靳曉拓 周彥妤 夏楊榮暢 陳麗君 李濤 趙洪偉

摘? 要? 為了探究多效唑?qū)γ⒐麍@土壤微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)的影響，本研究以海南樂(lè)東某芒果園為研究對(duì)象，設(shè)置施用和不施用多效唑的土壤分別為處理組和對(duì)照組，通過(guò)Illumina Miseq測(cè)序平臺(tái)對(duì)芒果園土壤進(jìn)行16S rRNA高通量測(cè)序分析。2組樣品通過(guò)高通量測(cè)序共得到3586個(gè)OTUs（operational taxonomic units），可注釋到38個(gè)門(mén)、89個(gè)綱、195個(gè)目、378個(gè)科、673個(gè)屬、1353個(gè)種。Alpha多樣性分析表明，施用多效唑后，土壤細(xì)菌豐富度指數(shù)顯著高于同時(shí)期未施用多效唑的土壤;但施藥后土壤的細(xì)菌多樣性顯著降低。主成分分析表明，施用多效唑?qū)ν寥兰?xì)菌的群落結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。與對(duì)照組相比，施用多效唑的土壤中變形菌門(mén)和浮霉菌門(mén)等含量顯著增高，而放線菌門(mén)和厚壁菌門(mén)等含量顯著降低。PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析結(jié)果表明，芒果園土壤細(xì)菌主要涉及細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡、碳水化合物代謝、次生產(chǎn)物代謝的生物合成、氨基酸代謝等43個(gè)子功能，表現(xiàn)出功能上的豐富性。多效唑處理后，會(huì)降低土壤細(xì)菌的整體代謝能力。由此可見(jiàn)，施用多效唑會(huì)降低土壤細(xì)菌的多樣性，改變土壤細(xì)菌的相對(duì)豐度，且對(duì)土壤細(xì)菌的功能會(huì)有一定的影響。

關(guān)鍵詞? 多效唑;芒果園;土壤;細(xì)菌多樣性;PICRUSt分析中圖分類號(hào)? S154.3;X592? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

Abstract? The Illumina Miseq 16S rRNA high-throughput sequencing technology was used to study the bacterial community structure and diversity of two group soil samples with and without paclobutrazol treatment， respectively， from a mango orchard in Ledong， Hainan. A total of 3586 operational taxonomic units （OTUs） in two groups were obtained， which were classified as 38 phylums， 89 classes， 195 orders， 378 families， 673 genera and 1353 species. The results of the analysis of Alpha diversity showed that soil bacterial richness index was significantly higher in the paclobutrazo-treated soils， however compared with the soils without paclobutrazol treatment， the bacterial diversity was significantly decreased. The principal component analysis indicated that the community structure of soil bacteria was affected by paclobutrazol. The quantities of Proteobacteria and Planctomycetes were significantly increased in the paclobutrazol-treated soils， however， those of Actinobacteria and Firmicutes were significantly decreased. The PICRUSt analysis showed that the functional gene families were mainly related to 43 sub-functions including the cell growth and death， carbohydrate metabolism， biosynthesis of secondary metabolites， amino acid metabolism， and so on. The total metabolic capacity of soil bacteria could be reduced after treated with paclobutrazol. Therefore， the application of paclobutrazol can reduce the diversity of soil bacteria， and it also has some impacts on the relative abundance and functions of soil bacteria.

Keywords? paclobutrazol; mango orchard; soil; bacterial diversity; PICRUSt analysis

DOI? 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.04.027

我國(guó)是芒果原產(chǎn)地之一，近些年芒果的種植面積不斷擴(kuò)大，產(chǎn)量逐年增加，已成為一些地方的農(nóng)業(yè)支柱產(chǎn)業(yè)[1]。隨著芒果產(chǎn)業(yè)的大規(guī)模發(fā)展，其生產(chǎn)過(guò)程中農(nóng)藥的不合理使用問(wèn)題日益嚴(yán)峻。多效唑是一種三唑類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在芒果園土壤中有較大的施用量，主要用在芒果樹(shù)的控梢、提高芒果產(chǎn)量[2-4]等方面。但多效唑在土壤中的殘留期較長(zhǎng)，其半衰期在半年到一年[4]，土壤中殘留的多效唑可能會(huì)影響土壤生態(tài)系統(tǒng)的平衡[5]。

