張靖潔 段露露 程蔚蘭 季春麗 崔紅利 李潤(rùn)植
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)分子農(nóng)業(yè)與生物能源研究所,太谷030801)
微藻是一類(lèi)能進(jìn)行光合自養(yǎng)且廣泛分布于自然界的低等植物,因其生長(zhǎng)速率快、生物量大和能高水平合成積累多種天然化合物而被人類(lèi)廣泛利用。微藻基生物產(chǎn)品目前已經(jīng)應(yīng)用于生物制藥、化妝美容、醫(yī)療保健,生物染料、畜禽養(yǎng)殖和水產(chǎn)等行業(yè)中[1-3]。利用微藻生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)生物柴油已成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一[4-5],現(xiàn)已對(duì)優(yōu)質(zhì)富油藻種選育[6]、規(guī)?;囵B(yǎng)體系及油脂富集調(diào)控技術(shù)和制油工藝[7]等進(jìn)行了諸多研究,微藻生物柴油產(chǎn)業(yè)化呈現(xiàn)良好前景,盡管成本高和存在一些限制因素。
提高微藻生物質(zhì)和油脂產(chǎn)量是規(guī)?;苽渖锊裼突蚋咧翟逵彤a(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而,微藻規(guī)?;囵B(yǎng)過(guò)程中常有伴生細(xì)菌污染,尤其是微藻藻際微環(huán)境中存在一些不易去除的細(xì)菌?,F(xiàn)今對(duì)這些伴生或共生的細(xì)菌與微藻互作機(jī)制以及對(duì)微藻生長(zhǎng)和目標(biāo)產(chǎn)物積累的影響還知之甚少。一些研究指出[8-10],微藻和細(xì)菌密不可分,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自然進(jìn)化,真核微藻與原核細(xì)菌之間形成復(fù)雜的相互作用,包括營(yíng)養(yǎng)依賴(lài)、代謝互補(bǔ)等多種方式。而且,藻菌互作是動(dòng)態(tài)的,能對(duì)不同環(huán)境做出響應(yīng)。
目前,已有研究證明[11],菌藻共生系統(tǒng)可以用于對(duì)工廠(chǎng)、市政和養(yǎng)殖等各種污水進(jìn)行高效處理,具有良好的經(jīng)濟(jì)、環(huán)境和社會(huì)效益。有關(guān)在微藻規(guī)?;B(yǎng)殖中,應(yīng)用有益藻菌共生體系以期獲得高量微藻生物質(zhì)和生產(chǎn)生物燃油等其他藻基產(chǎn)品還未見(jiàn)詳盡報(bào)道。
本文以前期篩選獲得的埃氏小球藻(Chlorella emersonii)藻株SXND-25為試材,分離鑒定藻際細(xì)菌菌群,篩選優(yōu)勢(shì)促生菌,人工構(gòu)建藻菌共生體系,分析促生菌對(duì)小球藻作用,建立了能顯著提高微藻生物量和產(chǎn)油量的藻菌共生體系。據(jù)此提出了在微藻規(guī)?;B(yǎng)殖中,通過(guò)建立調(diào)節(jié)藻際有益菌豐度的藻菌共生體系以期高效生產(chǎn)微藻生物質(zhì)和其他高值藻基產(chǎn)品的技術(shù)策略。
1.1.1 藻種與培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)所采用的藻種是本實(shí)驗(yàn)室從山西一煤化廠(chǎng)附近水體中分離純化的藻株,經(jīng)18S rDNA鑒定其為埃氏小球藻(Chlorella emersonii)的一個(gè)新株系,命名為SXND-25。埃氏小球藻用BG11培養(yǎng)基培養(yǎng)。
