經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)是目前冠心病病人冠狀動(dòng)脈血運(yùn)重建的重要手段，然而PCI術(shù)后再狹窄嚴(yán)重限制其遠(yuǎn)期血運(yùn)重建效果。血管緊張素Ⅱ-1型受體自身抗體(angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibodies，AT1-AA)存在于冠心病病人體內(nèi)，通過(guò)與血管緊張素Ⅱ-1型受體作用發(fā)揮其病理生理效應(yīng)[1]。本研究觀察AT1-AA在冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)后再狹窄病人中的分布特征、AT1-AA水平與再狹窄嚴(yán)重程度及內(nèi)皮損傷的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月—2015年12月就診于山西省心血管病醫(yī)院心內(nèi)科的冠心病病人及健康體檢者。冠心病病人入選標(biāo)準(zhǔn)：既往行冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)；入院后復(fù)查冠狀動(dòng)脈造影；支架內(nèi)再狹窄包括支架內(nèi)及支架近端、遠(yuǎn)端邊緣5 mm范圍內(nèi)再狹窄，狹窄程度≥50%。將所有研究對(duì)象分為3組：支架內(nèi)再狹窄組55例，年齡(68±11)歲；未再狹窄組120例，年齡(65±12)歲；健康對(duì)照組100名，年齡(65±8)歲，男52名，女48名。排除標(biāo)準(zhǔn)：急性心肌梗死；腫瘤；感染；近3個(gè)月內(nèi)行冠狀動(dòng)脈搭橋或其他血管嚴(yán)重?fù)p傷；其他臟器嚴(yán)重病變；近期外傷及外科手術(shù)史；血液系統(tǒng)疾??；自身免疫性疾病及服用免疫抑制藥物。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2 AT1-AA檢測(cè) ①應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清抗AT1-AR-ECⅡ抗體；②包被抗原：將合成的AT1-AR-ECⅡ包被空白ELISA板；③封閉ELISA板：使用含有5%小牛血清的磷酸鹽緩沖液封閉ELISA板；④加稀釋血清：每孔加陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照及待測(cè)血清，均設(shè)定復(fù)孔；⑤加標(biāo)記有生物素的二抗：將生物素化山羊抗人IgGs加于ELISA板；⑥加標(biāo)記有辣根酶的鏈霉卵白素，以1∶500濃度稀釋后加于ELISA板；⑦加底物：將底物ABTS溶于底物緩沖液(濃度2 mmol/L)，臨加樣前滴入2.5 mmol/L H2O2，每孔加50 μL于ELISA板，置37 ℃下30 min；⑧測(cè)光密度值(OD)：反應(yīng)終止后在酶標(biāo)儀波長(zhǎng)405 nm測(cè)定各孔光密度值。

1.3 血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法，試劑盒由武漢博士德公司提供，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 3組一般資料比較(見(jiàn)表1～表3)

表1 兩組性別、年齡、支架情況比較

注：兩組各項(xiàng)比較，P>0.05

表2 3組冠心病危險(xiǎn)因素比較

注：3組各項(xiàng)比較，P>0.05

表3 兩組用藥情況比較 例(%)

注：ACEI為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑；ARB為血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑。兩組各項(xiàng)比較，P>0.05

2.2 3組AT1-AA滴度陽(yáng)性率比較(見(jiàn)表4)

表43組AT1-AA滴度陽(yáng)性率比較例(%)

與支架內(nèi)再狹窄組比較，1)P<0.05

2.3 不同AT1-AA滴度再狹窄組及健康對(duì)照組ET-1、vWF水平比較 支架內(nèi)再狹窄組根據(jù)AT1-AA檢測(cè)結(jié)果分為AT1-AA陽(yáng)性再狹窄組與AT1-AA陰性再狹窄組。詳見(jiàn)表5。

表5 不同AT1-AA滴度再狹窄組及對(duì)照組ET-1和vWF水平比較(±s)