土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分[6]，土壤微生物可以敏感地反映土壤環(huán)境質(zhì)量的變化，同時(shí)是土壤中生物活性的具體體現(xiàn)[7]。微生物與土壤健康狀況的關(guān)系密切，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán)具有重要作用[8]。土壤中微生物以細(xì)菌數(shù)量最多，占土壤微生物總量的70%以上，細(xì)菌群落中含有大量具有特殊功能的生理類群，如固氮菌、氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌等[9]。細(xì)菌種類或豐度的變化，會(huì)對(duì)這些特定生理類群的數(shù)量產(chǎn)生直接影響，從而影響土壤肥力，如放線菌對(duì)植物病蟲(chóng)害防治有著重要的作用[10]。并且農(nóng)藥的施用會(huì)對(duì)土壤微生物產(chǎn)生一定的影響，從而影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。

目前關(guān)于土壤微生物多樣性的研究多采用傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法[11-14]，但平板培養(yǎng)法具有較大的局限性，通過(guò)傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法得到的微生物只占環(huán)境微生物總數(shù)極少的一部分[15]。隨著分子生物學(xué)和生物信息學(xué)的發(fā)展，PCR-SSCP[16]、PLFA[17]、DGGE和高通量測(cè)序技術(shù)[18-20]等一些新的方法在土壤微生物的研究中得到應(yīng)用。其中，高通量測(cè)序技術(shù)可以避免微生物分離培養(yǎng)的過(guò)程，能夠準(zhǔn)確、快速、高通量地解讀土壤微生物生態(tài)系統(tǒng)的變化情況，與其他方法相比，具有通量大、準(zhǔn)確率高、成本低等優(yōu)點(diǎn)[21]，更加適合土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性的分析。目前利用高通量測(cè)序的方法研究土壤微生物的報(bào)道有很多，但是，尚未有通過(guò)高通量測(cè)序的方法研究多效唑?qū)ν寥牢⑸锒鄻有杂绊懙膱?bào)道。同時(shí)，傳統(tǒng)的方法無(wú)法對(duì)微生物的功能進(jìn)行研究，16S rRNA高通量測(cè)序可以通過(guò)PICRUSt（phylo genetic investigation of communities by reconstruction of unobserved states）軟件預(yù)測(cè)基因序列對(duì)應(yīng)的細(xì)菌菌群代謝功能譜。PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析相較于宏基因組研究更加方便且成本也更低，同時(shí)預(yù)測(cè)效果具有較高的可靠性[22]。目前該方法已在珊瑚礁[23]、海水[24]、庫(kù)區(qū)[25]、土壤[26-28]等不同生境中得到良好的應(yīng)用，而關(guān)于多效唑?qū)γ⒐麍@土壤微生物的研究還未見(jiàn)報(bào)道。

海南是我國(guó)主要的芒果種植區(qū)，據(jù)《2017年海南省統(tǒng)計(jì)年鑒》，樂(lè)東黎族自治縣的芒果種植面積達(dá)到10 341 hm2，位居海南省第二。本研究以海南省樂(lè)東黎族自治縣黃流鎮(zhèn)某芒果園為研究對(duì)象，通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)研究了施用多效唑前后芒果園土壤微生物多樣性及其群落結(jié)構(gòu)的變化情況，結(jié)合PICRUSt分析預(yù)測(cè)多效唑?qū)γ⒐麍@土壤微生物功能的影響，為合理施用多效唑和評(píng)價(jià)多效唑?qū)r(nóng)田土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響提供科學(xué)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 土壤樣品采集與處理