1.1.2 菌株與培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)所使用的菌株是在培養(yǎng)埃氏小球藻的過(guò)程中,從藻際微環(huán)境分離出來(lái)的6個(gè)細(xì)菌菌群/種,經(jīng)過(guò)16SrRNA鑒定,分別屬于鶉雞腸球菌(Enterococcusgallinarum)、大腸桿菌(Escherichia coli)、假單胞菌(Pseudomonas)和菠蘿泛菌(Pantoea)4個(gè)屬。菌株用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)。
1.2.1 藻種的分離、純化與鑒定 將采集到的水樣加入BG11培養(yǎng)基,置于光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:溫度(25±1)℃,濕度45%,光照強(qiáng)度4 500 lx,光暗比16 h∶8 h,每天定時(shí)搖動(dòng)3次。用平板涂布法將藻液稀釋分離,待長(zhǎng)出單細(xì)胞藻落,用接種環(huán)挑單株落于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。純化方法是重復(fù)平板涂布和挑單株培養(yǎng),直至培養(yǎng)皿上沒(méi)有雜菌和雜藻為止。
純化的藻種在達(dá)到一定的生物量后離心獲得濕藻液,冷凍干燥后獲得干藻粉,參照程蔚蘭等[12]用CTAB法提取藻DNA,用18S rDNA為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,測(cè)序后在數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行序列比對(duì),用鄰接法在MEGA7.0中構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),鑒定藻種。
1.2.2 菌群/種的分離、培養(yǎng)與鑒定 根據(jù)小球藻生長(zhǎng)曲線(xiàn),在生長(zhǎng)初期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期各取藻液1 mL,分別稀釋105-108倍。每10倍為一個(gè)梯度,各濃度梯度重復(fù)3次。平板涂布于固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中,做好標(biāo)記。2-3 d后,觀(guān)察并記錄固體培養(yǎng)基中菌落形態(tài)特征,挑取固體培養(yǎng)基中形態(tài)特征不同的單菌落分裝于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,作好標(biāo)號(hào),擴(kuò)繁培養(yǎng)。
菌液離心獲得菌體,提取細(xì)菌DNA,用16S rRNA為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,序列對(duì)比后用鄰接法在MEGA7.0中構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),從而鑒定出菌群的種屬。
1.2.3 優(yōu)勢(shì)促生菌種/群的篩選 在1 L BG11中接種初始小球藻0.2 g,實(shí)驗(yàn)組分別加入藻菌比(細(xì)胞數(shù))為1∶1的6個(gè)菌株/群進(jìn)行混合培養(yǎng)。菌液經(jīng)8 000 r/min離心5 min,棄上清。菌體沉淀用20 mL BG11培養(yǎng)基重懸后,接入小球藻的培養(yǎng)體系中。對(duì)照組為小球藻培養(yǎng),在小球藻培養(yǎng)體系中加入 20mL BG11培養(yǎng)基,每組設(shè)置3次重復(fù)。檢測(cè)培養(yǎng)一定時(shí)期的藻體生物量和藻細(xì)胞油脂積累等性狀,以確定促進(jìn)微藻生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)菌群/種。
1.2.4 菌藻共生體系的構(gòu)建 實(shí)驗(yàn)組選用優(yōu)勢(shì)菌種/群,將菌液接入到小球藻對(duì)數(shù)期培養(yǎng)體系(藻體干重為0.2 g/L,體積為1 L)中,分別設(shè)置藻菌比為 10∶1、5∶1、1∶1、1∶5、1∶10 等組合進(jìn)行共培養(yǎng)。每組設(shè)置3次重復(fù),對(duì)照組為小球藻單獨(dú)培養(yǎng)(藻干重為0.2 g/L,體積為1 L)。
