扈琴吉

摘 要：在產蛋高峰期，母雞的卵巢中含有30～100個卵黃色卵泡，直徑在1～8mm之間。一般母雞體內卵泡數(shù)量與卵泡直徑成反比，例如雞體內有約20個直徑為1～2mm和1個直徑為7～8mm的卵泡，直徑>8mm的卵泡數(shù)約為4～7個。本研究通過蘇丹黑B染色法發(fā)現(xiàn)：雞卵泡生長至3～5mm大約需要3d，再生長至5～8mm大約需要2d，生長至8mm到排卵需要6d。由于染料無法進入較小的卵泡，因此本試驗沒有檢測到1～3mm之間的數(shù)據(jù)。研究也發(fā)現(xiàn)雞體內含有5～25個閉鎖卵黃色卵泡，這對于高產雞是正?，F(xiàn)象，但在整個試驗中，只觀察到一個閉鎖的大卵黃色卵泡。因此本試驗以這兩種閉鎖水平來定義不同卵泡的大小。本研究得出，雞的排卵率經兩種互補機制進行調控，一種促進卵泡在起始階段的生長，另一種使小卵黃卵泡閉鎖，抑制卵泡生長。

關鍵詞：母雞；等級卵泡；閉鎖

1 前言

產蛋母雞的卵巢含數(shù)百萬個卵泡（Hutt，1949），其中眼觀可見的卵泡數(shù)高達數(shù)千個（Pearl & Schoppe，1921）。目前研究主要集中于直徑>1mm的卵泡，是因為這些卵泡正處于發(fā)育階段（Marza & Marza，1935），而6mm左右的卵泡容易閉鎖（Fell，1923），>8mm的卵泡通?？梢园l(fā)育至約40mm并排卵。>8mm卵泡的閉鎖對于生殖高峰期的禽類來說是罕見的，除非外界環(huán)境的應激導致母雞停止產卵（Erpino，1969，1973；Kern，1972）。卵泡的閉鎖通常發(fā)生于季節(jié)性繁殖的禽類，在高產季節(jié)到達最高峰。

然而，只有在卵泡生長階段才能評估卵泡閉鎖對活躍卵巢功能的作用。目前，大卵黃卵泡的生長已經被廣泛研究，它們被認為是處于“快速增長階段”且具有等級結構的卵泡（Marza & Marza， 1935；Warren & Conrad，1939；Lacassagne，1957，1960；Smith，1959；Bacon & Skala，1968；Gilbert & Wood-Gush，1971；Gilbert，1972；Oribe，1973）。相比之下，母雞體內100個左右的小卵黃色卵泡幾乎未被研究，是因為它們的生長速度差別較大（Romanoff & Romanoff，1949；Griffin，Perry & Gilbert，1983）。Marza & Marza（1935）認為卵泡生長到3～6mm大約需要60d，但有研究已經表明卵泡經24h就能生長到4～7mm（Warren & Conrad，1939；Oribe，1973）。Opel（1958）和Nalbandov（1959，1961）對于卵巢內促卵泡激素（FSH）的水平觀察顯示，卵泡增長所需的時間介于這兩個數(shù)值之間。注射FSH后幾天內就可以增加小卵泡和大卵黃卵泡的數(shù)量。同樣，我們對小卵黃卵泡的觀察結果表明，達到相應的數(shù)量需要超過24h（Griffin et al.，1983）。

研究小卵黃卵泡的群體特征對于理解大卵黃卵泡等級結構的形成以及家禽蛋產量是至關重要的。因此，我們使用脂溶性染料蘇丹黑B標記卵泡的方法，對產蛋高峰期高產母雞品系進行檢測（Warren & Conrad，1939；Bacon & Cherms，1967，1968；Bacon & Skala，1968；Gilbert，1972；Oribe，1973）。

2 材料與方法

將100只母雞用個體雞籠進行飼養(yǎng)，使其自由采食和飲水。每天照明時間設置為14h（04：30～18：30）。兩個試驗采用相同方法處理。

2.1 隨機選擇60只母雞，每只母雞在09：00～10：00之間飼喂一個明膠膠囊（大小3號，含有100mg蘇丹黑B），飼喂膠囊后放回籠位。在預試驗中，對飼喂后1、3、7和10d的雞進行靜脈注射過量戊巴比妥鈉致死。預試驗結果發(fā)現(xiàn)，本試驗選取的時間節(jié)點具有統(tǒng)計學意義。因此，后續(xù)試驗中每隔1、2、3、4、5和6d致死雞（6只/組），從卵巢取出直徑>8mm的卵泡并計數(shù)。其余部分將卵巢在鹽水中短暫沖洗，并且將所有直徑>1mm的卵泡取出并置于10%福爾馬林溶液中。這種固定方式不會顯著影響卵泡的大?。℅ilbert，Hardie&Perry，1982）。蛋黃變硬后（2～3d固定），檢測禽類產生的卵染料是否存在。本試驗未測量閉鎖卵泡，因為無法確定卵泡收縮的程度。此外，本試驗也檢查了經染料處理后的母雞所產蛋的染色情況。

