張中潤(rùn) 高燕 黃偉堅(jiān) 黃海杰

摘? 要? 室內(nèi)測(cè)定了蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，Bt）對(duì)腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾（Acrocercops syngramma）和腰果云翅斑螟（Nephopteryx sp.）幼蟲的作用效果。研究表明，在500或1000倍濃度下，Bt對(duì)低齡（1～3齡）腰果細(xì)蛾幼蟲的致死作用較強(qiáng)，致死率為70%～100%，但對(duì)高齡（4齡和5齡）腰果細(xì)蛾幼蟲致死作用較低（20.0%～52.5%）。Bt對(duì)腰果云翅斑螟3齡幼蟲的致死作用相對(duì)較慢，在500倍濃度下作用120 h后致死率為75%。2000倍Bt與200 IJs/皿小卷蛾斯氏線蟲Steinernema carpocapsae All對(duì)腰果云翅斑螟聯(lián)合作用48 h后表現(xiàn)為增效作用，致死率達(dá)90%。

關(guān)鍵詞? 蘇云金芽胞桿菌;小卷蛾斯氏線蟲;腰果云翅斑螟;腰果細(xì)蛾;致死率

中圖分類號(hào)? S476; S436.67? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

腰果（Anacardium occidentale Linnaeus）是海南省特色熱帶經(jīng)濟(jì)作物，主要分布在海南省樂(lè)東縣、昌江縣、東方市和陵水縣[1]。腰果細(xì)蛾

Acrocercops syngramma Meyrick （Lepidoptera： Gracillariidae）和腰果云翅斑螟Nephopteryx sp. （Lepidoptera： Pyralidae）是腰果重要的鱗翅目害蟲[2]。腰果細(xì)蛾主要取食腰果嫩葉，為害嚴(yán)重時(shí)腰果嫩葉被害率可達(dá)90%以上，對(duì)腰果葉片造成了永久性傷害， 嚴(yán)重影響腰果植株的光合作用[3-5];而腰果云翅斑螟幼蟲可蛀食正在發(fā)育或已成熟的腰果果梨，也可蛀害幼嫩堅(jiān)果，為害高峰期時(shí)可造成60%腰果被害，一些腰果園受害后大幅減產(chǎn)[6-8]。

蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis Berliner，Bt）是一種存在于土壤中的革蘭氏陽(yáng)性桿狀細(xì)菌，對(duì)許多農(nóng)業(yè)、林業(yè)、衛(wèi)生害蟲特別是鱗翅目幼蟲具有顯著的毒殺作用，且對(duì)非靶標(biāo)生物無(wú)害[9-11]。Bt是目前研究最多、應(yīng)用最廣的生防微生物之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，Bt制劑約占全球微生物殺蟲劑總量的95%以上，同時(shí)約占全球整個(gè)殺蟲劑市場(chǎng)的2%左右[12]。目前，已有報(bào)道Bt可應(yīng)用于防治多種鱗翅目害蟲如分月扇舟蛾（Clostera anastomosis L.）[13]、小菜蛾[Plutella xylostella （L.）][14]、亞洲玉米螟[Ostrinia furnacalis （Guenée）][15]、稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis Guenée）[16]和甜菜夜蛾[Spodoptera exigua （Hübner）][17]等。

目前，腰果重要鱗翅目害蟲腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟主要以化學(xué)防治為主[4， 18-19]，也有研究發(fā)現(xiàn)抗蟲性較強(qiáng)的腰果品系[4]，但還未能大面積推廣應(yīng)用。因此，測(cè)試生物防治制劑Bt對(duì)腰果重要害蟲的控制效果，有助于豐富和完善腰果重要害蟲生物防控方法。但考慮到Bt制劑在實(shí)際應(yīng)用中還存在防治效果不穩(wěn)定、殺蟲速度慢、殺蟲譜窄等缺點(diǎn)[20-21]，本文除了在室內(nèi)測(cè)定Bt對(duì)腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟的作用效果，還初步研究了Bt與昆蟲病原線蟲對(duì)腰果云翅斑螟的聯(lián)合作用效果，為有效防治腰果重要害蟲提供技術(shù)支撐。

1? 材料與方法

1.1? 材料

昆蟲：腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟幼蟲從腰果園采集后，置于（26±1）℃下飼養(yǎng)觀察24 h，未發(fā)現(xiàn)異常的種群用于試驗(yàn)。參照Athalye等[22]和羅永明等[7]的方法分別判定腰果細(xì)蛾幼蟲和腰果云翅斑螟幼蟲齡期。

藥劑：Bt，有效成分含量32000 IU/mg，湖北康欣農(nóng)用藥業(yè)有限公司。

昆蟲病原線蟲：小卷蛾斯氏線蟲Steinernema carpocapsae （Weiser）的All品系。感染期幼蟲（IJs，infective juveniles）由廣東省昆蟲研究所以人工固體培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得后引進(jìn)[23]。引進(jìn)的昆蟲病原線蟲以黃粉蟲Tenebrio molitor L.幼蟲進(jìn)行繁殖獲取感染期幼蟲，然后以淺水層方法貯存于（10±1）℃條件下用于試驗(yàn)，貯存期不超過(guò)15 d[24]。

