朱孟玲，陳 華，張 超，曹沛宇

（江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇句容 212400）

在過去的幾十年里，抗生素被應(yīng)用于動(dòng)物飼料以預(yù)防疾病和提高生長(zhǎng)性能。然而，抗生素的使用也帶來了耐藥性和抗生素殘留等一系列問題。因此，尋找抗生素替代品成為研究熱點(diǎn)，益生菌因安全性和環(huán)境友好性受到研究者的青睞。據(jù)報(bào)道，某些益生菌可以提高動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)利用率、生長(zhǎng)性能和免疫力，抑制致病菌如大腸桿菌等的生長(zhǎng)，促進(jìn)抗炎因子的形成，降低腹瀉率，保持動(dòng)物健康（金爾光等，2018）。新生仔豬胃腸道微生物群不穩(wěn)定，容易發(fā)生腹瀉等疾病。早期使用適當(dāng)?shù)囊嫔M(jìn)行干預(yù)可能有助于乳豬建立穩(wěn)定的腸道微生物環(huán)境，促進(jìn)動(dòng)物早期的免疫發(fā)育（劉虎傳等，2012）。干酪乳桿菌和糞腸球菌是兩種常見的有益菌，作為飼料添加劑有良好的應(yīng)用效果，但其在乳豬上的研究尚不完善，因此，本試驗(yàn)旨在探究新生乳豬口服兩種益生菌對(duì)其生長(zhǎng)和免疫的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 干酪乳桿菌和糞腸球菌購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏中心，在MRS培養(yǎng)基中于37℃靜置孵育48 h，測(cè)定菌液活菌數(shù)后于4℃保存待用，菌液中活菌數(shù)為1×109CFU/ml。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在某規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行，選取15頭經(jīng)產(chǎn)母豬（2～4胎），產(chǎn)仔后每窩各選取8只乳豬平均分配到4組，每組30頭乳豬。對(duì)照組口服生理鹽水，試驗(yàn)1、2組分別口服干酪乳桿菌、糞腸球菌，試驗(yàn)3組口服兩者的混合菌液（3∶ 1），在出生后第 7、14、21天各灌喂 2、3、4 mL生理鹽水或菌液。乳豬在7日齡時(shí)開始飼喂教槽料，教槽料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 稱量仔豬出生時(shí)及出生后第7、21、28天體重，計(jì)算出生21 d的平均日增重（ADG21）、出生21～28 d的平均日增重（ADG21～28）。

1.3.2 免疫功能測(cè)定 每天對(duì)乳豬進(jìn)行腹瀉評(píng)分，計(jì)算腹瀉率。仔豬28日齡時(shí)每組選取與平均體重相近的乳豬各15頭，屠宰后心臟采集血液樣品，靜置離心后取上層血清。用ELISA試劑盒測(cè)定血清中免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）濃度。

表1 教槽料配方及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 20.0進(jìn)行方差分析，Duncan’s法多重比較，GLM多因素方差分析計(jì)算交互效應(yīng)。數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，相比于對(duì)照組，試驗(yàn)1、3組21日齡體重分別增加11.5%、13.4%（P＜0.05），試驗(yàn) 1、2、3組 28日齡體重分 別增加 10.2%、9.2%、11.0%（P＜ 0.05），ADG（21 d）分別增加16.7%、15.8%、17.6%（P＜0.05），ADG（21～28 d）分別增加17.5%、19.3%、27.7%（P＜ 0.05）；試驗(yàn)2組21日齡體重較對(duì)照組有所增加，但未達(dá)顯著水平（P＞0.05）。

2.2 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬免疫功能的影響 由表3可知，益生菌處理組顯著提高了乳豬血清中免疫球蛋白含量。與對(duì)照組相比，試驗(yàn) 1、2、3組血清中IgA 濃度分別升高99.2%、77.8%、121.7%（P＜ 0.05），IgG濃度分別升高54.0%、69.9%、50.3%（P＜ 0.05）。除此之外，試驗(yàn)1、2、3組腹瀉率較對(duì)照組分別降低58.8%、52.5%、63.9%（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 1、3組腹瀉率顯著低于試驗(yàn)2組。乳豬血清中IgM濃度未受到益生菌處理的顯著影響，兩種益生菌間無顯著交互作用（P＞ 0.05）。

