郭 穎，馬 冬，賈世峰，劉 佳，樊少蓓，張 夢，石琳然，蔣利麗，史玨鑫，王海秋，鄭寰宇，李 鷗

1華北理工大學(xué)研究生學(xué)院，河北唐山 0632002華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤外科，河北唐山 0630003唐山市工人醫(yī)院婦二科，河北唐山 063000

近年雖然宮頸癌發(fā)病率的趨勢略有下降，但死亡率仍持續(xù)穩(wěn)定[1]。由于宮頸癌的發(fā)病機(jī)制仍不明確，導(dǎo)致宮頸癌的晚期治療及預(yù)后效果仍然不佳[2- 3]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長約22個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，是腫瘤發(fā)生中重要的生物標(biāo)記物[4]，通過靶向抑制參與腫瘤發(fā)生的相關(guān)基因表達(dá)從而發(fā)揮生物學(xué)功能，其中包括抑制轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。盡管已有報(bào)道m(xù)iRNA芯片篩選證實(shí)miR- 365在宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào)[5]，但是其相關(guān)研究及分子機(jī)制仍未見報(bào)道。E74樣因子4(E74-like factor 4，ELF4)是轉(zhuǎn)錄因子ETS家族的一個(gè)成員，已被證明參與免疫反應(yīng)、成骨、成脂、癌癥發(fā)生的過程[6]。有報(bào)道在卵巢惡性上皮性腫瘤中，ELF4異常表達(dá)升高明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增長[7]。另外，通過生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR- 365與ELF4的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)存在潛在的互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，而宮頸癌也是起源于宮頸上皮的惡性腫瘤，推測ELF4可能作為miR- 365的靶基因發(fā)揮腫瘤增殖功能的調(diào)控作用。因此，本研究探討miR- 365在宮頸癌中的表達(dá)及其與ELF4的關(guān)系和臨床意義，為宮頸癌的診治提供新的分子靶點(diǎn)。

對象和方法

對象選取2014年7月至2017年1月在唐山工人醫(yī)院行宮頸活檢及手術(shù)治療的病例，臨床資料完整，且術(shù)前并未接受過放化療的病例，共135例，其中行全子宮切除的良性病變正常宮頸34例，宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)68例(其中CINⅠ31例、CINⅡ～Ⅲ 37例)，術(shù)后病理回報(bào)為宮頸鱗癌(squamous cell carcinoma of the cervix，SCC)33例。CIN組及SCC組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料完整；(2)病理明確診斷為 CIN、SCC；(3)術(shù)前未接受過放、化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前 3 個(gè)月內(nèi)曾行宮頸治療，如陰道用藥、激光治療等；(2)患者為妊娠狀態(tài)；(3)同時(shí)合并其他婦科惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等；(4)同時(shí)合并其他臟器腫瘤，如腸道、乳腺腫瘤等。正常組納入標(biāo)準(zhǔn)：宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查未見非典型鱗狀細(xì)胞或癌細(xì)胞。排除標(biāo)準(zhǔn)與CIN組及SCC組相同。所取標(biāo)本均經(jīng)本院病理科主任醫(yī)師證實(shí)，且取材前均未行放療、化療或免疫治療。標(biāo)本收集后于-80 ℃冰箱保存。所有標(biāo)本取材患者知情同意，本研究經(jīng)唐山工人醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。臨床分期按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(2009年)標(biāo)準(zhǔn)分期，病理類型及分型按WHO標(biāo)準(zhǔn)(2003版)[8]。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測miR- 365在宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)將液氮保存的宮頸組織或培養(yǎng)的宮頸癌細(xì)胞采用Trizol試劑提取總RNA(依據(jù)RNA提取試劑盒說明)，包括miRNA，對miRNA進(jìn)行分析，miR- 365的莖環(huán)RT引物參考序列為：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACATAAGG- 3’，實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列為：5’-CGTAATGCCCCTAAAAAT- 3’和5’-GTGCAGGGTCCGAGGT- 3’。采用U6作為內(nèi)參，實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA- 3’和5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT- 3’[9]。擴(kuò)增反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性180 s、95 ℃變性10 s，55 ℃退火30 s，變性、退火循環(huán)39次。用公式2-△△Ct循環(huán)閾值法將miR- 365的相對表達(dá)水平歸一化為內(nèi)參U6的相對表達(dá)水平，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次[10]。