1.2.5 小球藻尼羅紅染色和油脂含量及成分測(cè)定 將800 μL藻液與200 μL二甲基亞砜(DMSO),10 μL尼羅紅丙酮溶液(0.1 mg/mL)均勻混合,42℃條件下避光水浴5 min。使用藍(lán)光作為激發(fā)光,在正置熒光顯微鏡下觀(guān)察并拍照。
本實(shí)驗(yàn)提取油脂的方法是直接轉(zhuǎn)酯化法:將 5 mg凍干藻粉、0.1-0.3 mL氯仿∶甲醇(2∶1,V/V)、0.1-0.5 mL HCl-甲醇(5%,V/V)依次加入特氟龍密封墊片的玻璃螺紋管中。85℃水浴30 min,冷卻至室溫后,加入900 μL正己烷。將其在設(shè)定條件為25℃,150 r/min的搖床上萃取1 h。靜置過(guò)夜后,取上清正己烷萃取液,參照張飛等[13]描述的方法,使用氣相色譜儀(GC)(Agilent 7890D)測(cè)定脂肪酸組成及含量。色譜柱為Agilent HP-88弱極 性 毛 細(xì) 管 色 譜 柱(30 m×250 μm×0.25 μm),樣品1 μL分流進(jìn)樣,分流比1∶40進(jìn)樣口溫度260℃。使用氮?dú)庾鳛檩d氣,流速為1.0 mL/min。計(jì)算各組分的百分含量:峰面積歸一化法。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
1.2.6 數(shù)據(jù)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel整理后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和作圖,采用SPSS軟件t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,P<0.05表示差異顯著。
分離出的單株藻在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)為綠色,圓球形(圖1),初步鑒定為一株小綠藻。經(jīng)18S rDNA擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物大小為1 798 bp(圖2),測(cè)序并與已有微藻18S rDNA序列比對(duì)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示,此藻種與埃氏小球藻(KX395729.1)的距離最近(圖3),但其序列相似度為98%,并不是同一株系,最終鑒定此藻種為埃式小球藻的一個(gè)新株系,命名為SXND-25。
圖1 純化的藻種在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)
用尼羅紅染料對(duì)小球藻細(xì)胞染色,在熒光顯微鏡下定性觀(guān)察油脂儲(chǔ)存情況(圖4),可以看到油體在細(xì)胞內(nèi)均勻分布。提取油脂、GC測(cè)試結(jié)果顯示,此種小球藻含油量為28.25%,油脂成分中單不飽和脂肪酸(16∶1和18∶1)含量占總油脂含量的13.50%(圖 5)。
將分離到的細(xì)菌涂布于細(xì)菌培養(yǎng)基,培養(yǎng)至菌落形成,觀(guān)察菌落形態(tài)(圖6),包括菌落大小、表面黏稠程度、顏色、邊緣特征,將菌落分成6個(gè)不同菌種(表1)。挑去單個(gè)菌落,分別純化培養(yǎng)后,提取基因組DNA,進(jìn)行16S rRNA測(cè)序鑒定。序列比對(duì)(圖7)顯示1號(hào)和4號(hào)菌種為腸桿菌科的菠蘿泛菌屬(Pantoea),5號(hào)菌種為腸桿菌科的大腸桿菌屬(Escherichia coli),2號(hào)和6號(hào)菌種是假單胞桿菌科的假單胞菌屬(Pseudomonas),3號(hào)菌種是腸球菌科的鶉雞腸球菌屬(Enterococcus gallinarum)。