土壤樣品采集參照《土壤農(nóng)化分析》[29]，在處理前后試驗(yàn)組和對(duì)照組各設(shè)置3個(gè)采樣區(qū)域，去除表層土壤，每個(gè)采樣區(qū)采集6～8個(gè)點(diǎn)的土壤混勻，放置冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)存于?80 ℃冰箱，用于DNA提取及細(xì)菌16S rRNA測(cè)序分析。

1.2? 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)基地位于海南省樂(lè)東黎族自治縣黃流鎮(zhèn)某芒果園。該地區(qū)屬于熱帶季風(fēng)氣候，土壤為砂質(zhì)壤土，光熱充足，年平均氣溫為25 ℃，年降雨量為1400～1800 mm。在基地內(nèi)選取未使用過(guò)多效唑的幼齡芒果樹(shù)區(qū)域，設(shè)置試驗(yàn)組（T）和對(duì)照組（C），試驗(yàn)組施用多效唑量為1.5 g/m2（以多效唑有效成分計(jì)），分多效唑施用前（T0）和施用后30 d （T30）2個(gè)時(shí)期進(jìn)行樣品采集;對(duì)照組采樣時(shí)期同試驗(yàn)組，分為C0和C30 2個(gè)時(shí)期。試驗(yàn)前土壤基本參數(shù)如表1所示。

1.3? 檢測(cè)方法

土壤DNA采用MOBIO土壤DNA提取試劑盒（PowerSoil? DNA Isolation kit）進(jìn)行提取，細(xì)菌PCR擴(kuò)增采用V4-V5可變區(qū)的細(xì)菌通用引物515F（GTGCCAGCMGCCGCGGTAA）和907R（CCGTCAATTCMTTTRAGTTT）。PCR擴(kuò)增體系及擴(kuò)增條件參照文獻(xiàn)[30]進(jìn)行。土壤DNA樣品經(jīng)過(guò)PCR質(zhì)量驗(yàn)證合格后，送至廣州賽哲生物科技股份有限公司利用Illumina Miseq測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行16S rRNA序列測(cè)定。

1.4? 數(shù)據(jù)處理

采用FLASH v1.2.7軟件進(jìn)行序列拼接，對(duì)拼接得到的序列進(jìn)行過(guò)濾。采用UCHIME v4.2軟件，鑒定并去除嵌合體序列，得到最終有效數(shù)據(jù)。測(cè)序得到的序列經(jīng)拼接過(guò)濾后，提交到美吉云平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 樣品信息統(tǒng)計(jì)

通過(guò)Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)對(duì)芒果園土壤細(xì)菌16SrRNA 的V4-V5區(qū)進(jìn)行序列測(cè)定，12個(gè)樣品測(cè)序共獲得454 320條原始序列，經(jīng)過(guò)濾后共產(chǎn)生445 976條有效序列，每個(gè)樣品至少產(chǎn)生36 557條有效序列，平均產(chǎn)生37 165條有效序列。對(duì)測(cè)序結(jié)果基于97.00%的相似度進(jìn)行聚類，共得到3586個(gè)OTUs。

根據(jù)樣品稀釋曲線可以看出，12個(gè)樣品的曲線均有趨于平坦的趨勢(shì)（圖1），表明樣品測(cè)序量合理，OTUs的覆蓋度高，測(cè)序深度可以滿足試驗(yàn)要求。

采用Venn圖2展示4組樣品所含OTUs，4組樣品共有的核心OTUs個(gè)數(shù)為1841個(gè)。C0共有2468個(gè)OTUs，C30共有3143個(gè)OTUs;T0共有2439個(gè)OTUs，T30共有2877個(gè)OTUs。4組樣品中的細(xì)菌在OTUs水平上存在差異;施用多效唑后，土壤中總物種類別和特有物種類別減少。與對(duì)照組（C30）相比，經(jīng)多效唑處理后（T30），土壤中OTUs個(gè)數(shù)減少。