生物信息學(xué)預(yù)測miR- 365對ELF4的調(diào)控使用TargetScan 數(shù)據(jù)庫(www.targetscan.org)預(yù)測miR- 365對人ELF4基因3’非翻譯區(qū)(3’UTR)靶向調(diào)控關(guān)系。

雙熒光素酶報(bào)告基因分析miR- 365對ELF4的靶向調(diào)節(jié)作用設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物5’-CGGAAGTGCTTTC-AGACTCC- 3’和5’-GGTCAGTGACAGGTGAGGTA- 3’，構(gòu)建含有miR- 365應(yīng)答序列的人ELF4的3’UTR 片段，并插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒中形成ELF4-Luc質(zhì)粒。1×105Hela細(xì)胞接種于24孔板上，待細(xì)胞密度為80%后進(jìn)行轉(zhuǎn)染。miR- 365 模擬物組(實(shí)驗(yàn)組)和正常對照模擬物組(對照組)的終濃度為50 nmol/L，每孔分別加入0.5 μg ELF4-Luc質(zhì)粒及10 ng pRL-SV40 報(bào)告基因載體。轉(zhuǎn)染試劑采用Lipofectamine 2000。轉(zhuǎn)染6 h后換成10% FBS的高糖DMEM，再繼續(xù)培養(yǎng)24 h。預(yù)冷的PBS沖洗兩次，每個(gè)孔分別加入100 μl的1×細(xì)胞裂解液，室溫下震蕩裂解10 min。分別吸取每個(gè)孔的細(xì)胞裂解液到無菌的1.5 ml EP管中，4 ℃12 000×g離心2 min。每個(gè)孔取20 μl上清液于Dual-GloTM Luciferase分析系統(tǒng)進(jìn)行熒光檢測。熒光素酶分析試劑購自美國Promega公司。

Western blot蛋白檢測兔抗ELF4多克隆抗體(Sigma-Abnova公司，貨號(hào)：H00002000-A01)；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔 IgG、羊抗鼠IgG二抗，增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物試劑盒(江蘇碧云天生物技術(shù)研究所)。細(xì)胞裂解法提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA法檢測總蛋白含量，10% 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳，硝酸纖維膜轉(zhuǎn)印，5%脫脂奶粉封閉，一抗(1∶1000稀釋)4 ℃過夜孵育、洗膜、二抗(1∶2000稀釋)避光室溫孵育，洗膜，顯色。β-actin為內(nèi)參蛋白。通過Image J圖像分析軟件分析條帶灰度值，以目標(biāo)蛋白條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值表示目的基因相對蛋白表達(dá)水平，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

免疫組織化學(xué)檢測宮頸組織中ELF4蛋白表達(dá)所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛液固定，石蠟包埋，切片厚約4 μm。免疫組織化學(xué)均采用SP法按說明書進(jìn)行。隨機(jī)選取5個(gè)癌巢內(nèi)的視野，通過IPP 6.0圖像分析軟件分析棕色顆粒在整個(gè)視野內(nèi)所占的百分比。

體外細(xì)胞培養(yǎng)HeLa、C33A、SiHa細(xì)胞株及正常宮頸上皮細(xì)胞株(HcerEpic)均由河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院腫瘤研究所饋贈(zèng)，以含10%胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基、5%二氧化碳、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，細(xì)胞密度4×104/ml，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

