量顯著低于蜂花粉(p<0.05)。

由表1列出的已有文獻(xiàn)[7-8,23-26]中不同植物源蜂花粉和蜂糧的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量可知,油菜蜂花粉和油菜蜂糧的營(yíng)養(yǎng)成分組成與茶蜂花粉、蘆薈蜂花粉及其同種植物源的蜂糧營(yíng)養(yǎng)成分比較規(guī)律一致[7-8]。不同植物、不同產(chǎn)地蜂花粉和蜂糧的營(yíng)養(yǎng)成分組成存在差異。蜂花粉的水分含量<20%,與Roulston等[27]的研究結(jié)果一致;蜂糧的水分含量顯著高于蜂花粉(p<0.05),符合蜂糧是由蜜蜂將采集的蜂花粉添加少量花蜜和腺體分泌物后發(fā)酵而成的特點(diǎn)。

蜂花粉和蜂糧的粗脂肪含量為2.34%～7.60%,蛋白質(zhì)的含量為15.79%～31.40%,具有低脂肪、高蛋白的特點(diǎn)。蜂花粉中蛋白質(zhì)含量是衡量其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值一種最直接而有效的方法[28-29]。由表1可知,不同植物源蜂花粉的蛋白質(zhì)含量差異較大,最高為蘆薈蜂花粉(31.40%),最低為荷花蜂花粉(15.79%),而蜂糧的蛋白質(zhì)含量均顯著低于蜂花粉(p<0.05)。

表1 蜂花粉和蜂糧的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Comparison of the basic nutritional content of bee pollen and bee bread

蜂花粉中的花粉粒具有堅(jiān)硬的細(xì)胞壁,經(jīng)過(guò)破壁后,其營(yíng)養(yǎng)成分在人體的吸收和利用大大提高[30]。蜂花粉經(jīng)過(guò)物理、機(jī)械及生物等方法充分破壁后可以提高其吸收利用率,但破壁處理不僅增加了成本,還容易造成部分營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)的損失。自然發(fā)酵的蜂糧經(jīng)過(guò)復(fù)雜的微生物變化造成萌發(fā)孔處的裂痕明顯增大,導(dǎo)致內(nèi)含物的吐露數(shù)量顯著增加,相當(dāng)于細(xì)胞壁受到破壞[31],因而推斷蜂糧的蛋白質(zhì)含量會(huì)明顯高于蜂花粉。但本研究及已有文獻(xiàn)報(bào)道顯示,蜂糧蛋白質(zhì)的含量明顯低于蜂花粉,這是否與發(fā)酵過(guò)程中蛋白質(zhì)大分子被分解為小分子類(lèi)物質(zhì)有關(guān),還需進(jìn)一步深入研究。

2.2 油菜蜂花粉與蜂糧總黃酮的檢測(cè)結(jié)果

黃酮類(lèi)化合物是油菜蜂花粉的基本標(biāo)志性成分,主要包括槲皮素、山奈酚、異鼠李素和柚皮素等,具有明顯的體外抗氧化功能[32]。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,本實(shí)驗(yàn)獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為:C=0.0012A-0.0149,相關(guān)系數(shù)R2=0.9995。在0.20～1.20 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)照品的量與吸光度有良好的線性關(guān)系。

通過(guò)計(jì)算本研究測(cè)得油菜蜂花粉總黃酮含量為3.72%±0.01%,與青海油菜蜂花粉中總黃酮含量為3.70%接近[33],顯著高于油菜蜂糧中的總黃酮含量2.46%±0.01%(p<0.05)。該結(jié)果與Tavdidishvili等[10]測(cè)得蜂花粉和蜂糧總黃酮含量分別為10.1%和8.2%的規(guī)律一致,但文中沒(méi)有給出該種黃酮含量較高花粉源植物的名稱(chēng)。

2.3 油菜蜂花粉與蜂糧氨基酸組成的檢測(cè)結(jié)果

蜂花粉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值一定程度上取決于其蛋白質(zhì)的含量和質(zhì)量,而氨基酸組成是衡量蛋白質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)[26]。表2列出了本研究中油菜蜂花粉及其蜂糧的氨基酸含量,以及已有文獻(xiàn)[9,23,26,34]報(bào)道的不同植物源蜂花粉和蜂糧的氨基酸含量。由表2可知,本研究中油菜蜂花粉和蜂糧中均檢測(cè)到17種水解氨基酸和色氨酸,包含成人全部所需的8種必需氨基酸。其中,亮氨酸和賴(lài)氨酸是主要的必需氨基酸,谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、脯氨酸和胱氨酸是主要的非必需氨基酸,但不同種植物源蜂花粉和蜂糧中氨基酸的含量存在差異(表2)。在油菜蜂花粉中,谷氨酸的含量最高,為2.52 g/100 g,其次為天冬氨酸,為1.80 g/100 g,與Yang Kai等[23]測(cè)定的該品種蜂花粉的氨基酸組成結(jié)果一致。同種植物源蜂花粉因產(chǎn)地不同，總氨基酸含量也會(huì)差異明顯,青海油菜蜂花粉的總氨基酸含量為21.68 g/100 g[23],明顯高于本研究中云南油菜蜂花粉的總氨基酸含量19.72 g/100 g。在油菜蜂糧中,谷氨酸的含量最高,與蘇松坤等[9]研究的茶蜂糧結(jié)果一致,分別為1.84和2.82 g/100 g。