2.2 隨機選擇24只雞，飼喂含有100mg蘇丹黑B的明膠膠囊。收集所產的雞蛋，放置30d后煮沸，蛋黃一分為二，記錄染料情況。由于存在個別雞只未能攝取到染料，因此處理的數(shù)據(jù)與表格中的數(shù)據(jù)存在差異。

3 結果

3.1 卵泡數(shù)量 試驗1中分別檢查了3種類型的卵泡：直徑1～8mm、大于8mm和閉鎖卵泡。閉鎖卵泡表面具有小的出血點，有的甚至出現(xiàn)變形或皺縮的外觀。在檢測的閉鎖卵泡中我們觀察到卵泡最小直徑為1mm，最大直徑為1～8mm。所有>8mm的卵泡都是可排卵的。

從本試驗研究發(fā)現(xiàn)，在含有活性卵泡（1～8 mm）的35只雞中，有7只雞的卵泡數(shù)達到30～40個，6只雞有41～50個，8只雞有51～60個，8只雞有61～70個，2只雞有71～80個，2只雞有81～90個，2只雞有91～100個；平均每只雞約有56個卵泡。此外，該雞群中閉鎖卵泡數(shù)量為3～26個不等（1只3個，8只6～10個，12只11～15個，7只16～20個，5只21～25個，2只26個），約占活卵泡數(shù)量的27%左右。本研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同雞體內的活卵泡數(shù)（1～8mm）存在一定的差異，但卵泡在各個層析結構中的數(shù)量相對恒定，即每個數(shù)量等級結構的雞約集中在5只或6只，很少有4只或7只的存在。同樣，閉鎖卵泡的數(shù)量與其他卵泡類別的數(shù)量之間沒有相關性。

從表1中發(fā)現(xiàn)，有活性的卵泡（1～8mm）隨著卵泡直徑的增加，卵泡數(shù)量穩(wěn)定下降。盡管個體雞體內較大的卵泡數(shù)量較少，但是這種現(xiàn)象在個體間并不明顯，因為有超過一半的雞體內沒有7～8mm卵泡，少數(shù)雞有2～4個大卵泡，總體趨勢顯著。

3.2 卵泡生長速度 本試驗首先在第0天給雞飼喂單一劑量的蘇丹黑B，隨后通過確定染色的卵泡在卵巢中生長發(fā)育所需要的時間來判斷卵黃卵泡的生長速度。預試驗發(fā)現(xiàn)染料進入卵泡的時間不超過24h。在第1天，染料大多存在于>3mm的卵泡中，且集中于卵黃的外部區(qū)域，并延伸約0.5～1mm的深度。在第2天，3～4mm的卵泡中未見染料，或者染色在>5mm卵泡的外層。此時，染色模式根據(jù)卵泡大小表現(xiàn)出差異。在>6mm的卵泡中，染料呈斷層存在，在5～6mm的卵泡中染料向卵黃核擴散，4～5mm的卵泡中，整個卵黃被輕微染色。在本試驗所檢查的卵黃中發(fā)現(xiàn)，較小的卵泡含有輕微染色的卵黃核心，較大的卵泡具有強烈的染色層，在橫截面中可見染色環(huán)。這種差異染色模式反映了4～5mm卵泡在生長階段中卵黃成分的變化（Marza & Marza，1935），這種改變促進卵黃層的穩(wěn)定構象（Warren & Conrad，1939）。

本試驗發(fā)現(xiàn)，標記的卵泡比例隨時間下降；給雞飼喂蘇丹黑B后，第6天未在3～8mm的卵泡中發(fā)現(xiàn)染料，第10天，在8～40mm的卵泡中發(fā)現(xiàn)少數(shù)染料；本研究前期發(fā)現(xiàn)卵泡生長到3～8mm大約需要5d時間。因此表2和表3的結果與試驗1結果相一致。三次獨立實驗在特定時間間隔內進行，表2顯示卵泡一般生長模式，表3顯示特殊生長模式。試驗發(fā)現(xiàn)，每一只雞不論在哪個時間段，染色和未染色的卵泡之間都有明顯分界。該結果表明雞卵泡的生長是同步的。如表3所示，通過測量每個卵巢中最小的染色卵泡或最大的未染色卵泡，可以確定它們從一個大小級別到另一個大小級別的生長速度。然而，許多卵泡會演變成閉鎖卵泡，并且在演變的早期階段此類卵泡是無法被檢測到，因此該方法會有一定的偏差。如果所有已染卵泡隨后開始退化，那么這種檢測方法會高估卵泡的生長速度，如果演變成閉鎖卵泡，則會低估其生長速度。同樣，如果最大的未標記卵泡演變成閉鎖卵泡（如表3中第1天5～6mm中未標記的卵泡）則會高估其生長速度，如果所有未標記的卵泡開始退化，則會低估其生長速度。在卵泡生長發(fā)育后期會增加這4個錯誤數(shù)據(jù)的幾率。