CCK8法檢測3種宮頸癌細(xì)胞株增殖情況(1)取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期的細(xì)胞，分為miR- 365模擬物組、正常對照模擬物組、miR- 365抑制劑組、正常對照抑制劑組和空白對照組，每孔按 4×103個(gè)接種至 96 孔板中，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒；(2)培養(yǎng)細(xì)胞0、24、48、72和96 h后，每孔加10 μl CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h；(3)用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的光密度值(optical density，OD)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。按公式計(jì)算生長抑制率=[(實(shí)驗(yàn)組OD-對照組OD)/對照組OD]×100%，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)，繪制折線圖。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料均經(jīng)正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，采用Spearman秩相關(guān)性分析；計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

miR- 365在人宮頸癌組織中的表達(dá)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，與正常宮頸組織比較，在人宮頸癌組織中miR- 365的表達(dá)水平降低(0.75 比 1.31，t=3.802，P=0.001)(圖1A)；同樣在體外培養(yǎng)細(xì)胞中，與正常宮頸上皮細(xì)胞HcerEpic比較，在3種宮頸癌細(xì)胞(C33A細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、SiHa細(xì)胞)中miR- 365的表達(dá)均明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(SiHat=28.579，SiHaP=0.001；C33At=8.351，C33AP=0.013；HeLat=6.435，HeLaP=0.026)(圖1B)。

轉(zhuǎn)錄因子ELF4是miR- 365的直接靶點(diǎn)通過TargetScan 數(shù)據(jù)庫在線預(yù)測分析顯示，在ELF4的3’UTR上存在miR- 365結(jié)合的種子序列，提示miR- 365可能直接靶向調(diào)節(jié)ELF4基因的表達(dá)(圖2A)；進(jìn)一步熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)，過表達(dá)野生型miR- 365，ELF4熒光素酶活性明顯降低(t=2.896，P=0.028)，表明miR- 365顯著靶向抑制ELF4基因的表達(dá)，而過表達(dá)突變型miR- 365，這種抑制作用消失(t=0.089，P=0.272)(圖2B)。

ELF4在宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)Western blot檢測結(jié)果顯示，與正常宮頸上皮細(xì)胞比較，3種宮頸癌細(xì)胞中ELF4的蛋白表達(dá)水平均增高(t=8.821，P=0.013；t=22.327，P=0.002；t=6.985，P=0.004)(圖3)。

不同病理宮頸組織中ELF4蛋白的表達(dá)ELF4作為核蛋白發(fā)揮轉(zhuǎn)錄功能時(shí)免疫組織化學(xué)染色可見細(xì)胞核呈棕黃色顆粒。ELF4在正常宮頸組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ～Ⅲ組及SCC組的陽性染色面積百分比分別為(10.03±3.05)%、(20.12±2.88)% 、(71.20±3.43)%、(81.23±9.02)%，與正常宮頸組相比，CINⅡ～Ⅲ組及SCC組表達(dá)明顯增高(t=0.732，P=0.575；t=22.328，P=0.002；t=32.232，P=0.001)(圖4)。

Normal：正常宮頸組織；SCC：宮頸鱗癌；at=3.802，aP=0.001；與HcerEpic細(xì)胞比較，bt=28.579，bP=0.001，ct=8.351，cP=0.013，dt=6.435，dP=0.026

Normal：normal cervical tissue；SCC：squamous cell carcinoma of the cervix；at=3.802，aP=0.001；bt=28.579，bP=0.001，ct=8.351，cP=0.013，dt=6.435，dP=0.026 compared with HcerEpic cell

A.實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測正常宮頸組織、SCC組織中miR- 365的表達(dá)情況；B.實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測3種宮頸癌細(xì)胞(C33A、HeLa、SiHa)中miR- 365的表達(dá)

A.expressions of miR- 365 in normal cervical tissue and SCC were detected by real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction；B.expressions of miR- 365 in three cervical cancer cells(C33A，HeLa，SiHa)and normal control cervical cell HcerEpic were detected by real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction

圖1miR- 365在人宮頸癌組織中的表達(dá)

Fig1Expression of miR- 365 in human cervical cancer

ELF4：E74樣受體4；WT：野生型；Mut：突變型；aP=0.028

ELF4：E74-like factor 4；WT：wild type；Mut：mutant；aP=0.028

A.TargetScan 數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR- 365與ELF4的結(jié)合位點(diǎn)；B.熒光素酶報(bào)告基因分析miR- 365對 ELF4的靶向抑制作用

