王 欣 ，李 兵 ，唐 坤,

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.北京昌威科技有限公司，北京 100085）

天力通片是由天麻、人參等多味名貴藥材制成的保健食品，具有緩解疲勞功能，主要適宜于易疲勞者。天麻為天力通片的主要原料，研究表明天麻中所含的天麻素是緩解疲勞的活性成分[1-2]。本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定天力通片中活性成分天麻素含量的方法，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，為同類產(chǎn)品中天麻素的含量測(cè)定提供參考。

1 儀器與試藥

Waters 2690液相色譜儀（996 PDA檢測(cè)器，美國(guó)沃特世公司），賽多利斯SQP型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius），ELGA/超純水器（美國(guó)PURELAB Classic），KQ-700DE數(shù)控超聲波清洗器型號(hào)（昆山市超聲儀器公司）。

天麻素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110807-201608，含量：97.6 %）；乙腈（色譜純） ；磷酸（優(yōu)級(jí)純）；天力通片（批號(hào)：20170501，20170502，20170503，由北京昌威科技有限公司提供）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99），流動(dòng)相臨用前以微孔濾膜過(guò)濾并經(jīng)超聲脫氣處理；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣體積：10 μl。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)（以天麻素對(duì)照品溶液峰計(jì)算）不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取天麻素對(duì)照品10 mg，加流動(dòng)相溶解并稀釋至20 ml，搖勻，制得每1 ml含天麻素0.5 mg對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1 ml，置入10 ml量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，制得每1 ml含天麻素50 μg對(duì)照品溶液。

圖1 天麻素測(cè)定專屬性試驗(yàn)HPLC圖譜

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品研成細(xì)粉（過(guò)三號(hào)篩），精密稱取過(guò)篩細(xì)粉2.00 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50 %稀乙醇50 ml，稱定重量，超聲處理（功率120 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，濃縮至近干，加乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液溶解，全部轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，用乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性 參照天力通片的配方和工藝，制備不含天麻的陰性樣品，按2.2.2項(xiàng)下的方法制成陰性樣品溶液。分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性樣品溶液按2.1色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，樣品中其他成分對(duì)測(cè)定沒(méi)有干擾，方法具有較強(qiáng)的專屬性。

2.3.2 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，在0，2，4，6，8，10，12 h，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣10 μl，測(cè)得天麻素峰面積RSD為0.56 %（n=7），結(jié)果表明，樣品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.3 線性 分別精密量取2.2.1項(xiàng)下天麻素對(duì)照品溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定峰面積。以天麻素進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=569 027X-9382.1（r=0.9993），表明天麻素進(jìn)樣量在0.1～0.6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度 取2.2.1項(xiàng)下濃度為50 μg/ml天麻素對(duì)照品溶液，在2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。連續(xù)6次進(jìn)樣的峰面積RSD值為0.43 %。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性 取供試品，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，樣品中天麻素平均含量為7.08 mg/g，RSD值為2.37 %（n=6），表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.6 檢測(cè)限和定量限 將2.2.1項(xiàng)下天麻素對(duì)照品溶液，按不同比列進(jìn)行稀釋，進(jìn)樣量10 μl，當(dāng)信噪比（S/N）為3:1時(shí)，天麻素對(duì)照品溶液濃度為0.25 μg/ml，檢測(cè)限為2.50 ng；當(dāng)信噪比（S/N）為10:1時(shí)，天麻素對(duì)照品溶液濃度為0.42 μg/ml，定量限為4.20 ng。

2.3.7 回收率 取已知天麻素含量（7.00 mg/g）的樣品6份，每份1.00 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別加入對(duì)照品適量，按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理，進(jìn)樣量10 μl，測(cè)定天麻素的回收率。結(jié)果經(jīng)加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定，樣品中天麻素的回收率范圍為96.39 %～100.40 %，平均值為98.70 %，RSD為1.36 %（表 1），結(jié)果回收率良好。

表1 天麻素加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品測(cè)定

按上述色譜條件，檢測(cè)3批天力通片樣品中天麻素的含量，結(jié)果3批樣品天麻素含量的平均值是6.92 mg/g，RSD值為0.928 %（表2）。結(jié)果表明，本產(chǎn)品天麻素的測(cè)定方法適用、可控、穩(wěn)定。

表2 3批樣品中天麻素的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

天麻為天力通片配方中主要原料，天麻素（gastrodin，對(duì)羥基苯甲醇-β-D-吡喃葡萄糖苷）是天麻的主要化學(xué)成分，也是天麻活性成分中含量最高的單體成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，天麻素能增強(qiáng)小鼠抗疲勞能力[3-4]，2015年版《中國(guó)藥典》將天麻素作為天麻質(zhì)量控制的主要功效成分指標(biāo)[5]，因此本文選擇天麻素作為天力通片的主要標(biāo)志性成分。

色譜條件的流動(dòng)相參考2015年版《中國(guó)藥典》中天麻素含量測(cè)定所使用的流動(dòng)相，但2015年版《中國(guó)藥典》所使用的流動(dòng)相為乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97），對(duì)本產(chǎn)品中天麻素峰和相鄰色譜峰之間的分離效果不太理想。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，天麻素含量測(cè)定的流動(dòng)相有：乙腈-0.03 %磷酸溶液（1:99)[6]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97）[5]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（2:98）[7]，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)摸索比較后得出乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）時(shí)，峰形好，基線穩(wěn)定，分離效果最佳。因此以乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）作為天力通片測(cè)定天麻素的最佳流動(dòng)相。

方法學(xué)考察結(jié)果表明， 本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC法可準(zhǔn)確測(cè)出天力通片中天麻素的含量，此方法操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，因此可作為天力通片及其同類產(chǎn)品中天麻素含量測(cè)定方法學(xué)研究提供參考。