2.2? Alpha多樣性分析

Alpha多樣性可用來(lái)反映樣本中微生物的豐度和多樣性。采用群落豐富度指數(shù)Sobs、Ace和Chao以及群落多樣性指數(shù)Shannon和Simpson對(duì)施用多效唑后芒果園土壤細(xì)菌多樣性和群落結(jié)構(gòu)的變化情況進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，試驗(yàn)樣品具有豐富的群落組成，施用多效唑后，樣本細(xì)菌群落豐富度和多樣性有顯著的變化。C0和T0的豐富度指數(shù)和多樣性指數(shù)沒(méi)有顯著差異。但T30的群落豐富度指數(shù)Ace顯著高于C30，T30的物種多樣性指數(shù)Shannon和Simpson顯著低于C30。Ace指數(shù)越大，表明土壤中細(xì)菌的數(shù)目越多;多樣性指數(shù)越大，表明土壤中每個(gè)物種的個(gè)數(shù)越平均，物種分布越均勻。施用多效唑后，土壤細(xì)菌總數(shù)目增多，但各物種的數(shù)目差異較大，不同種類的細(xì)菌分布不均勻。

2.3? 物種組成分析

將測(cè)序得到的3586個(gè)OTUs與silva128/16s_ bacteria物種分類數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，可注釋到38個(gè)門(mén)、89個(gè)綱、195個(gè)目、378個(gè)科、673個(gè)屬、1353個(gè)種。在門(mén)水平上對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)組成進(jìn)行分析，結(jié)果表明樣品豐度大于1%的有變形菌門(mén)（Proteobacteria）、放線菌門(mén)（Actinobacteria）、酸桿菌門(mén)（Acidobacteria）、厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、浮霉菌門(mén)（Planctomycetes）、綠彎菌門(mén)（Chloroflexi）、芽單胞菌門(mén)（Gemmatimonadetes）、擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）、硝化螺旋菌門(mén)（Nitrospirae）以及1個(gè)未分類菌門(mén)（unclassified k-norank），這10個(gè)細(xì)菌門(mén)為樣品土壤中的優(yōu)勢(shì)菌群。施用多效唑的土壤T30和對(duì)照組C30在細(xì)菌門(mén)的相對(duì)豐度有了明顯的變化，而C0和T0在細(xì)菌門(mén)水平上的相對(duì)豐度沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明所選試驗(yàn)區(qū)域的對(duì)照組和試驗(yàn)組土壤細(xì)菌無(wú)顯著差異（圖3A）。施用多效唑的土壤T30中，變形菌門(mén)、綠彎菌門(mén)、芽單胞菌門(mén)、擬桿菌門(mén)和硝化螺旋桿菌門(mén)等的相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組土壤C30;放線菌門(mén)和厚壁菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著低于C30（圖3B）。

2.4? Beta多樣性分析

Beta多樣性分析是通過(guò)微生物群落構(gòu)成的比較，考慮物種豐度和均勻度，評(píng)估不同微生物群落間的差異情況。主成分分析（PcoA）用來(lái)反映不同處理樣本群落組成的相似性或差異。在屬水平上對(duì)物種豐度進(jìn)行主成分分析，在第一個(gè)時(shí)期，C0與T0的距離較近，表明試驗(yàn)進(jìn)行前C組和T組樣本組成較為類似;在第二個(gè)時(shí)期，T30與C30的樣點(diǎn)較為分散，在圖中的距離較遠(yuǎn)，表明經(jīng)多效唑處理后土壤的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)有了較大的改變（圖4）。

2.5? PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析

為了探究施用多效唑后土壤細(xì)菌的功能變化情況，本研究采用PICRUSt軟件進(jìn)行菌群預(yù)測(cè)分析?；贙EGG數(shù)據(jù)庫(kù)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes）預(yù)測(cè)的結(jié)果表明：在一級(jí)功能層共獲得6類生物代謝通路功能分析：代謝（metabolism）、遺傳信息處理（genetic information processing）、環(huán)境信息處理（environmental information processing）、細(xì)胞過(guò)程（cellular processes）、有機(jī)系統(tǒng)（organismal systems）和人類疾?。╤uman diseases）。其中代謝、遺傳信息處理和環(huán)境信息處理為其主要組成，占比分別為51.73%～52.36%、15.28%～15.39%和13.11%～13.71%。

