仲偉平，張鳳華，高 歌

（開封市動物疫病預防控制中心，河南開封 475000）

具有多重抗生素耐藥性的細菌在人類和動物醫(yī)學中日益受到關注，在動物生產(chǎn)中使用抗生素與在人類醫(yī)學中使用抗生素相比，抗生素耐藥性細菌的出現(xiàn)對人類健康構成了威脅。已有相關文獻表明，動物生產(chǎn)中抗生素的使用與人類感染耐抗生素細菌的增加有關（Bogaard等，2001；Klare等，1999）。不管抗生素在動物生產(chǎn)中的實際作用如何，關于人類耐藥感染的發(fā)生率已經(jīng)納入法規(guī)的考慮，今后將嚴格限制在動物生產(chǎn)中使用抗生素。大腸桿菌病仍然是家禽生產(chǎn)中的一個嚴重問題，造成的死亡損失很大。如果在家禽生產(chǎn)中限制抗生素的使用，大腸桿菌病感染將成為家禽養(yǎng)殖業(yè)面臨的一個嚴重問題。因此，在家禽生產(chǎn)中，為預防和治療大腸桿菌病，需要尋求抗生素替代品或方法。Carlton（1999）發(fā)表了一篇關于噬菌體預防細菌性疾病的綜述，從中我們可以看到，從一種禽類致病性大腸桿菌中分離出來的噬菌體，在與該細菌混合之前可以保護肉雞免受感染。因此，本試驗以不同日齡感染大腸桿菌的肉雞為研究對象，研究噬菌體的氣霧劑對肉雞大腸桿菌感染的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 3個試驗均包含9個處理組，每組3個重復，每個重復10只雞。9個處理組中有3個未感染大腸桿菌組，其中1組不做任何處理，另外2組噴霧PBS或噬菌體氣霧劑，其余6組分別在第7、8和10天感染大腸桿菌（接種5.5×105CFU）并分別進行PBS噴霧或噬菌體氣霧劑。噬菌體噴霧劑購自勃林格殷格翰動保有限公司。接種情況及PBS噴霧參考Huff等（2002）的研究方法，試驗共進行3周。

1.2 試驗記錄 每周對各組雞只按照重復稱重一次（死亡或淘汰雞只也進行稱重），3周試驗結束后，取肝、心、脾、法氏囊稱重。

1.3 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SAS中ANOVA模型進行分析，各組均值用Ducan’s法進行多重比較，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結果與分析

不同氣霧劑對肉雞體重的影響（試驗1）見表1，與對照組相比，第7天感染大腸桿菌接受噬菌體噴霧的肉雞在第1周體重顯著降低（P＜0.05）。感染大腸桿菌的肉雞在2周體重顯著低于未感染的3組（對照組、處理1和處理2組）（P＜0.05）。與對照組相比，第7天感染大腸桿菌接受PBS噴霧、第8天感染大腸桿菌接受噬菌體噴霧的3周齡肉雞體重顯著降低（P＜0.05）。

表1 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗1）

由表2可知，感染大腸桿菌的肉雞死亡率均顯著高于未感染組（P＜0.05）。第7天感染大腸桿菌的肉雞接受PBS噴霧死亡率達到60%，而同樣日齡接受噬菌體噴霧的肉雞死亡率為30%。第8或10天感染大腸桿菌的肉雞接受PBS噴霧或噬菌體噴霧對死亡率無顯著影響（P＞0.05）。

不同氣霧劑對肉雞體重的影響（試驗2）見表3，各處理對第7天肉雞體重無顯著影響（P＞0.05）。感染大腸桿菌的肉雞在第2周體重均顯著低于未感染組（P＜0.05），但接受PBS噴霧與噬菌體噴霧對第2周肉雞體重的影響無顯著差異（P＞0.05）。除了第8天感染大腸桿菌的肉雞，其他感染組均較未感染組顯著減低第3周體重（P ＜ 0.05）。

表2 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗1）

表3 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗2）

由表4可知，第10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧較接受PBS噴霧顯著降低了死亡率（3%和40%）（P＜0.05）。第7或10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧對死亡率的影響不顯著（P ＞ 0.05）。

不同氣霧劑對肉雞體重的影響（試驗3）見表5，第10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧較對照組顯著提高了第1周齡的體重（P＜0.05）。無論肉雞在幾日齡感染大腸桿菌，接受PBS噴霧的肉雞均較未感染組顯著提高了第2周體重（P＜0.05）。各處理組對第3周肉雞體重無顯著影響（P ＞ 0.05）。

表4 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗2）

表5 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗3）

由表6可知，接受噬菌體噴霧但未感染大腸桿菌的肉雞死亡率較對照組及接受PBS噴霧組顯著降低（P＜0.05）。肉雞在第7或8天感染大腸桿菌，同時接受噬菌體噴霧較接受PBS噴霧顯著降低了死亡率（P＜0.05）。各處理對第10天感染大腸桿菌肉雞的死亡率無顯著影響（P ＞ 0.05）。

3 討論

本試驗給肉雞接種大腸桿菌來模擬其受該菌感染，3個試驗均反應了給感染的雞只進行噬菌體噴霧對雞只具有保護作用。試驗1結果顯示，噬菌體噴霧只對感染了大腸桿菌的雞只具有保護作用，試驗2結果發(fā)現(xiàn)，噬菌體噴霧3 d后對感染大腸桿菌的雞只具有保護作用，但其保護期限還尚不明確，試驗3結果發(fā)現(xiàn)，肉雞感染大腸桿菌后接受噬菌體噴霧，其保護作用一直在延續(xù)。

表6 噴霧劑對不同時間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗3）

試驗3中使用的雞只體重較小，雞只活力也沒有試驗1和試驗2的雞只強，因此，該試驗未感染的雞只死亡率都達到20%，而接受PBS噴霧的雞只死亡率達到27%，而接受噬菌體噴霧的雞只死亡率只有3%，顯著小于對照組和未感染接受PBS噴霧組。我們懷疑試驗3中的雞只已經(jīng)感染了大腸桿菌，而噬菌體噴霧可能為這種感染提供保護作用，改善其生存環(huán)境。這一假設得到證實，解剖對照組死亡的雞只發(fā)現(xiàn)，球囊炎是期死亡的主要原因。

本試驗結果記錄噬菌體在預防或治療肉雞大腸桿菌感染的作用，為動物和人類細菌性疾病方面的研究提供了理論依據(jù)。Barrow等（1998）證實了噬菌體在大腸桿菌介導的敗血癥和腦膜炎的保護作用，Soothill（1992）的結果顯示，噬菌體可以保護小鼠免受單胞菌的感染。此外，Alisky等（1998）研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體對疾病有治療作用。Huff等（2002）研究表明，在沒有明確口服噬菌體對大腸桿菌感染的保護作用前噴霧法是最有效的。

4 結論

氣噴噬菌體對保護肉雞呼吸道感染大腸桿菌具有重要作用，使用孵化場和家禽舍內(nèi)的現(xiàn)有設備，在氣溶膠噴霧劑中使用噬菌體可適用于家禽養(yǎng)殖業(yè)，并可替代抗生素控制家禽細菌性疾病。