圖2 藻株基因組DNA(A)和藻株18S rDNA PCR產(chǎn)物(B)
圖3 幾種微藻18S rDNA序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
圖4 尼羅紅染色后的埃氏小球藻在熒光顯微鏡下的油體分布
圖5 埃氏小球藻的總油脂含量(W/W)及各脂肪酸相對(duì)含量(%)
圖6 菌落的形態(tài)
表1 來(lái)自埃氏小球藻藻際6個(gè)細(xì)菌菌落的形態(tài)及特征
將埃氏小球藻與6株共棲菌分別以1∶1比例組合,連續(xù)8 d共培養(yǎng),檢測(cè)微藻生物量(圖8)表明,6株共棲菌中,菌株3鶉雞腸球菌和菌株5大腸桿菌抑制了微藻的生長(zhǎng),其中抑制作用最強(qiáng)的菌株為菌株3。其余4株共棲菌促進(jìn)了微藻的生長(zhǎng),菌株2假單胞菌的促進(jìn)作用最顯著,微藻生物量達(dá)到4.12 g/L,比對(duì)照組增長(zhǎng)1.32 g/L,增長(zhǎng)量占對(duì)照組生物量的47.14%;其次是菌株4菠蘿泛菌的促進(jìn)作用明顯微藻生物量達(dá)到3.73 g/L,比對(duì)照組增長(zhǎng)0.93 g/L,增長(zhǎng)量占對(duì)照組生物量的33.21%。據(jù)此,篩選出促進(jìn)微藻生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)促生菌株/群為2號(hào)和4號(hào)菌種,即假單胞菌和菠蘿泛菌,用于下一步埃氏小球藻藻菌共生體系的構(gòu)建。
圖7 六個(gè)菌種及其他已知菌種18S rDNA序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
圖8 六株共棲菌對(duì)埃氏小球藻生物量的影響
構(gòu)建埃氏小球藻與假單胞菌不同配比(10∶1、5∶1、1∶1、1∶5、1∶10)藻菌共生體系,分別共培養(yǎng)8 d,檢測(cè)每天的生物量和第8天的藻細(xì)胞含油量。結(jié)果表明(圖9),藻菌比和生物量呈先增后減的趨勢(shì)。在藻菌比例為1∶1時(shí),第8天生物量高達(dá)4.12 g/L,相比對(duì)照組增長(zhǎng)了1.32 g/L,增長(zhǎng)率為47.14%,此時(shí)油脂含量為29.50%,相比對(duì)照組增長(zhǎng)了1.25%,增率為4.42%。埃氏小球藻和假單胞菌共生體系中,生物量和油脂含量在1∶1以前呈正相關(guān)(圖10),其后隨著藻菌比的降低,小球藻的生物量和含油率均減低。
圖9 埃氏小球藻與假單胞菌共生體系生物量變化情況
圖10 埃氏小球藻與假單胞菌共生培養(yǎng)第8天的微藻生物量和油脂含量
構(gòu)建埃氏小球藻與菠蘿泛菌不同配比(10∶1、5∶1、1∶1、1∶5、1∶10)藻菌共生體系,分別共培養(yǎng)8 d,檢測(cè)每天的生物量,結(jié)果表明(圖11)當(dāng)藻菌比例為1∶5時(shí),埃氏小球藻生物量最大,第8天生物量為5.86 g/L,相比對(duì)照組增長(zhǎng)了3.06 g/L,增長(zhǎng)率為109.29%。
取微藻培養(yǎng)第8天藻樣,檢測(cè)藻細(xì)胞含油量。圖12顯示,藻細(xì)胞油脂含量與生物量趨勢(shì)相反,藻菌比例與油脂含量的趨勢(shì)先減后增。當(dāng)藻菌比例為1∶5時(shí),藻細(xì)胞油脂含量降低為26.88%,相比對(duì)照組降低了4.85%。
圖11 埃氏小球藻與菠蘿泛菌共生體系微藻生物量變化
圖12 埃氏小球藻與菠蘿泛菌共培養(yǎng)第8天的微藻生物量和油脂含量