同時(shí)對(duì)預(yù)測(cè)基因二級(jí)功能層進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其由細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡（cell growth and death）、折疊、分類和降解（folding，sorting and degradation）、碳水化合物代謝（carbohydrate metabolism）、次生產(chǎn)物代謝的生物合成（biosynthesis of other secondary metabolites）、氨基酸代謝（amino acid metabolism）等43個(gè)子功能組成。對(duì)二級(jí)功能層預(yù)測(cè)基因拷貝數(shù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)T30 和C30共有25個(gè)二級(jí)功能層預(yù)測(cè)基因的拷貝數(shù)存在顯著差異（圖5）。施用多效唑的處理組T30中有細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡（cell growth and death）、折疊、分類和降解（folding，sorting and degradation）、內(nèi)分泌代謝疾病（endocrine and metabolic diseases）、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)（cell motility）、膜運(yùn)輸（membrane transport）、能量代謝（energy metabolism）、循環(huán)系統(tǒng)（circulatory system）、輔助因子和維生素的代謝（metabolism of cofactors and vitamins）、全局和概覽地圖（global and overview maps）、免疫系統(tǒng)（immune system）和傳染?。杭?xì)菌（infectious diseases： Bacterial）11個(gè)子功能預(yù)測(cè)基因的拷貝數(shù)大于空白對(duì)照組C30;T30中的碳水化合物代謝（carbohydrate metabolism）、次生產(chǎn)物代謝的生物合成（biosynthesis of other secondary metabolites）、氨基酸代謝（amino acid metabolism）、神經(jīng)系統(tǒng)（nervous system）、多糖生物合成和代謝（glycan biosynthesis and metabolism）、運(yùn)輸和分解代謝（transport and catabolism）、免疫系統(tǒng)疾病（immune diseases）、物質(zhì)依賴（substance dependence）、類脂化合物代謝（lipid metabolism）、傳染?。杭纳╥nfectious diseases： Parasitic）、心血管疾?。╟ardiovascular diseases）、環(huán)境適應(yīng)（environmental adaptation）、排泄系統(tǒng)（excretory system）和內(nèi)分泌系統(tǒng)（endocrine system）14個(gè)子功能預(yù)測(cè)基因的拷貝數(shù)小于C30。

3? 討論

土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，在生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)和能量循環(huán)中起著不可或缺的作用。土壤中大部分的生物化學(xué)轉(zhuǎn)化過(guò)程是微生物活動(dòng)引起的，凡能改變微生物數(shù)量或活性的任何化合物都會(huì)影響土壤的生化過(guò)程，最終影響土壤肥力和植物生長(zhǎng)[31]。農(nóng)藥的施用會(huì)對(duì)土壤微生物產(chǎn)生一定的影響，施用農(nóng)藥后，土壤環(huán)境會(huì)發(fā)生變化，土壤微生物之間的穩(wěn)定性、土壤微生物的生物量及活性會(huì)降低。目前，關(guān)于農(nóng)藥對(duì)土壤微生物影響的研究日益增加，目前的報(bào)道有有機(jī)磷類[32]、有機(jī)氯類[33]和三唑類[11-14， 34-35]等。

