孟凱

摘 要：分別采用A、B、C三個(gè)公司的商品化酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）抗體檢測(cè)試劑盒和血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法對(duì)168份臨床免疫雞血清和標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)性血清進(jìn)行新城疫抗體監(jiān)測(cè)方法的比對(duì)試驗(yàn)與研究，比較間接ELISA和血凝抑制（HI）兩種試驗(yàn)方法的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，A、B、C三個(gè)公司生產(chǎn)的商品化間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果與血凝抑制（HI）試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率分別為98%、96.7%、90.2%；陰性符合率分別為86.7%、80%、86.7%；陰陽(yáng)性總體符合率分別為97%、95.2%、89.9%；A、B、C三個(gè)公司的ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)時(shí)間分別為2.5、3、3h。產(chǎn)品價(jià)格分別為1100、800、700元。比較發(fā)現(xiàn)，間接ELISA方法是一種快速、敏感、特異的血清學(xué)診斷方法，不同公司生產(chǎn)的商品化ELISA抗體檢測(cè)試劑盒在敏感性、特異性和檢測(cè)時(shí)間上均存在較大的差異，綜合分析，B公司生產(chǎn)的商品化酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）抗體檢測(cè)試劑盒成本較低，敏感性較高，可以用于臨床樣本的大規(guī)模檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：雞新城疫；抗體；ELISA；HI

新城疫又稱“偽雞瘟”或“亞洲雞瘟”，病毒高度依賴接觸方式傳染，主要影響雞的呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)并表現(xiàn)黏膜出血的體征[1]。雞新城疫病在我國(guó)的流行非常廣泛，往往在季節(jié)交替時(shí)高發(fā)，給養(yǎng)殖戶造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。新城疫病毒（NDV）的血清學(xué)檢測(cè)方法主要有病毒中和試驗(yàn)（VN）、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）、血凝抑制試驗(yàn)（HI）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等[3]。其中血凝抑制試驗(yàn)（HI）仍然是目前應(yīng)用最廣泛的血清學(xué)檢測(cè)方法，但是由于ELISA具有快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，加之ELISA具有可批量檢測(cè)及自動(dòng)化檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，其更適合于大規(guī)模檢測(cè)和便于標(biāo)準(zhǔn)化，用間接ELISA方法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的血凝抑制（HI）方法來(lái)檢測(cè)NDV抗體水平已成為一種趨勢(shì)，ELISA技術(shù)已越來(lái)越被廣大實(shí)驗(yàn)室所采用。

目前，ELISA方法與HI試驗(yàn)的比較研究已有多次報(bào)道，然而兩種試驗(yàn)方法的相關(guān)性比較結(jié)果從不相關(guān)到顯著相關(guān)存在很大的差異。與此同時(shí)，采用不同公司生產(chǎn)的商品化ELISA抗體檢測(cè)試劑盒所得出的結(jié)果也是不盡相同。本試驗(yàn)中，我們選取了A、B、C三家公司的商品化ELISA新城疫抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)168份HI滴度不同的血清樣本和ND的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、陰性血清進(jìn)行NDV的抗體檢測(cè)試驗(yàn)，分析不同公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果與HI法檢測(cè)雞血清中NDV抗體結(jié)果的相關(guān)性，比較了A、B、C三家公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性符合率、試劑盒價(jià)格以及試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)等數(shù)據(jù)，以期選出適用于臨床大規(guī)模雞場(chǎng)新城疫抗體檢測(cè)的ELISA試劑盒。

1 材料與方法

1.1 試劑材料 雞新城疫血凝抗原、陰性血清、陽(yáng)性血清，購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司；雞新城疫抗體測(cè)試劑盒分別購(gòu)自A、B、C三家生物科技有限公司；待檢的168份血清樣品，來(lái)自山東省濱州市某大型肉種雞養(yǎng)殖場(chǎng)的2個(gè)雞舍，均從消毒過(guò)的雞翅靜脈采集，每份1～2ml，分離血清置4℃條件下備用。

1.2 方法

1.2.1 HI試驗(yàn)方法 采用微量血凝抑制試驗(yàn)，按照GB/16550-2008進(jìn)行操作。使用1%的雞紅細(xì)胞和4個(gè)HA單位的病毒抗原進(jìn)行常規(guī)操作。只有在陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度不大于2log2、陽(yáng)性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度與已知滴度相差在一個(gè)稀釋度范圍內(nèi)、并且陰、陽(yáng)性血清都不發(fā)生自凝的情況下，HI的試驗(yàn)結(jié)果才能判定有效。檢測(cè)結(jié)果以HI效價(jià)大于或等于23為陽(yáng)性。