1.2? 方法

1.2.1? 不同濃度Bt對(duì)腰果細(xì)蛾幼蟲侵染力? 試驗(yàn)設(shè)4個(gè)不同Bt藥液濃度處理，分別為500、1000、2000和4000倍液，同時(shí)設(shè)清水對(duì)照。從腰果園中采集帶有腰果細(xì)蛾的腰果葉片，以不同試驗(yàn)濃度的Bt藥液或清水進(jìn)行噴霧處理。然后將處理后的腰果葉片置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，再置于（26±1）℃黑暗條件下。由于不同腰果葉片上的腰果細(xì)蛾幼蟲數(shù)量和齡期存在差異，試驗(yàn)時(shí)藥液或清水處理的不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲均多于試驗(yàn)所需。處理24 h后，隨機(jī)觀察各個(gè)處理和對(duì)照不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲的存活情況，每個(gè)齡期隨機(jī)觀察幼蟲數(shù)量為40頭。以10頭幼蟲為一個(gè)處理，重復(fù)4次，清水處理為對(duì)照。

1.2.2? Bt對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲作用效果? 試驗(yàn)設(shè)4個(gè)不同Bt藥液濃度處理：500、1000、2000和4000倍液，同時(shí)設(shè)清水對(duì)照。從腰果園中采集新鮮腰果果梨并切塊成片（3 cm2 cm0.2 cm），放入不同試驗(yàn)濃度的Bt藥液或清水中浸泡5 s，然后取出在陰涼黑暗處晾干。4 h后，將晾干的果梨置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，同時(shí)挑入10條3齡腰果云翅斑螟幼蟲，再將培養(yǎng)皿置于（26±1）℃黑暗條件下。重復(fù)4次，24 h后觀察記錄各個(gè)處理和對(duì)照腰果云翅斑螟幼蟲死亡數(shù)量。

1.2.3? Bt與昆蟲病原線蟲All品系對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的聯(lián)合作用? 從腰果園中采集新鮮腰果果梨并切塊成片（3 cm2 cm0.2 cm），放入試驗(yàn)所需濃度的Bt藥液或清水中浸泡5 s，然后取出在陰涼黑暗處晾干。4 h后，將晾干的果梨置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，同時(shí)挑入10條3齡腰果云翅斑螟幼蟲，再將培養(yǎng)皿置于（26±1）℃黑暗條件下。設(shè)Bt 2000倍藥液?jiǎn)为?dú)處理、線蟲200 IJs/皿單獨(dú)處理、Bt 2000倍藥液與線蟲200 IJs/皿聯(lián)合作用處理和清水對(duì)照。重復(fù)4次，24 h和48 h后觀察記錄各個(gè)處理和對(duì)照腰果云翅斑螟幼蟲死亡數(shù)量，同時(shí)觀察腰果云翅斑螟幼蟲行為反應(yīng)。

1.3? 數(shù)據(jù)分析

百分?jǐn)?shù)值均經(jīng)反正弦變換后，以SPSS軟件進(jìn)行方差分析，多重比較采用LSD法。

由2檢驗(yàn)判斷線蟲與藥劑聯(lián)合作用效果[25-28]。各個(gè)處理參試?yán)ハx的死亡率由死亡蟲數(shù)除以處理總蟲數(shù)，并且轉(zhuǎn)換為校正死亡率[15]。線蟲與藥劑混用對(duì)參試?yán)ハx的期望致死數(shù)ME由期望致死率M=MN+MI（1MN），乘以參試?yán)ハx總數(shù)計(jì)算而得，其中MN和MI分別為線蟲和藥劑單獨(dú)處理參試?yán)ハx的校正死亡率。2=（MNIME）2/ME，其中MNI為線蟲與藥劑混用對(duì)參試?yán)ハx的實(shí)際校正死亡數(shù)，ME為線蟲與藥劑混用對(duì)參試?yán)ハx的期望致死數(shù)。計(jì)算出的2值與2值表進(jìn)行比較。當(dāng)2<3.84（1df和p=0.05）時(shí)，顯示2種殺蟲因子混用表現(xiàn)為相加作用;當(dāng)2≥3.84（1df和p=0.05）及MNIME時(shí)，顯示2種殺蟲因子混用表現(xiàn)為增效作用。

2? 結(jié)果與分析

2.1? Bt對(duì)腰果細(xì)蛾幼蟲的作用效果

結(jié)果表明，不同濃度蘇云金芽胞桿菌對(duì)腰果細(xì)蛾幼蟲的致死率差異顯著，5個(gè)不同齡期的腰果細(xì)蛾幼蟲死亡率均隨著B(niǎo)t測(cè)試濃度的提高而上升（表1）。