與AT1-AA陰性再狹窄組比較，1)P<0.05；與對(duì)照組比較，2)P<0.05

3 討 論

冠心病是由于冠狀動(dòng)脈狹窄、供血不足導(dǎo)致心肌損傷、心功能下降，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致病人死亡。PCI是當(dāng)前冠狀動(dòng)脈血管重建的重要方法。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2016年中國(guó)冠心病介入治療總例數(shù)為666 495例[2]，但PCI術(shù)后再狹窄嚴(yán)重限制其遠(yuǎn)期血運(yùn)重建效果。國(guó)內(nèi)臨床研究表明，第1代和第2代藥物洗脫支架置入后支架內(nèi)再狹窄率分別為45.5%和10.8%，總發(fā)生率為27.4%，且隨著隨訪時(shí)間延長(zhǎng)，支架內(nèi)再狹窄發(fā)生率逐漸增高[3]。目前行PCI治療病人數(shù)量劇增，術(shù)后再狹窄病人數(shù)量同樣劇增，臨床上雖然有多種防治PCI術(shù)后再狹窄方案，但效果不滿意，這可能與再狹窄發(fā)生發(fā)展過(guò)程中其他未知因素參與有關(guān)。本研究結(jié)果可見(jiàn)，PCI術(shù)后再狹窄病人血清AT1-AA分布呈高陽(yáng)性率，這也為冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)后再狹窄研究提供了新的研究方向。

相關(guān)研究證實(shí)，有些高血壓病人血液存在一種作用類似血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)循環(huán)因子，激活血管緊張素Ⅱ-1型受體(angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R)[4-6]。Wallukat等[7]證實(shí)，類AngⅡ因子為抗AT1R自身抗體(AT1-AA)；大量學(xué)者對(duì)AT1-AA產(chǎn)生和作用機(jī)制進(jìn)行廣泛研究，結(jié)果表明這種自身抗體通過(guò)專一識(shí)別AT1R細(xì)胞外第2環(huán)功能表位肽段(the second extracellular loop of the angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R-ECⅡ)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖[8]、還原型輔酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活化、ROS生成[9]和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度增加[10]。已有研究表明，以人工合成AT1R-ECⅡ?qū)Υ笫筮M(jìn)行免疫獲得的抗AT1R-ECⅡ抗體通過(guò)作用于AT1R引起類AngⅡ樣作用，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌細(xì)胞增生等[11]。

PCI術(shù)后再狹窄本質(zhì)是血管內(nèi)膜損傷后局部組織的過(guò)度愈合反應(yīng)，內(nèi)皮損傷是引起再狹窄的始動(dòng)因素及主要環(huán)節(jié)[12]。血管內(nèi)皮具有調(diào)節(jié)血管收縮和舒張狀態(tài)、抑制血小板聚集、抑制炎性細(xì)胞黏附、維持凝血及纖溶系統(tǒng)平衡、調(diào)控血管平滑肌生長(zhǎng)等生理功能，是人體最大的內(nèi)分泌、旁分泌器官及許多活性物質(zhì)的靶器官。ET-1是作用最強(qiáng)、最持久的縮血管活性多肽，具有縮血管、促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖等病理生理作用[13]。血管內(nèi)皮損傷或受刺激時(shí)內(nèi)皮釋放ET-1增加，導(dǎo)致血漿ET-1水平升高，在一定程度上反映內(nèi)皮損傷。vWF是人體內(nèi)止血與血栓形成過(guò)程中的糖蛋白之一，主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成，血漿vWF水平是反映內(nèi)皮功能損傷的一個(gè)敏感指標(biāo)[14-15]，存在大量刺激物時(shí)，包括凝血酶、組胺、腎上腺素和缺氧時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞被激活或損傷，vWF從內(nèi)皮細(xì)胞分泌到血漿中，使血漿vWF水平增高。

支架內(nèi)再狹窄病人血清ET-1水平、血漿vWF反映內(nèi)皮損傷情況，本研究檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AT1-AA陽(yáng)性再狹窄組ET-1、vWF水平明顯升高，提示AT1-AA可能通過(guò)介導(dǎo)內(nèi)皮損傷參與再狹窄發(fā)生發(fā)展，為臨床AT1-AA陽(yáng)性PCI術(shù)后再狹窄病人治療提供了新思路，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。