構(gòu)建埃氏小球藻與假單胞菌比為1∶1的共生體系1以及埃氏小球藻與菠蘿泛菌比為1∶5的共生體系2,分別培養(yǎng)8天后,檢測(cè)藻細(xì)胞各脂肪酸成分含量,并計(jì)算飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)和多不飽和脂肪酸(PUFA)的含量。檢測(cè)結(jié)果表明(表2)共生體系1和共生體系2中MUFA含量比對(duì)照組均有提高。共生體系2中藻細(xì)胞MUFA含量提高更顯著,比對(duì)照增加了162.96%,同時(shí)飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸相應(yīng)地降低。在藻菌共生培養(yǎng)體系中,藻細(xì)胞油脂的總產(chǎn)量均比對(duì)照組高(表3),且共生體系2總油脂產(chǎn)量高達(dá)1 575 mg/L,共生體系1次之。然而,共生體系2中的MUFA產(chǎn)量遠(yuǎn)高于共生體系1,達(dá)554-564 mg/L,其中油酸(C18∶1)比對(duì)照組顯著提高。單不飽和的油酸和棕櫚油酸(16∶1)是制取優(yōu)質(zhì)生物柴油的理想脂肪酸成分。因此,共生體系2更適合應(yīng)用于生產(chǎn)生物柴油的規(guī)?;囵B(yǎng)。
表2 埃氏小球藻及其藻菌共培養(yǎng)第8天藻細(xì)胞各脂肪酸含量(%)
微藻生長(zhǎng)自然水體以及微藻規(guī)?;囵B(yǎng)過(guò)程中,其藻際微環(huán)境常存在一些不易徹底分離和去除的細(xì)菌菌群,包括抑藻菌、溶藻菌和促生菌以及依賴(lài)菌等。Amin[14]和張晶等[15]對(duì)自然水體中藻菌共生體系研究揭示,細(xì)菌為微藻的生長(zhǎng)提供了CO2,同時(shí)可以分解有機(jī)物,固定無(wú)機(jī)氮;微藻則提供了O2促使菌的生長(zhǎng)。在微藻純化培養(yǎng)過(guò)程中,添加抗生素只殺死了部分外部菌,有益的共生菌則會(huì)因藻種的協(xié)助得以生存。將促生菌與目標(biāo)微藻構(gòu)建藻菌共生體系,已應(yīng)用于各種廢水處理,廢水凈化及資源化利用效果明顯。
表3 埃氏小球藻及其藻菌共培養(yǎng)第8天總油脂及飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸產(chǎn)量(mg/L)
通過(guò)構(gòu)建優(yōu)勢(shì)促生菌種與埃氏小球藻的共生體系,我們研究發(fā)現(xiàn),埃氏小球藻與假單胞菌(Pseudomonas)1∶1組合(共生體系1),以及埃氏小球藻與菠蘿泛菌(Pantoea)1∶5組合(共生體系2),不僅能顯著提高微藻生物量,還促進(jìn)藻細(xì)胞油脂合成積累。共生體系1在培養(yǎng)8 d時(shí),微藻油脂含量由28.25%增長(zhǎng)到29.50%,油脂總產(chǎn)量由791 mg/L增長(zhǎng)到1 215 mg/L。雖然共生體系2的油脂含量有所降低,但是在生物量提高較大,最終微藻總油脂產(chǎn)量由791 mg/L增長(zhǎng)到1 575 mg/L。其他一些人工構(gòu)建藻菌共生體系研究亦顯示有益共生菌可促進(jìn)微藻生物量和油脂積累的增加[16-18]。例如,Suminto 等[19]研究表明,黃桿菌屬對(duì)小球藻的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。史玉倩等[20]報(bào)道菠蘿泛菌也可以促進(jìn)小球藻生長(zhǎng)和油脂積累,Mouget等[21]的結(jié)果顯示,假單胞菌(Pseudomonas)對(duì)小球藻(Chlorella)和柵藻(Scenedesmusobliqnus)的生長(zhǎng)都有促進(jìn)作用。
需要指出的是,不同種屬的細(xì)菌與不同微藻的互作效果差異較大。章登嵐[22]研究表明假單胞菌(Pseudomonassp.)會(huì)導(dǎo)致微囊球藻(Microcystis aeruginosa)的死亡,從而降低了微囊球藻的生物量。Abed等[23]的研究則顯示,假單胞菌(Pseudomonas)能促進(jìn)藍(lán)藻(Cyanobacterial)—也稱(chēng)藍(lán)細(xì)菌生物量提高8倍。本研究從埃氏小球藻藻際分離鑒定出6種不同菌種,其中2個(gè)菌種抑制微藻生長(zhǎng),4個(gè)菌種促進(jìn)微藻生長(zhǎng),假單胞菌(Pseudomonas)和菠蘿泛菌(Pantoea)促生效果極為顯著。