卵巢中閉鎖卵泡的再吸收率通過染色時間長度表示。在第1天，染色卵泡數(shù)量約占閉鎖卵泡的一半，有些在第3天仍然明顯，到第6天染色的閉鎖卵泡消失。

盡管染色標記的方法僅適用于卵黃的再吸收而不適用于整個卵泡，但試驗結果表明，卵巢在幾天內會自動消除閉鎖卵泡。研究顯示，在5d內，卵泡演變?yōu)殚]鎖卵泡過程中活卵泡的丟失量約為40%。

3.3 檢測染色雞蛋 在試驗2中，從第0天給予母雞飼喂單劑量的蘇丹黑B染料，通過染色蛋黃的時間估計生長速度。不同母雞產出已染蛋黃是雞蛋需要9～13d的時間（表4）。隨后本試驗采用Oribe，Kameyama&Kayano（1975）的研究方法。顯示雞蛋染料圖案的漸進變化，并標明最后一個染色的蛋黃與第一個未染色蛋黃的時間間隔。研究發(fā)現(xiàn)，染色第2天，在一個狹窄的淺色蛋黃區(qū)橫截面發(fā)現(xiàn)環(huán)狀染色帶。連續(xù)觀察8d（表4），發(fā)現(xiàn)染色帶從較小染色環(huán)演變?yōu)椴灰?guī)則形狀。該結果與之前用于確定快速生長期染料環(huán)的結果一致（Warren & Conrad，1939；Lacassagne，1960；Bacon & Skala，1968；Gilbert，1972；Oribe，1973），其中最小的規(guī)則染色環(huán)內徑約為5mm。隨后將雞蛋放置3d（表4），發(fā)現(xiàn)在蛋黃核心4～5mm的直徑范圍內的染色呈彌散型。該3d的統(tǒng)計結果與卵泡從3mm增加至5mm的生長時間相一致（表2和表3）。

染色蛋的有序生產是該試驗的一個前提（至少針對3mm以上的卵泡）。因此可以保證在一系列染色蛋中間未發(fā)現(xiàn)未染色蛋，反之亦然。同樣，蛋黃中染色形狀的變化趨勢也沒有中斷。此外，也未在蛋黃與蛋黃染色環(huán)中間發(fā)現(xiàn)染色現(xiàn)象。

4 結論

本項研究從多角度闡明了國內母雞卵巢功能，然而這些研究迄今為止很少被關注。本試驗雖然只使用了一個母雞品種，但為與其他產母雞品種進行比較奠定了基礎。例如，一項關于肉雞或火雞的類似研究可以闡明這些雞蛋產量相對較差的情況，此外選擇一個品種進行研究來確定母雞是否隨著日齡的增加，通過改變體內多項相關代謝機制而引起產蛋量的下降。

在產蛋高峰期，母雞的卵巢約含有60個1～8 mm的卵泡。然而，本研究發(fā)現(xiàn)卵泡數(shù)量隨著卵泡大小的增加而相應減少。從3mm到排卵階段，卵泡的生長呈連續(xù)狀態(tài)，盡管不同雞之間存在一定差異，但從以下數(shù)據(jù)中可以得到近似生長狀態(tài)：從3mm到5mm，需3d（表4）；從5mm到8mm，需2d（表3和表4）；從8mm到排卵，需6d（表3和表4）。由于小于3mm的卵泡不能吸收蘇丹黑B染料，因此無法檢測1～3mm的卵泡生長速度。

如先前研究發(fā)現(xiàn)（Gilbert，1971），小的卵黃色卵泡不構成傳統(tǒng)的“池”，也不處于“靜止”狀態(tài)。如果處于靜止狀態(tài)，通常發(fā)生在直徑小于1mm的卵泡中。直徑>3mm或者>1mm卵泡的生長方式與其他等級結構卵泡的生長方式相同。此外，本試驗利用更加直觀的方式檢測到卵泡從3mm生長至8mm大約需要5d的時間，比Marza和Marza（1935）建議的染料時間短，但是超過了24h（Warren & Conrad，1939；Oribe，1973）。

