林霞 于曉麗 王群青 王培松 王英姿

摘要[目的]測(cè)定不同生物殺菌劑對(duì)櫻桃莖腐病菌的毒力。[方法]采用平皿法，分析3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦參堿AS、2%蛇床子素EC、4%寧南霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井岡霉素AS對(duì)櫻桃莖腐病菌的抑菌效果。[結(jié)果]除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對(duì)櫻桃莖腐病菌表現(xiàn)出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大。丁子香酚、乙蒜素、蛇床子素、春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素對(duì)櫻桃莖腐病菌煙草疫霉的EC50分別為0.015 3、1.292 5、10.630 9、50.993 2、117.472 0、286.009 2、413.905 0和587.767 4 mg/L。丁子香酚對(duì)櫻桃莖腐病菌的抑制效果最好，其次為乙蒜素和蛇床子素，春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素的抑制效果較差，多抗霉素對(duì)櫻桃莖腐病菌沒(méi)有抑制效果。[結(jié)論]該研究為田間防治莖腐病和有效藥劑的篩選提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞櫻桃莖腐病;煙草疫霉;生物殺菌劑;毒力

中圖分類(lèi)號(hào)S482.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611（2019）02-0129-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.02.038

煙臺(tái)是我國(guó)甜櫻桃的主要產(chǎn)區(qū)，種植最早、面積最大，種植面積約為1.2萬(wàn)hm2，年產(chǎn)最高約24萬(wàn) t，分別占全國(guó)總量的70%、80%以上[1-3]。櫻桃莖腐病是由煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的病害，主要危害葉片和新生枝條的莖部，導(dǎo)致葉片和新生枝條干枯死亡[4]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，夏季感染莖腐病菌的苗木出現(xiàn)大批死亡的現(xiàn)象，尤其是在多雨年份的夏季表現(xiàn)更為明顯，發(fā)病嚴(yán)重的苗圃幾乎毀園[4-5]。但目前未見(jiàn)報(bào)道防治櫻桃莖腐病的相關(guān)藥劑。對(duì)櫻桃莖腐病流行規(guī)律和因素、抗性機(jī)理、品種資源抗性與評(píng)價(jià)等方面展開(kāi)了一系列研究[6]?；瘜W(xué)殺菌劑是防治植物病害的重要手段。早期針對(duì)煙草疫霉引起的煙草黑脛病進(jìn)行防治的方法是使用銅制劑，但銅制劑長(zhǎng)期使用會(huì)積累于土壤中，并污染環(huán)境[7]。隨后又出現(xiàn)了以代森錳鋅為代表的保護(hù)性殺菌劑，這類(lèi)殺菌劑具有表面保護(hù)作用，可對(duì)病菌進(jìn)行多位點(diǎn)抑制且不易產(chǎn)生抗藥性，但這類(lèi)殺菌劑在使用過(guò)程中用藥量大、效果差，對(duì)環(huán)境污染極其嚴(yán)重，代森錳鋅還被WHO、EPA、IARC等機(jī)構(gòu)認(rèn)定為易于致癌的一類(lèi)化學(xué)物質(zhì)[8-10]。20世紀(jì)70年代研制出了具有內(nèi)吸活性的殺菌劑，如乙磷鋁、甲霜靈、噁霉靈、烯酰嗎啉等，為煙草疫霉引起的煙草黑脛病的防治提供了更多的選擇[11]，但研究表明煙草疫霉對(duì)甲霜靈產(chǎn)生了抗藥性[12-16]，且長(zhǎng)期使用還會(huì)造成環(huán)境污染。為了使櫻桃產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展需要尋找安全有效、可交替輪換使用、毒副作用小的殺菌劑。生物殺菌劑具有安全、高效、無(wú)污染的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)食品安全具有重要作用[17]。為了篩選更多防治櫻桃莖腐病安全有效的生物殺菌劑，筆者研究3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦參堿AS、2%蛇床子素EC、4%南寧霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井岡霉素AS 9種生物殺菌劑對(duì)櫻桃莖腐病菌的抑菌效果。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)藥劑3%多抗霉素WP，廣東省東莞市瑞德豐生物科技有限公司;0.3%丁子香酚SL，山東省億嘉農(nóng)化有限公司;1.5%苦參堿AS，成都新朝陽(yáng)作物科學(xué)有限公司;2%蛇床子素EC，武漢天惠生物工程有限公司;4%南寧霉素AS，四川金珠生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司;80%乙蒜素EC，天津市漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司;6%春雷霉素WP，山西省臨猗中晉化工有限公司;0.5%香芹酚AS，成都新朝陽(yáng)作物科學(xué)有限公司;10%井岡霉素AS，浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1含藥培養(yǎng)基配制。1 L 10% V8汁固體培養(yǎng)基：100 mL V8汁中加入CaCO3 1 g，與水1∶9稀釋?zhuān)尤?5 g瓊脂粉，121 ℃高壓滅菌15 min。