不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲對(duì)同一濃度的蘇云金芽胞桿菌敏感性也不同。從測(cè)試的4個(gè)濃度看，1齡幼蟲對(duì)Bt的敏感性最高;其次為2齡和3齡幼蟲，它們二者的敏感性在4個(gè)測(cè)試濃度中均無(wú)顯著差異;4齡和5齡幼蟲對(duì)Bt的敏感性較低，在4個(gè)測(cè)試濃度中均顯著低于1齡幼蟲，而它們二者的敏感性在4個(gè)測(cè)試濃度中除4000倍外均無(wú)顯著差異。

2.2? Bt對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的作用效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度蘇云金芽胞桿菌對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的致死率有差異，一般測(cè)試濃度越高，幼蟲死亡率也越高（表2）。在不同測(cè)試濃度下，腰果云翅斑螟幼蟲的死亡率普遍隨著測(cè)試時(shí)間延長(zhǎng)而提高。測(cè)試24 h和48 h時(shí)，4個(gè)測(cè)試濃度的幼蟲死亡率均無(wú)顯著差異。測(cè)試72、96、120 h時(shí)，500倍、1000倍和2000倍的測(cè)試濃度幼蟲死亡率均顯著高于4000倍，但500倍測(cè)試濃度的幼蟲死亡率在測(cè)試72、96、120 h時(shí)與1000倍和2000倍差異不顯著。

2.3? Bt與小卷蛾斯氏線蟲All品系的聯(lián)合作用效果

蘇云金芽胞桿菌單獨(dú)作用于腰果云翅斑螟幼蟲24 h后觀察，未死亡的腰果云翅斑螟幼蟲受驚擾后表現(xiàn)出反應(yīng)遲鈍、活動(dòng)減少的現(xiàn)象;48 h后，未死亡幼蟲受驚擾后表現(xiàn)出活動(dòng)急劇減少甚至不活動(dòng)的現(xiàn)象。而對(duì)照幼蟲在試驗(yàn)48 h后反應(yīng)依舊

靈活，受到驚擾即可迅速移動(dòng)。

試驗(yàn)結(jié)果表明，蘇云金芽胞桿菌與小卷蛾斯氏線蟲All品系共同作用24 h后，對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)為相加作用;48 h后，二者對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)為顯著的增效作用（表3），致死率達(dá)90%。

3? 討論

本文初步研究表明，蘇云金芽胞桿菌對(duì)腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾特別是低齡幼蟲（1～3齡）有良好的作用效果，在今后的田間防治中可以作為腰果細(xì)蛾的防控手段之一。但本研究也發(fā)現(xiàn)Bt對(duì)腰果細(xì)蛾高齡（4齡和5齡）幼蟲毒力作用較弱，在田間應(yīng)用時(shí)應(yīng)抓住低齡幼蟲發(fā)生初期進(jìn)行應(yīng)用。在海南省腰果種植區(qū)，腰果細(xì)蛾的初發(fā)期為8—9月腰果嫩梢期，大概在11—12月進(jìn)入高發(fā)期[2]。因此，在田間應(yīng)用Bt防治腰果細(xì)蛾時(shí)，較佳的施用時(shí)間為8—9月害蟲為害初期。

Bt對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的毒力作用相對(duì)較弱，作用效果也很慢，在最高的試驗(yàn)濃度500倍作用120 h，致死率僅為75%。因此，與其他殺蟲因子如昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用有可能提高Bt單劑的作用效果。Oestergaard等[29]發(fā)現(xiàn)，Bt與小卷蛾斯氏線蟲聯(lián)合作用對(duì)歐洲大蚊Tipula paludosa Meigen低齡幼蟲可以取得增效作用。Salem等[30]也發(fā)現(xiàn)Bt與小卷蛾斯氏線蟲對(duì)斜紋夜蛾Spodoptera littoralis （Boisd） 2齡和5齡幼蟲可以取得增效作用。同時(shí)，在前期研究中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)小卷蛾斯氏線蟲All品系對(duì)腰果云翅斑螟低齡幼蟲（1～3齡）有一定的控制潛力[31]。

在本研究中，當(dāng)蘇云金芽胞桿菌與昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用時(shí)，蘇云金芽胞桿菌可能使腰果云翅斑螟幼蟲活動(dòng)減少，有利于昆蟲病原線蟲侵染，但由于昆蟲病原線蟲作用效果與Bt一樣較為緩慢，聯(lián)合作用24 h后死亡的腰果云翅斑螟幼蟲還較少，Bt與昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用只表現(xiàn)為相加作用。試驗(yàn)48 h后，在蘇云金芽胞桿菌的作用下，幼蟲的活動(dòng)進(jìn)一步減少，更加有利于昆蟲病原線蟲侵染，因此Bt和昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)出良好的增效作用。因此，在今后的田間試驗(yàn)中，可進(jìn)一步研究Bt和昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用在田間對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的作用效果，期望可以降低昆蟲病原線蟲的使用劑量，同時(shí)提高對(duì)腰果云翅斑螟幼蟲的殺蟲速度。

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