俞霖潔,吳航俊,孫小波,龐雯斐,唐利斌,林夢佳
(浙江省化工研究院有限公司,杭州 310023)
四氟醚唑(tetraconazole)屬三唑類殺菌劑,主要用于防治小麥白粉病、銹病,玉米絲黑銹病,蘋果斑點落葉病和葡萄白粉病等[1]。嘧菌酯(azoxystrobin)是先正達公司于1997年上市的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,用于防治白粉病、銹病、穎枯病、網(wǎng)斑病、霜霉病等,目前國內(nèi)外登記防治的植物病害有400多種[2]。四氟醚唑和嘧菌酯復(fù)配,既可減少單劑成分用量,降低藥害風(fēng)險,又可以提高病害防治效果。
目前四氟醚唑的檢測方法主要為氣相色譜法[3-4],嘧菌酯的檢測方法主要為氣相色譜法[5]和液相色譜法[6],四氟醚唑和嘧菌酯復(fù)配制劑的分析方法尚未見報道。本試驗采用Inertsil ODS-3色譜柱和二極管陣列檢測器,建立了四氟醚唑和嘧菌酯同柱分離測定的高效液相色譜法。該方法操作簡便、快速,分離效果好,準(zhǔn)確度和精密度均能達到定量分析的要求,可為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制和質(zhì)檢機構(gòu)質(zhì)量檢測提供參考。
Dionex U3000高效液相色譜儀(熱電),具二極管陣列檢測器、自動進樣器和Chromeleon 7.0色譜處理工作站;色譜柱:Inertsil ODS-3不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);甲醇(色譜純),臨海市浙東特種試劑有限公司;水:2次蒸餾水;四氟醚唑標(biāo)準(zhǔn)品(≥98.5%)、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(≥98.9%)、18%四氟·嘧菌酯懸乳劑(8%四氟醚唑+10%嘧菌酯),杭州宇龍化工有限公司提供。
流動相:甲醇+水(體積比為80∶20);流速:1.0 mL/min;柱溫:35 ℃;檢測波長:225 nm;進樣量:5 μL;保留時間:嘧菌酯約4.4 min、四氟醚唑約5.5 min。典型的標(biāo)樣及18%四氟·嘧菌酯懸浮劑樣品液相色譜分離圖見圖1、圖2。
圖1 嘧菌酯、四氟醚唑標(biāo)樣液相色譜圖
圖2 18%四氟·嘧菌酯懸乳劑液相色譜圖
1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制
稱取約15 mg(精確至0.000 2 g)四氟醚唑標(biāo)樣和20 mg嘧菌酯標(biāo)樣于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解稀釋并定容,充分搖勻,靜置,備用。
1.3.2 試樣溶液的配制
稱取約0.2 g(精確至0.000 2 g)18%四氟·嘧菌酯懸乳劑樣品,置于100 mL容量瓶中,先用約5 ml水溶解樣品,再用甲醇超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜過濾后待用。
1.4.1 測定
在上述操作條件下,待儀器穩(wěn)定后,連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液。計算各針相對響應(yīng)值,待相鄰2針的相對響應(yīng)值小于1.5%時,按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定。
1.4.2 計算
將測得的2針試樣溶液以及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)的峰面積分別進行平均。試樣中四氟醚唑(嘧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w(%)按下式計算。
式中:A1為標(biāo)樣溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)峰面積的平均值;A2為試樣溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)峰面積的平均值;m1為標(biāo)樣的質(zhì)量,g;m2為試樣的質(zhì)量,g;p為標(biāo)樣中四氟醚唑(嘧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%。
通過二極管陣列檢測器的光譜數(shù)據(jù)采集功能,獲得四氟醚唑與嘧菌酯的紫外吸收曲線。四氟醚唑在200~230 nm處有較強的吸收,嘧菌酯在200~270 nm處有較強的吸收。由于懸乳劑配方比較復(fù)雜,為兼顧2種有效成分的吸收強度與比例,減小溶劑、助劑等雜質(zhì)干擾,經(jīng)比對分析,最終確定以225 nm作為檢測波長。在此波長下四氟醚唑和嘧菌酯峰形良好,紫外吸收比例合適,基本不受雜質(zhì)干擾。
分別選用了甲醇+水、甲醇+乙腈+水、乙腈+水為流動相進行試驗。試驗結(jié)果表明,以甲醇+水(體積比為80∶20)、甲醇+乙腈+水(體積比為40∶40∶20)、乙腈+水(體積比為75∶25)為流動相時,均能將2種成分有效分離,獲得的峰形尖銳對稱。其中,以甲醇+水(體積比為80∶20)流動相獲得的目標(biāo)物峰形最為理想,分離效率最高,且用時較短。最終確定甲醇+水(體積比為80∶20)為流動相。
分別稱取四氟醚唑和嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品約10 mg(準(zhǔn)確至0.000 2 g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇超聲溶解,稀釋,定容,搖勻。用移液管分別準(zhǔn)確移取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 mL上述溶液于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋,定容,搖勻。在上述液相色譜操作條件下進行測定。以四氟醚唑(嘧菌酯)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),四氟醚唑(嘧菌酯)峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得四氟醚唑線性回歸方程為y=21.669x-0.174 2,相關(guān)系數(shù)為0.999 5,嘧菌酯線性回歸方程為y=60.798x-1.051 4,相關(guān)系數(shù)為0.999 9。試驗結(jié)果表明,四氟醚唑和嘧菌酯在測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
任意稱取一個18%四氟·嘧菌酯懸乳劑在上述方法下重復(fù)測定5次,分別獲得四氟醚唑和嘧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù),結(jié)果見表1。
由表1可知,樣品中四氟醚唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.85%,標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.010,變異系數(shù)為0.16%;嘧菌酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.46%,標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.015,變異系數(shù)為0.06%。結(jié)果表明該分析方法精密度良好。
表1 方法的精密度實驗測定結(jié)果
在已知含量的18%四氟·嘧菌酯懸乳劑樣品,分別準(zhǔn)確加入一定量四氟醚唑和嘧菌酯標(biāo)樣溶液,根據(jù)稱取樣品量和加入標(biāo)樣量計算出四氟醚唑和嘧菌酯的理論含量。按照上述色譜操作條件操作,分析結(jié)果見表2。四氟醚唑回收率為98.49%~100.98%,平均回收率為99.99%,嘧菌酯回收率為99.23%~100.37%,平均回收率為99.23%,均滿足常量分析要求,方法準(zhǔn)確度良好。
表2 方法的準(zhǔn)確度實驗測定結(jié)果
本方法以O(shè)DS-3 C18為分離柱,二極管陣列為檢測器,225 nm為檢測波長,測定18%四氟·嘧菌酯懸乳劑中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。該方法分離效果好,操作簡便,定量準(zhǔn)確,重復(fù)性、線性關(guān)系良好,滿足產(chǎn)品質(zhì)量分析要求。