現(xiàn)有關(guān)于多效唑?qū)ν寥牢⑸锏挠绊懙难芯繄?bào)道多采用平板培養(yǎng)法進(jìn)行，趙秀芬等[11]、袁志華等[12]、Gon?alves等[13]、Silva等[14]等均采用此方法研究了多效唑?qū)ν寥牢⑸锒鄻有浴⑸锪康挠绊?，由于試?yàn)方法的限制均未對(duì)土壤細(xì)菌群落組成進(jìn)行研究。本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)研究了多效唑?qū)γ⒐麍@土壤細(xì)菌的影響，發(fā)現(xiàn)施藥后的土壤細(xì)菌多樣性顯著降低，這與前人[11， 13-14]的研究結(jié)果一致。Alpha多樣性分析表明施用多效唑后，土壤細(xì)菌的豐富度降低，與Silva等[14]的報(bào)道一致;細(xì)菌群落多樣性降低，這可能與多效唑減少了芒果園中土壤細(xì)菌的種類有關(guān)。本研究的結(jié)果與Kuo等[36]的研究結(jié)果一致，與同時(shí)期未施用多效唑的芒果園土壤相比，施用多效唑的土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)有了較大的改變。通過(guò)物種群落組成分析，發(fā)現(xiàn)多效唑?qū)ν寥乐凶冃尉T(mén)和放線菌門(mén)的細(xì)菌影響最大，施用多效唑后，土壤中變形菌門(mén)的豐度顯著提高，放線菌門(mén)的豐度顯著降低，放線菌對(duì)植物病害具有十分明顯的防治作用，放線菌含量的降低可能會(huì)導(dǎo)致植物病害發(fā)生[10]。本研究結(jié)果表明施用多效唑會(huì)減少土壤細(xì)菌的物種種類，打破土壤微生態(tài)平衡，可能使原本供給某類細(xì)菌的養(yǎng)分被其他細(xì)菌利用，增大了其他細(xì)菌的數(shù)量，雖然提高了土壤中細(xì)菌總體的豐富度，但減少了土壤中的細(xì)菌種類，導(dǎo)致土壤的細(xì)菌多樣性降低。

之前關(guān)于多效唑?qū)γ⒐麍@細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的研究主要關(guān)注土壤微生物量的變化情況，對(duì)其功能的研究開(kāi)展較少。農(nóng)藥殘留會(huì)使土壤中的功能微生物含量發(fā)生改變，具有降解污染物功能的微生物含量增多[37-39]。PICRUSt分析通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，將微生物的變化情況和生物功能聯(lián)系起來(lái)[40]。施用多效唑前后土壤微生物的相對(duì)豐度發(fā)生改變，其功能也發(fā)生相應(yīng)的變化，本研究將高通量測(cè)序結(jié)果進(jìn)行PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)施用多效唑后，在一級(jí)功能層和二級(jí)功能層的預(yù)測(cè)基因拷貝數(shù)整體趨勢(shì)低于對(duì)照組。該結(jié)果初步揭示了施用多效唑后芒果園土壤細(xì)菌功能的差異，但鑒于PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析的局限性，后續(xù)需要結(jié)合宏基因組測(cè)序等技術(shù)進(jìn)一步分析。

4? 結(jié)論

本研究初步探明了施用多效唑后芒果園土壤細(xì)菌多樣性和群落結(jié)構(gòu)的變化情況，施用多效唑會(huì)減少土壤OTUs的數(shù)目，降低土壤細(xì)菌的多樣性;多效唑會(huì)改變芒果園土壤的細(xì)菌相對(duì)豐度，施用多效唑后，變形菌門(mén)的豐度顯著提高，放線菌門(mén)的豐度顯著降低;通過(guò)PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)施用多效唑后，土壤細(xì)菌的功能有一定的改變，土壤的預(yù)測(cè)基因拷貝數(shù)在一級(jí)功能層和二級(jí)功能層上均低于對(duì)照組。本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)研究了多效唑?qū)γ⒐麍@土壤微生物的影響，對(duì)評(píng)價(jià)多效唑?qū)γ⒐麍@土壤微生物生態(tài)系統(tǒng)的影響進(jìn)而指導(dǎo)合理施用多效唑具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

南? 楠， 傅再軍， 徐靖丞. 我國(guó)芒果產(chǎn)業(yè)發(fā)展問(wèn)題探析[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2017， 11（3）： 80-84.

Vaz F L， Netto A M， Antonino A C D， et al. Modeling of the kinetics biodegradation of paclobutrazol in two soils of the semiarid northeast brazil[J]. Quimica Nova， 2012， 35（1）： 77-81.