A.prediction of the binding site of miR- 365 with ELF4 3’-UTR by TargetScan database；B.analysis of the targeted inhibition of ELF4 by miR- 365 by using luciferase reporter gene assay

圖2miR- 365靶向調(diào)節(jié)ELF4的表達(dá)

Fig2Targeted regulation of ELF4 expression by miR- 365

與HcerEpic細(xì)胞比較，at=8.821，aP=0.013，bt=22.327，bP=0.002，ct=6.985，cP=0.004

at=8.821，aP=0.013，bt=22.327，bP=0.002，ct=6.985，cP=0.004 compared with HcerEpic cell

圖3Western blot檢測ELF4在3種宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況

Fig3Expression of ELF4 in three cervical cancer cell lines(Western blot)

CIN：宮頸上皮內(nèi)瘤變；與Normal比較，at=22.328，aP=0.002，bt=32.232，bP=0.001

CIN：cervical intraepithelial neoplasia；at=22.328，aP=0.002，bt=32.232，bP=0.001 compared with Normal

圖4免疫組織化學(xué)反應(yīng)ELF4在不同組織中的表達(dá)

Fig4Expressions of ELF4 in different tissues(immunohistochemistry)

miR- 365過表達(dá)或低表達(dá)對宮頸癌細(xì)胞增殖的影響CCK8結(jié)果顯示，在3種宮頸癌細(xì)胞中，與轉(zhuǎn)染正常對照模擬物組比較，miR- 365 模擬物組的OD450值在48 、72和96 h均顯著降低(SiHa：48 ht=5.212，48 hP=0.039；72 ht=6.958，72 hP=0.024；96 ht=7.045，96 hP=0.017；C33A：48 ht=0.986，48 hP=0.046；72 ht=6.378，72 hP=0.022；96 ht=7.545，96 hP=0.015；HeLa：48 ht=5.833，48 hP=0.035；72 ht=6.256，72 hP=0.028；96 ht=6.477，96 hP=0.022)；相反，與轉(zhuǎn)染正常對照抑制劑組比較，miR- 365抑制劑組3種細(xì)胞株的OD450值在48、72和96 h均升高(SiHa：48 ht=0.988，48 hP=0.043；72 ht=1.163，72 hP=0.037；96 ht=1.886，96 hP=0.020；C33A：48 ht=0.973，48 hP=0.044；72 ht=1.412，72 hP=0.034；96 ht=7.215，96 hP=0.014；HeLa：48 ht=1.447，48 hP=0.032；72 ht=1.856，72 hP=0.021；96 ht=9.869，96 hP=0.011)(圖5)。

ELF4的表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤病理分級(jí)及臨床分期的相關(guān)性在正常宮頸組織組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ～Ⅲ組及SCC組miR- 365與ELF4 mRNA表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，將miR- 365及ELF4 mRNA在宮頸鱗癌中表達(dá)情況分為低表達(dá)組及高表達(dá)組，并與臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示在正常宮頸組織組和CINⅠ組，miR- 365與ELF4 mRNA表達(dá)無相關(guān)性(r=0.227，P=0.285；r=-0.073，P=0.752)，而在CINⅡ～Ⅲ組及SCC組，兩者間表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.351，P=0.045；r=-0.349，P=0.035)(圖6)，同時(shí)，進(jìn)一步臨床病理參數(shù)分析表明，miR- 365和ELF4 mRNA的表達(dá)水平均與腫瘤大小、腫瘤病理分級(jí)及臨床分期相關(guān)(P均<0.05)(表1、2)。

討 論

miRNA通過與靶基因mRNA的3’端非翻譯區(qū)特異性結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控多個(gè)靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)并發(fā)揮腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)功能，已成為診斷和治療癌癥的新靶點(diǎn)[11]。有報(bào)道m(xù)iR- 365在肝癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，主要機(jī)制是通過靶向抑制人解整合素樣金屬蛋白酶10的表達(dá)調(diào)控肝癌細(xì)胞的增殖活性[12]；而其在惡性黑色素瘤中主要是通過靶向神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1抑制黑色瘤細(xì)胞的增殖[13]；在胃癌中主要通過靶向轉(zhuǎn)錄因子2抑制胃癌細(xì)胞的增殖[14]。通過前期miRNA表達(dá)譜芯片篩查和本研究實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)miR- 365在宮頸癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)下調(diào)，并且其表達(dá)與腫瘤大小、病理分級(jí)及臨床分期相關(guān)，提示其表達(dá)變化可能參與宮頸癌變過程，是腫瘤增殖的負(fù)向調(diào)節(jié)因子。