隨著卵泡體積的增加，卵巢中卵泡的數(shù)量普遍減少，并且大約50%的母雞沒有7～8mm大小的卵泡。這在母雞體內的較大卵泡中是常見的差異，并且這種差異也調節(jié)了雞的產蛋率（Warren & Conrad，1939；Lacassagne，1960；Gilbert & Wood-Gush，1971；Gilbert，1972）。然而，本試驗發(fā)現(xiàn)約有80%甚至更高比例的此類母雞，可能是因為卵泡在7～8mm級別時的存在時間不超過1d。

評價卵巢功能的一個重要的指標是對閉鎖小卵黃色卵泡進行量化。在以前的報道中，雖然已經認識到卵泡閉鎖是禽類卵巢的一個共性，但卻并未給出相關信息（Dubuisson，1906；Fell，1925； Davis，1942；Moreau，Wilk & Rowan，1947；Romanoff & Romanoff， 1949；Marshall， 1957； Lofts & Murtón，1973；Gilbert，1979）。在卵巢中通常可以看到約10～15個閉鎖卵泡，最多可達30個。這些統(tǒng)計數(shù)字排除了閉鎖初始或末期階段的卵泡，以及通過肉眼無法識別的卵泡。季節(jié)性繁殖禽類卵泡的閉鎖主要發(fā)生在卵巢退化期間（Erpino，1969，1973；Kern，1972）。本研究中的母雞處于產蛋高峰期，但閉鎖卵泡的發(fā)生率仍然很高。

卵巢中卵泡的初始直徑大約為1mm或更小。在卵巢內，一直存在有大約20個1～2mm的卵泡，但不確定這是否恰好代表了卵巢中1d的卵泡初始量。然而，可以以此評估卵巢發(fā)育卵泡的潛力。研究發(fā)現(xiàn)，產蛋母雞一生可產多達1500個雞蛋（Romanoff & Romanoff，1949），如果每個卵巢產20個卵泡，那么將需要大約30000個卵泡。然而，這僅占卵巢內卵泡總數(shù)的2%左右（Hutt，1949）。因此，與其他脊椎動物一樣，母雞需要產出更多的卵泡，并通過閉鎖消除多余的卵泡（Greenwald， 1978；Jones，1978）。

閉鎖通常僅發(fā)生在較小的卵泡中，直到發(fā)育成卵圓形卵泡。因此，在任何時期可以排出卵泡數(shù)量的等級結構，是由初始的卵泡數(shù)量（約1mm）和發(fā)育至8mm的卵泡閉鎖率決定的。因此存在兩種互補機制，并且每種機制在調節(jié)卵巢排卵能力中起著重要的作用。然而，對于調控卵泡初始數(shù)量或卵泡閉鎖率的研究甚少。雖然研究已經證實FSH參與卵泡的生長，但其具體機制及在卵巢內的作用位點尚不清楚（Gilbert，1971；Lofts & Murtón， 1973）。

之前認為較大的卵黃色卵泡（直徑>8mm）與小的卵黃色卵泡不同，是因為8mm的卵黃色卵泡生長速度快而且卵泡內含有黃色蛋黃。然而，研究發(fā)現(xiàn)小的卵黃色卵泡也以每天增加約1mm直徑的速度生長，并且這些卵泡中同樣含有部分黃色蛋黃（Griffin et al.，1983）。此外，根據(jù)卵泡大小的等級結構分布，每個等級結構中的卵泡數(shù)都比直徑>8mm的卵泡數(shù)多。因此，有序排卵期是指卵泡從3mm甚至更小直徑開始生長發(fā)育的時期。

然而，直徑>8mm的卵泡與小于8mm的卵泡之間確實存在著重要的差別。大卵黃卵泡通常會排卵；在產蛋期間，母雞的大卵黃色卵泡不會變得無關緊要。相比之下，小卵黃卵泡通常會發(fā)育成閉鎖卵泡。產生這種規(guī)律的相關生理機制尚不明確。然而研究發(fā)現(xiàn)，在直徑約8mm的卵泡中，顆粒細胞的存在可能會改變卵泡的功能，因為顆粒細胞會停止分泌轉運體，直接轉移到卵黃形成卵母細胞的特化體（Griffin et al.，1983），隨后發(fā)生類固醇脫氫酶的第一步反應（Davidson，Gilbert & Wells，1979）。這一結果是否與卵泡抵抗閉鎖的能力直接相關，或者是否只是一個狀態(tài)變化還需進一步調查。

（注：本文譯自A.B.Gilbert的《Role of atresia in establishing the follicular hierarchy in the ovary of the domestic hen （Gallus domesticus） 》；本文翻譯省略了參考文獻， 如有需要請查閱原文。）