盡管本研究未檢測(cè)藻菌互作具體機(jī)制,可能是抑生菌為了競(jìng)爭(zhēng)養(yǎng)分產(chǎn)生了抑制小球藻生長(zhǎng)的物質(zhì),從而殺死部分埃氏小球藻,而促生菌有可能產(chǎn)生能促進(jìn)微藻生長(zhǎng)的物質(zhì),導(dǎo)致埃氏小球藻生物量增加。本文中假單胞菌(Pseudomonas)對(duì)小球藻的生物量和油脂含量均有顯著提高,是最值得關(guān)注的問(wèn)題。尚海[10]等做電鏡顯示細(xì)菌與藻細(xì)胞以胞外連體的形式共生。共生狀態(tài)下的假單胞菌隨著藻細(xì)胞的大量繁衍,逐漸處于一種脅迫狀態(tài),可能通過(guò)胞外連體錯(cuò)誤地向藻細(xì)胞傳遞脅迫信號(hào),藻細(xì)胞接受脅迫信號(hào)從而調(diào)節(jié)了自身的油脂代謝途徑??蛇M(jìn)一步分離測(cè)得共生菌的細(xì)胞數(shù)和油脂含量來(lái)驗(yàn)證。
另外,一些研究表明,假單胞菌(Pseudomonas)和菠蘿泛菌(Pantoea)是一些高等植物的病原菌[24-25]。例如,顧沁等[26]報(bào)道菠蘿泛菌是玉米葉脈產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)的致病菌。菠蘿泛菌也是多肉植物褐腐病的致病菌[27]。然而,這兩個(gè)菌卻能顯著促進(jìn)埃氏小球藻及其他一些微藻的生長(zhǎng)??梢?jiàn),藻菌共生及互作效果具有種屬專(zhuān)一性。小球藻作為單細(xì)胞真核生物,經(jīng)與共生菌協(xié)同進(jìn)化,藻細(xì)胞可能釋放一些抑制周?chē)渌锏幕钚猿煞郑沟貌ぬ}泛菌不會(huì)像危害高等植物那樣抑制小球藻生長(zhǎng),反而小球藻能適當(dāng)控制菠蘿泛菌的生物量,存活的菠蘿泛菌可不斷地提供CO2和其他營(yíng)養(yǎng)促進(jìn)小球藻的快速生長(zhǎng),二者處于協(xié)作共生狀態(tài)。進(jìn)一步檢測(cè)微藻產(chǎn)生何種物質(zhì)或信號(hào)分子能有效控制這兩種植物病原菌的生長(zhǎng),可為研發(fā)藻源功效成分及其在農(nóng)作物生產(chǎn)上應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
微藻總油脂產(chǎn)量和脂肪酸構(gòu)成(特別是單不飽和脂肪酸)是微藻用于制備優(yōu)質(zhì)生物柴油和高值微藻油脂產(chǎn)品的兩個(gè)關(guān)鍵因素。本研究另一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是,所構(gòu)建的兩個(gè)藻菌共生體系均能顯著提高藻細(xì)胞油脂中單不飽和脂肪酸(十六烯酸和十八烯酸)合成積累量,尤其是共生體系2效果更強(qiáng)。這可能是菌藻共生互作所調(diào)控的結(jié)果。隨著藻菌共生體系培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),氮源供應(yīng)量下降,造成體系進(jìn)入氮脅迫狀態(tài)。為應(yīng)對(duì)氮脅迫,微藻積累更多油脂和具有高抗氧化活性的單不飽和脂肪酸[28],具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。從制備油脂生物燃油和高端藻油產(chǎn)品出發(fā),可選用共生體系2進(jìn)行埃氏小球藻規(guī)?;咝юB(yǎng)殖。
本研究篩選到一株生長(zhǎng)快、含油量高(>28%,干重百分比)的優(yōu)異埃氏小球藻藻株,并從其藻際微環(huán)境分離鑒定出6種不同的細(xì)菌菌種。成功構(gòu)建了埃氏小球藻與2種優(yōu)勢(shì)促生菌(假單胞菌和菠蘿泛菌)分別組合的有益藻菌共生體系。研究表明,通過(guò)構(gòu)建藻菌共生體系,適當(dāng)調(diào)控優(yōu)勢(shì)促生菌的豐度,可顯著提高微藻生物量及總油脂和單不飽和脂肪酸的產(chǎn)量。這為探究藻菌互作和規(guī)?;B(yǎng)殖微藻以制備優(yōu)質(zhì)生物燃油或高值微藻油脂產(chǎn)品提供了一條新策略。