本研究中油菜蜂花粉和蜂糧的總必需氨基酸(EEA)含量分別為6.85和6.77 g/100 g,與荷花蜂花粉的總必需氨基酸含量接近[23];二者差異不顯著(p>0.05),與茶蜂花粉和茶蜂糧的必需氨基酸組成規(guī)律一致[9]。從營(yíng)養(yǎng)學(xué)角度考慮,蜂花粉是必需氨基酸的良好來(lái)源。依據(jù)聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)提出的參考蛋白模式,食品中總必需氨基酸占總氨基酸(EAA/TAA)的0.4(百分含量比計(jì)為40%)左右[35]。本研究測(cè)定油菜蜂花粉和蜂糧的EAA/TAA為34.74%～37.80%,但是青海產(chǎn)油菜蜂花粉的EAA/TAA為41.70%,明顯高于其他蜂花粉和蜂糧。表2中列出的不同植物來(lái)源蜂花粉的EAA/TAA為34.74%～41.70%,蜂糧的EAA/TAA為35.29%～37.80%,與FAO/WHO提出的參考蛋白模式接近。Szezesna[36]認(rèn)為蜂花粉的氨基酸和蛋白質(zhì)含量與粉源植物有關(guān),而EAA/TAA相對(duì)穩(wěn)定,與植物來(lái)源無(wú)關(guān),但同種植物源的蜂花粉是否與產(chǎn)地有關(guān)還需要進(jìn)一步研究。

表2 蜂花粉和蜂糧的氨基酸組成Table 2 The amino acid compositions of bee pollen and bee bread

2.4 油菜蜂花粉與蜂糧脂肪酸組成的檢測(cè)結(jié)果

蜂花粉作為一種特殊的保健食品,脂肪酸是其最重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一。本研究在油菜蜂花粉和蜂糧中共檢測(cè)到8種脂肪酸,而潘建國(guó)等[37]在油菜花粉中檢測(cè)到了10 種脂肪酸,楊藝婷[38]在油菜蜂花粉中共檢測(cè)到19種脂肪酸,與本研究差異較大,這種差異可能是因?yàn)槎ㄐ苑椒ǖ牟煌斐傻摹?/p>

脂肪酸分為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸。棕櫚酸具有降低血清中膽固醇含量的作用,而膳食中的月桂酸和肉豆蔻酸會(huì)增加血清膽固醇[39],用棕櫚酸和油酸替代膳食中的月桂酸和肉豆蔻酸可能對(duì)治療血栓有益[40]。由表3可知,油菜蜂花粉和蜂糧的飽和脂肪酸含量分別為50.39%、51.82%,其中棕櫚酸含量最高,分別達(dá)到33.81%、33.50%,與楊藝婷[38]分析的20種蜂花粉的結(jié)果一致。油菜蜂花粉和蜂糧中的油酸含量分別為5.68%、3.89%(表3)。因而,油菜蜂花粉和蜂糧可以用于改善血栓疾病的功能性食品的開(kāi)發(fā)。

表3 油菜蜂花粉及其蜂糧的脂肪酸組成Table 3 The fatty acid compositions of rape bee pollen and rape bee bread

亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸是人體正常生長(zhǎng)發(fā)育所必需,而自身又不能合成的多不飽和脂肪酸,稱(chēng)為必需脂肪酸[41]。亞油酸是必需由食物提供的主要必需脂肪酸,亞麻酸在人體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化為DHA 和 EPA,二者具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂和膽固醇、預(yù)防心腦血管疾病、減肥、抗氧化、抗腫瘤、促進(jìn)嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育等生理功能[42-45]。由表3可知,油菜蜂花粉和蜂糧中不飽和脂肪酸含量分別為49.61%、48.18%,其中亞麻酸含量最高,分別為32.42%、38.22%,其次是亞油酸,含量分別為5.40%、6.07%,并且油菜蜂糧中的亞麻酸、亞油酸含量明顯高于油菜蜂花粉。綜上,油菜蜂花粉和蜂糧具有開(kāi)發(fā)降低膽固醇、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的功能性產(chǎn)品的潛力,可能是一種良好的原料來(lái)源。

3 結(jié)論

本研究分析油菜蜂花粉和蜂糧的營(yíng)養(yǎng)成分,結(jié)果顯示,油菜蜂糧水分、還原糖和粗脂肪的含量高于油菜蜂花粉,灰分、蛋白質(zhì)和黃酮的含量低于后者,差異顯著(p<0.05);油菜蜂花粉及其蜂糧包含8種必需氨基酸,蜂糧的EEA/TAA值顯著高于蜂花粉,分別為37.80%和34.74%(p<0.05);二者飽和脂肪酸中棕櫚酸含量最高,分別為33.81%、33.50%;不飽和脂肪酸中亞麻酸含量最高,大于30%,且油菜蜂糧的亞油酸、亞麻酸含量顯著高于油菜蜂花粉(p<0.05)。該結(jié)果與已有研究文獻(xiàn)中蜂花粉和蜂糧的營(yíng)養(yǎng)成分比較規(guī)律一致,不僅充實(shí)了蜂花粉和蜂糧營(yíng)養(yǎng)成分的研究?jī)?nèi)容,也進(jìn)一步證實(shí)不同植物源、不同產(chǎn)地蜂花粉和蜂糧的營(yíng)養(yǎng)成分組成存在差異。此外,油菜蜂花粉和蜂糧豐富的必需氨基酸組成和較高的必需脂肪酸含量既能滿(mǎn)足人體的需求,還可以作為一種良好的潛在原料用于功能性食品的開(kāi)發(fā)。本文仍然存在不足,研究的油菜蜂花粉和蜂糧只是取自云南昭通地區(qū),而同種植物源蜂花粉的營(yíng)養(yǎng)成分與地域密切相關(guān),因此還需要對(duì)全國(guó)范圍內(nèi)其他地區(qū)的油菜蜂花粉和蜂糧進(jìn)行取樣研究。