3 討論

3.1 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬生長(zhǎng)性能的影響 仔豬消化道為微生物提供了適宜的生存環(huán)境，新生乳豬腸道微生物主要來自母豬和周圍環(huán)境，益生菌對(duì)動(dòng)物腸道發(fā)育、健康及生長(zhǎng)有積極作用。其中，干酪乳桿菌是乳桿菌屬的一員，能耐受機(jī)體唾液中的酶、胃液中低pH、小腸的膽汁酸等防御機(jī)制，從而在腸道中存活率較大（曹瑞博等，2009）。糞腸球菌作為另外一種益生菌對(duì)環(huán)境也有較強(qiáng)適應(yīng)能力及抵抗力，并且能耐受多種抗生素（鮑延娥等，2013）。干酪乳桿菌和糞腸球菌均被列入我國(guó)飼料添加劑目錄，研究發(fā)現(xiàn)，兩者均能促進(jìn)腸道發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能和養(yǎng)分消化率，對(duì)機(jī)體健康有改善作用（王四新等，2018；劉松等，2017）?？诜蝻暭Z中添加益生菌，使其定植在乳豬或斷奶仔豬腸道中能調(diào)節(jié)腸道微生物群，從而提高機(jī)體免疫能力，減少消化疾病、改善營(yíng)養(yǎng)消化和吸收。本研究中對(duì)新生乳豬分別灌喂干酪乳桿菌、糞腸球菌、兩者混合菌液發(fā)現(xiàn)，益生菌處理組21日齡和28日齡體重顯著高于對(duì)照組，ADG（21 d）和ADG（21～28 d）也顯著增加，生長(zhǎng)性能顯著提高。王四新等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，在32日齡北京黑豬飼糧中添加干酪乳桿菌制劑仔豬ADG顯著提高，料肉比降低，腸道微生物豐度顯著高于對(duì)照組。白秀梅等（2017）報(bào)道，在14日齡的三元雜交乳豬飼糧中添加干酪乳桿菌處理28 d，仔豬ADG和料肉比與對(duì)照組無顯著差異，但添加量為107CFU/g時(shí)，仔豬總抗氧化能力顯著提高。相似的研究報(bào)道，在1日齡肉雞飼糧中添加干酪乳桿菌肉雞生長(zhǎng)性能未發(fā)生顯著改變，但抗氧化能力顯著提高（李陽(yáng)等，2016）。魏清甜等（2014）以斷奶仔豬為研究對(duì)象，結(jié)果顯示，飼糧中添加糞腸球菌顯著改善斷奶仔豬ADG和料肉比。史自濤等（2015）在斷奶仔豬飼糧中添加0.02%、0.04%的糞腸球菌處理31 d，仔豬ADG、平均日采食量均顯著提高，而處理21 d時(shí)無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果與目前干酪乳桿菌在畜禽上的研究結(jié)果存在差異，可能是由于處理日齡及處理周期不一致，本試驗(yàn)對(duì)乳豬處理的時(shí)間較早，對(duì)乳豬腸道微生物群落的建立及生長(zhǎng)性能影響更大。以上結(jié)果表明，干酪乳桿菌、糞腸球菌及兩者聯(lián)合使用均能促進(jìn)乳豬生長(zhǎng)

表2 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬生長(zhǎng)性能的影響

表3 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬免疫功能的影響

3.2 干酪乳桿菌和糞腸球菌對(duì)乳豬免疫功能的影響 免疫功能低下、腹瀉是影響新生和斷奶仔豬生長(zhǎng)的主要因素。血清免疫球蛋白包括IgA、IgG、IgM等，均由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是體液免疫的重要指標(biāo)，同時(shí)也是體液免疫預(yù)防和抵抗感染的主要影響因素。新生動(dòng)物的免疫物質(zhì)主要來自于母乳，隨著年齡增長(zhǎng)和器官發(fā)育，動(dòng)物自身的免疫力變得越來越重要。胃腸道提供的免疫細(xì)胞數(shù)量最多，因此，任何改變腸道狀況的因素都會(huì)影響機(jī)體免疫。干酪乳桿菌和糞腸球菌能刺激機(jī)體增加黏膜表面和血清中IgA、IgG、IgM水平，糞腸球菌還可以代謝產(chǎn)生有機(jī)酸和細(xì)菌素，抑制大腸桿菌生長(zhǎng)，緩解仔豬腹瀉（劉歡歡等，2018；史自濤等，2015）。本研究結(jié)果顯示，乳豬口服干酪乳桿菌或糞腸球菌均能顯著增加血清中IgA、IgG濃度，并且能降低腹瀉率。伊淑帥等（2015）在1日齡肉雞飲水中添加干酪乳桿菌，肉雞14日齡時(shí)胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組，21日齡時(shí)外周血中IgG含量顯著升高。在14日齡的乳豬和1日齡肉雞飼糧中添加干酪乳桿菌顯著增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力，間接說明干酪乳桿可能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能（白秀梅等，2017；李陽(yáng)等，2016）。魏清甜等（2014）在25日齡斷奶仔豬飼糧中添加糞腸球菌，血清中IgG含量顯著升高，IgA含量有升高趨勢(shì)，仔豬腹瀉率顯著下降。以上研究結(jié)果表明，干酪乳桿菌和糞腸球菌均能增強(qiáng)乳豬免疫功能，降低腹瀉率。

4 結(jié)論

綜上所述，新生乳豬口服干酪乳桿菌或糞腸球菌均能增強(qiáng)其免疫性能，降低腹瀉率，從而促進(jìn)生長(zhǎng)，其中單獨(dú)使用干酪乳桿菌，聯(lián)合使用干酪乳桿菌和糞腸球菌效果最好。