孫定波. 反季節(jié)芒果控梢催花技術(shù)[J]. 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)， 2008（5）： 53-53.

Kishore K， Singh H S， Kurian R M. Paclobutrazol use in perennial fruit crops and its residual effects： A review[J]. Indian Journal of Agricultural Sciences， 2015， 85（7）： 863-872.

Singh V K， Garg N， Bhirigwanshi S R. Effect of paclobutrazol doses on nutritional and microbiological properties of mango （Mangifera indica） orchard soils[J]. Indian Journal of Agricultural Sciences， 2005， 75： 738-739.

Fierer N. Embracing the unknown： disentangling the complexities of the soil microbiome[J]. Nature Reviews Microbiology， 2017， 15（10）： 579-590.

Doran J W， Fraser D G， Culik M N， et al. Influence of alternative and conventional agricultural management on soil microbial processes and nitrogen availability[J]. American Journal of Alternative Agriculture， 1987， 2（3）： 99-106.

李旭東， 徐莉娜， 薛林貴. 土壤微生物多樣性研究的新進(jìn)展[J]. 廣州化工， 2014（20）： 6-10.

楊成德， 龍瑞軍， 陳秀蓉， 等. 土壤微生物功能群及其研究進(jìn)展[J]. 土壤通報(bào)， 2008， 39（2）： 421-425.

許光輝， 鄭洪元. 土壤微生物分析方法手冊(cè)[M]. 北京： 農(nóng)業(yè)出版社， 1986： 102-110.

趙秀芬， 房增國(guó)， 高祖明. 多效唑?qū)ν寥牢⑸飻?shù)量及部分酶活性的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2005， 36（3）： 234-235.

袁志華， 程? 波， 常玉海， 等. 15%多效唑可濕性粉劑對(duì)土壤微生物多樣性的影響研究[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)， 2008（5）： 1848-1852.

Gon?alves I C R， Araújo A S F， Carvalho E M S， et al. Effect of paclobutrazol on microbial biomass， respiration and cellulose decomposition in soil[J]. European Journal of Soil Biology， 2009， 45（3）： 235-238.

Silva M S， Célia Maria， Vieira F， et al. Paclobutrazol effects on soil microorganisms[J]. Applied Soil Ecology， 2003， 22（1）： 79-86.

方治國(guó)， 郝翠梅， 姚文沖， 等. 空氣微生物群落解析方法：從培養(yǎng)到非培養(yǎng)[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 2016， 36（14）： 4244-4253.

王? 巖， 沈錫權(quán)， 吳祖芳， 等. PCR-SSCP技術(shù)在微生物群落多態(tài)性分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 生物技術(shù)， 2009， 19（3）： 84-87.

林? 生， 莊家強(qiáng)， 陳? 婷， 等. 不同年限茶樹(shù)根際土壤微生物群落PLFA生物標(biāo)記多樣性分析[J]. 生態(tài)學(xué)雜志， 2013， 32（1）： 64-71.

夏圍圍， 賈仲君. 高通量測(cè)序和DGGE分析土壤微生物群落的技術(shù)評(píng)價(jià)[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2014， 54（12）： 1489-1499.

張丁予， 章婷曦， 王國(guó)祥. 第二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J]. 環(huán)境科學(xué)與技術(shù)， 2016（9）： 96-102.

Wu Y， Ke X， Hernández M， et al. Autotrophic growth of bacterial and archaeal ammonia oxidizers in freshwater sediment microcosms incubated at different temperatures[J]. Applied and Environmental Microbiology， 2013， 79（9）： 3076-3084.

Justyna P， Rebecchi A， Pisacane V， et al. Bacterial diversity in typical Italian salami at different ripening stages as revealed by high-throughput sequencing of 16S rRNA amplicons[J]. Food Microbiology， 2015， 46： 342-356.

Langille M G I， Zaneveld J， Caporaso J G， et al. Predictive functional profiling of microbial communities using 16S rRNA marker gene sequences[J]. Nature Biotechnology， 2013， 31（9）： 814-821.