用Eppendorf微量可調(diào)移液槍取1 mL 10 000 mg/L殺菌劑母液，用滅菌去離子水將供試藥劑配成一定濃度的稀釋液，取1 mL稀釋液加入49 mL 10% V8汁固體培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入培養(yǎng)皿中制成含藥平板。

1.2.2平皿法。

在無(wú)菌環(huán)境下，用接種針挑取6 mm的菌絲塊，放置于含藥平板中央，以不加藥平板作為對(duì)照，每個(gè)濃度重復(fù)3次。26 ℃恒溫培養(yǎng)5 d，應(yīng)用十字交叉法垂直測(cè)量平板菌落直徑，計(jì)算藥劑對(duì)櫻桃莖腐病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率[18]。

抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%

1.3數(shù)據(jù)分析回歸分析各處理濃度的對(duì)數(shù)值（X）和菌絲生長(zhǎng)抑制率幾率值（Y），求毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，得出生物殺菌劑對(duì)櫻桃莖腐病菌的抑制中濃度值（EC50）。

2結(jié)果與分析

2.1 9種生物殺菌劑對(duì)櫻桃莖腐病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

9種生物殺菌劑對(duì)櫻桃莖腐病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果見(jiàn)表1。由表1可知，丁子香酚的抑制效果最好，在濃度0.007 812 5～1.000 000 0 mg/L時(shí)抑制率為50%～100%;乙蒜素的抑制率次之，濃度0.25～8.00 mg/L時(shí)抑制率為10.00%～93.75%;蛇床子素濃度在1.562 5～50.000 0 mg/L時(shí)抑制率為10%～90%;春雷霉素濃度在6.25～200.00 mg/L時(shí)抑制率為2.5%～95.0%;香芹酚濃度在12.5～400.0 mg/L時(shí)抑制率為2.5%～87.5%;寧南霉素濃度在31.25～1 000.00 mg/L時(shí)抑制率為3.75%～88.75%;苦參堿濃度在31.25～1 000.00 mg/L時(shí)抑制率為0～81.25%;井岡霉素濃度在31.25～1 000.00 mg/L時(shí)抑制率為0～57.5%;多抗霉素濃度在31.25%～1 000.00 mg/L時(shí)抑制率為1.25%～7.50%。

2.2毒力測(cè)定結(jié)果

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對(duì)櫻桃莖腐病菌表現(xiàn)出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大（表2）。經(jīng)EC50分析表明，丁子香酚對(duì)櫻桃莖腐病菌具有很好的抑制作用，其EC50僅為0.015 3 mg/L，其次為乙蒜素和蛇床子素，EC50分別為1.292 5和10.630 9 mg/L，春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素的抑制效果較差，EC50為50.993 2～587.767 4 mg/L。

3結(jié)論與討論

該試驗(yàn)的9種生物殺菌劑中，除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對(duì)櫻桃莖腐病菌煙草疫霉表現(xiàn)出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大。其中，丁子香氛的抑菌效果最佳，其EC50僅為0.015 3 mg/L。丁子香酚是霜疫霉溶解劑，對(duì)霜霉、灰霉均有很好的治療作用。乙蒜素和蛇床子素也有較好的防治效果，EC50分別為1.292 5和10.630 9 mg/L。乙蒜素和蛇床子素屬于植物仿生農(nóng)藥，來(lái)源于安全的天然物，具有低毒、低殘留的優(yōu)點(diǎn)。丁子香酚、乙蒜素和蛇床子素等生物藥劑也是研配防治櫻桃莖腐病復(fù)配藥劑的最佳選擇，能夠減少化學(xué)農(nóng)藥用量，降低對(duì)化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗藥性風(fēng)險(xiǎn)。春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素對(duì)櫻桃莖腐病菌的抑制效果較差，其EC50在50.993 2～587.767 4 mg/L。

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