1.2.2 間接ELISA方法 其操作方法分別依照A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 間接ELISA方法和HI方法的檢測(cè)符合率分析[4] 以HI為基礎(chǔ)，HI檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的樣本用ELISA方法得出的陽(yáng)性率便為二者的陽(yáng)性符合率，HI檢測(cè)結(jié)果為陰性的樣本用ELISA方法得出的陰性率便為二者的陰性符合率，用兩種方法檢測(cè)同為陽(yáng)性或陰性的血清樣本占檢測(cè)總樣本的比率為二者的總體符合率。

1.4 待檢樣品的檢測(cè) 采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒分別對(duì)168份HI滴度不同的樣品（其中153份為陽(yáng)性血清樣品，15份為陰性血清樣品）進(jìn)行檢測(cè)，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 ELISA方法對(duì)HI血清樣品的檢測(cè)結(jié)果 按照新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒提供的臨界點(diǎn)判定值，采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒分別對(duì)168份常規(guī)血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1、表2、表3。

由表1、表2、表3可以看出，A公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽(yáng)性符合率達(dá)到了98%，陰性符合率為86.7%，陰陽(yáng)性總體符合率為97%；B公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽(yáng)性符合率為96.7%，陰性符合率為80%，陰陽(yáng)性總體符合率為95.2%；C公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒與HI方法的陽(yáng)性符合率為94.8%，陰性符合率為86.7%，陰陽(yáng)性總體符合率為94%。

2.2 三家公司ELISA檢測(cè)試劑盒的價(jià)格及試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng) A、B、C三家公司的禽新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒價(jià)格及試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)見表4。

3 討論

目前，已經(jīng)有多種血清學(xué)方法用于NDV抗體的檢測(cè)，其中ELISA和血凝抑制試驗(yàn)（HI）的應(yīng)用最為廣泛，兩種方法簡(jiǎn)單易學(xué)，對(duì)養(yǎng)雞場(chǎng)及養(yǎng)殖戶來(lái)說(shuō)，掌握一種適合自己的檢測(cè)方法就可以節(jié)約雞新城疫抗體檢測(cè)的成本，并且能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)雞群的免疫狀況，在臨床上對(duì)雞新城疫疾病的防控能夠起到很好的預(yù)防效果。

結(jié)合本試驗(yàn)所得出的數(shù)據(jù)可以看出，A公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒與HI方法的陽(yáng)性符合率最高，達(dá)到了98%，陰陽(yáng)性總體符合率達(dá)到了97%，產(chǎn)品性能在三家公司中最好，平均試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)為2.5h，試驗(yàn)時(shí)間短，但是其試劑盒的價(jià)格為1100元，較其他兩家公司生產(chǎn)的試劑盒的價(jià)格偏貴，不適于臨床上大規(guī)模推廣；其次是B公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，該試劑盒檢測(cè)結(jié)果與HI方法的陽(yáng)性符合率為96.7%，陰陽(yáng)性總體符合率為95.2%，產(chǎn)品性能稍低于A公司產(chǎn)品，但其試劑盒價(jià)格為800元，價(jià)格優(yōu)勢(shì)明顯；C公司生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)結(jié)果與HI方法的陽(yáng)性符合率僅為90.2%，陰陽(yáng)性總體符合率為89.9%，雖然價(jià)格最低，但在產(chǎn)品性能上均與其他兩家公司的產(chǎn)品存在差異。

與HI方法檢測(cè)ND抗體靈敏度低、耗時(shí)長(zhǎng)，且經(jīng)驗(yàn)依賴性強(qiáng)相比，ELISA法檢測(cè)ND抗體，其敏感性、特異性、檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)等均優(yōu)于HI檢測(cè)方法，是一種快速、特異、敏感的血清學(xué)診斷方法，本試驗(yàn)中，通過(guò)比較A、B、C三家公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒的性能、價(jià)格及試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)等數(shù)據(jù)，B公司生產(chǎn)的ELISA檢測(cè)試劑盒價(jià)格優(yōu)勢(shì)明顯且產(chǎn)品性能完全能夠滿足臨床需要，適于臨床樣本的大規(guī)模檢測(cè)。

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