Polónia A R M， Richard C D F， Coelho F J R d C， et al. Compositional analysis of archaeal communities in high and low microbial abundance sponges in the Misool coral reef system， Indonesia[J]. Marine Biology Research， 2018： 1-14.

董志穎， 洪? 慢， 胡晗靜， 等. 過(guò)量氮輸入對(duì)寡營(yíng)養(yǎng)海水細(xì)菌群落代謝潛力的影響[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)， 2018， 38（2）： 457-466.

張? 菲， 田? 偉， 孫? 峰， 等. 丹江口庫(kù)區(qū)表層浮游細(xì)菌群落組成與PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析[J]. 環(huán)境科學(xué)， 2019（3）： 1-14.

厲桂香， 馬克明. 北京東靈山樹(shù)線處土壤細(xì)菌的PICRUSt基因預(yù)測(cè)分析[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 2018， 38（6）： 2180-2186.

孫? 峰， 田? 偉， 張? 菲， 等. 丹江口庫(kù)區(qū)庫(kù)濱帶植被土壤細(xì)菌群落多樣性及PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析[J]. 環(huán)境科學(xué)， 2019（1）： 1-13.

程? 揚(yáng)， 劉子丹， 沈啟斌， 等. 秸稈生物炭施用對(duì)玉米根際和非根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響[J]. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)， 2018， 27（10）： 1870-1877.

鮑士旦. 土壤農(nóng)化分析[M]. 3版. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2000.

Caporaso J G， Lauber C L， Walters W A， et al. Global patterns of 16S rRNA diversity at a depth of millions of sequences per sample[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2011，108（Supplement 1）： 4516-4522.

Waingwright M， 吳文禮. 農(nóng)藥對(duì)土壤微生物活性的影響[J]. 土壤學(xué)進(jìn)展， 1980（4）： 31-35.

張娜娜， 姜? 博， 邢? 奕， 等. 有機(jī)磷農(nóng)藥污染土壤的微生物降解研究進(jìn)展[J]. 土壤， 2018， 50（4）： 645-655.

華? 健， 陳曼佳， 李芳柏， 等. 水稻土中五氯酚的降解轉(zhuǎn)化動(dòng)態(tài)及其對(duì)微生物群落的影[J]. 地球與環(huán)境， 2018， 46（3）： 225-230.

劉倩倩. 三種常用殺菌劑在麥田土壤中的消解動(dòng)態(tài)及對(duì)土壤微生物的毒性評(píng)價(jià)[D]. 泰安： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2016.

伍云麗. 腈菌唑在茶園土壤中的消解動(dòng)力學(xué)及其對(duì)土壤微生物活性影響的研究[D]. 杭州： 浙江大學(xué)， 2014.

Kuo J， Wang Y W， Chen M， et al. 錯(cuò)誤！未指定書(shū)簽。The effect of paclobutrazol on soil bacterial composition across three consecutive flowering stages of mung bean[J]. Folia Microbiologica， 2019， 64（2）： 197-205.

Hua F， Tang F， Wei Z， et al. Persistence of repeated triadimefon application and its impact on soil microbial functional diversity[J]. Journal of Environmental Science and Health Part B， 2012， 47（2）： 104-110.

Jeffries T C， Rayu S， Nielsen U N， et al. Metagenomic functional potential predicts degradation rates of a model organophosphorus xenobiotic in pesticide contaminated soils [J]. Frontiers in Microbiology， 2018， 9： 147.

Zafra G， Taylor T D， Absalón， et al. Comparative metagenomic analysis of PAH degradation in soil by a mixed microbial consortium[J]. Journal of Hazardous Materials， 2016， 318： 702-710.

徐? 帥， 林奕岑， 周夢(mèng)佳， 等. 基于高通量測(cè)定肉雞回腸微生物多樣性及PICRUSt基因預(yù)測(cè)分析[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2016， 28（8）： 2581-2588.