與正常對照模擬物組相比，aP<0.05；與正常對照抑制劑組相比，bP<0.05

aP<0.05 compared with normal control mimic group；bP<0.05 compared with normal control inhibitor group

A.SiHa；B.C33A；C.HeLa

圖5miR- 365抑制物或類似物對3種宮頸癌細(xì)胞增殖的影響

Fig5Effects of miR- 365 inhibitors or analogues on the proliferation of three cervical cancer cell lines

A.CIN Ⅱ-Ⅲ；B.SCC

圖6不同宮頸病理組織中miR- 365和ELF4的表達(dá)水平的相關(guān)性

Fig6Correlation between miR- 365 and ELF4 expressions in different cervical tissues

表1 宮頸鱗癌中miR- 365的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Table 1 Correlation between miR- 365 expression and clinicopathological features of squamous cell carcinoma of the cervix tissues

表2 宮頸鱗癌中ELF4 mRNA的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

人乳頭瘤病毒感染作為宮頸癌發(fā)生的必要因素，可通過改變相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)[15]。因此推測，miR- 365可能通過調(diào)節(jié)下游增殖調(diào)控相關(guān)基因，抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖活性和腫瘤的發(fā)生。ELF4是參與多種生物學(xué)過程的轉(zhuǎn)錄因子，是ETS家族中的一員，從有絲分裂到細(xì)胞凋亡參與細(xì)胞活動(dòng)的基因表達(dá)變化[16]，在上皮細(xì)胞中能夠組成性的激活溶菌酶基因、上調(diào)人β防御素2基因的轉(zhuǎn)錄水平[17]，可作為癌基因，在人類癌癥中過表達(dá)，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒插入的方式誘導(dǎo)癌癥的發(fā)生[18]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，ELF4在多種癌癥中表達(dá)上調(diào)[5，19]，高表達(dá)患者預(yù)后較差?；谏镄畔W(xué)分析預(yù)測，將ELF4作為miR- 365抑制腫瘤增殖的調(diào)控目標(biāo)，本研究證明ELF4基因在宮頸癌組織和細(xì)胞中表達(dá)均上調(diào)，并且其表達(dá)水平隨著宮頸組織病變的發(fā)展逐漸上調(diào)，熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)ELF4是受miR- 365調(diào)控的有效靶點(diǎn)。最后，通過相關(guān)性分析證實(shí)在宮頸癌組織中miR- 365與ELF4的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。因此，miR- 365靶向調(diào)節(jié)ELF4的表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中可能發(fā)揮了重要作用，抑制ELF4的表達(dá)可作為治療宮頸癌的潛在分子靶點(diǎn)。

探討癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制是至關(guān)重要的，人們普遍認(rèn)為細(xì)胞周期失調(diào)是腫瘤增殖的重要因素[20]。本研究顯示miR- 365在高級(jí)別宮頸病變及宮頸鱗癌中調(diào)節(jié)下游增殖功能相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄因子ELF4起到抑制腫瘤增殖的作用，但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)整體驗(yàn)證miR- 365及其下游靶分子與腫瘤生長的關(guān)系是本研究的一個(gè)限制，因此，進(jìn)一步研究ELF4如何參與宮頸腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制及其生物學(xué)功能驗(yàn)證將是下一步研究重點(diǎn)。

綜上，miR- 365在宮頸癌中表達(dá)下調(diào)，從而降低對ELF4表達(dá)的抑制作用，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖。因此激活miR- 365或抑制ELF4的表達(dá)可能是治療宮頸癌的有效措施。本研究為針對宮頸癌的進(jìn)一步的臨床研究和新的治療靶點(diǎn)的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。