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        海參腦苷脂對前脂肪細(xì)胞分化的抑制作用及機(jī)制

        2019-06-04 02:54:42王美玲劉亞軒黎晨曼劉媛媛王靜鳳
        食品科學(xué) 2019年9期

        王美玲,劉亞軒,黎晨曼,劉媛媛,符 萌,王靜鳳*

        (中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 青島 266003)

        隨著人們生活質(zhì)量的不斷提高,肥胖已經(jīng)成為常見的代謝綜合征之一[1],可引發(fā)心血管疾病、II型糖尿病等一系列慢性疾病[2],已經(jīng)變成全世界重要的社會問題。如今,肥胖人群的數(shù)量不斷上漲,肥胖及其代謝綜合征的發(fā)病率也在不斷升高[3-4]。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),脂肪組織中存在的一些炎癥可能和肥胖有關(guān)的機(jī)體代謝紊亂存在一定的關(guān)聯(lián)[2,5]。因此,對于可有效控制肥胖的活性物質(zhì)研究對人類發(fā)展存在重要的意義。研究證實(shí),肥胖與前脂肪細(xì)胞的增殖和分化密切相關(guān)[6],前脂肪細(xì)胞中脂肪酸的過多積累以及脂肪細(xì)胞的肥大均可誘導(dǎo)肥胖的發(fā)生[7]。脂肪細(xì)胞的肥大以及增生會導(dǎo)致組織缺氧,從而誘發(fā)一些其他的組織炎癥[8]。在人的一生中,脂肪細(xì)胞數(shù)量增加主要發(fā)生在胚胎發(fā)生期和青春期早期,成人體內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量維持恒定,但是脂肪細(xì)胞卻在逐漸增大[9],Kwan等指出增加脂肪細(xì)胞的脂肪分解可能是一種治療肥胖的有效策略,其研究發(fā)現(xiàn)降低脂肪細(xì)胞中甘油三酯(triglyceride,TG)的含量會使小鼠體質(zhì)量下降[10]。所以,調(diào)節(jié)前脂肪細(xì)胞的增殖以及分化有助于某些慢性疾病的改善。

        腦苷脂是一種中性鞘糖脂,由神經(jīng)酰胺和單糖組成;其中,神經(jīng)酰胺是由長鏈脂肪酸中的羧基與長鏈堿的氨基經(jīng)脫水以酰氨鍵相連形成的一類酰胺類化合物。人們于19世紀(jì)開始關(guān)注海洋生物中的腦苷脂,其作用溫和,適合慢性疾病的治療[11],研究表明腦苷脂可以抗病毒、抗腫瘤,在免疫調(diào)節(jié)等方面扮演著重要的角色。海參具有很多的食療以及營養(yǎng)價(jià)值,同時(shí)體內(nèi)存在很多具備多種活性的成分,其中就包含腦苷脂。腦苷脂的生物活性與其在體內(nèi)代謝產(chǎn)生的神經(jīng)酰胺及長鏈堿密切相關(guān),而海參腦苷脂中存在獨(dú)特的、不飽和程度更高的長鏈堿。研究表明,海參腦苷脂具有神經(jīng)保護(hù)作用,可以改善阿爾茨海默??;海參腦苷脂可以調(diào)節(jié)糖代謝和脂質(zhì)代謝,從而改善機(jī)體的能量代謝[12]。本實(shí)驗(yàn)采用3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞研究海參腦苷脂對其增殖、分化的阻抑作用及機(jī)理,以期為研究功能性海洋活性物質(zhì)提供理論參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        海參購于青島水產(chǎn)市場;3T3-L1細(xì)胞株購自美國模式培養(yǎng)物研究所。

        DMEM培養(yǎng)基 美國Gibco公司;胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS) 美國Hyclone公司;二甲基亞砜、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、胰蛋白酶、地塞米松、胰島素、油紅O染料 美國Sigma公司;TRIzol試劑美國Invitrogen公司;SRBP Green熒光染料 瑞士Roche公司;M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 日本Takara公司;CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)、過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、β-actin抗體 英國Abcam公司;丙烯酰胺、牛血清白蛋白、RIPA裂解液 北京索萊寶科技公司產(chǎn)品;脫脂牛奶美國BD公司;其他試劑為國產(chǎn)分析純。

        1.2 儀器與設(shè)備

        2711型CO2培養(yǎng)箱 德國Heraeus公司;倒置顯微鏡日本Olympus公司;Neofuge 13R型離心機(jī) 上海力申科學(xué)儀器公司;酶標(biāo)儀、熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,qPCR)儀 美國Bio-Rad公司;PVDF膜 美國Milipore公司;脫色搖床北京六一生物科技有限公司;全自動凝膠成像分析儀上海培清科技公司。

        1.3 方法

        1.3.1 海參腦苷脂的制備

        將海參磨碎后稱取2 kg粉末,用9 L氯仿-甲醇溶液(體積比2∶1)體系浸提12 h后過濾。重復(fù)浸提3 次,收集多次提取所得的浸提液,后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至其干燥,得脂質(zhì)粗提物。然后采用正相硅膠柱層析法分離所得脂質(zhì)粗提物,用三氯甲烷-甲醇溶液(體積比95∶5)進(jìn)行梯度洗脫并收集洗脫液,采用薄層層析法測定洗脫液的成分,并合并其中比移值相同的組分。將這些組分濃縮使其干燥,得到海參腦苷脂。經(jīng)高效液相色譜法分析后,海參腦苷脂純度為99%。

        1.3.2 3T3-L1細(xì)胞的培養(yǎng)和分化

        3T3-L1細(xì)胞用含10% FBS(體積分?jǐn)?shù),下同)的DMEM完全培養(yǎng)液,在5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞融合至90%左右時(shí)進(jìn)行傳代。調(diào)整細(xì)胞的濃度并將其加入24 孔板中,使每孔細(xì)胞數(shù)為2h104個。待細(xì)胞長滿并且接觸抑制48 h后,換為含有FBS(10%)、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(0.5 mmol/L)、地塞米松(1 μmol/L)、胰島素(10 μg/mL)的完全培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。48 h后,換為含有胰島素(10 μg/mL)和FBS(10%)的高糖DMEM培養(yǎng)基。之后每2 d換為血清體積分?jǐn)?shù)為10%的高糖DMEM完全培養(yǎng)液。

        1.3.3 3T3-L1細(xì)胞增殖情況測定

        調(diào)整細(xì)胞濃度并將其接種于96 孔板中,使每孔細(xì)胞數(shù)為2h103個。24 h后,更換含有不同質(zhì)量濃度海參腦苷脂的完全培養(yǎng)液,每組設(shè)置3 個平行孔。根據(jù)前期與腦苷脂相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最終將質(zhì)量濃度設(shè)為62.5、125、250 μg/mL,繼續(xù)培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,加入噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT),孵育4 h,在570 nm波長處測定不同組細(xì)胞的吸光度。

        1.3.4 3T3-L1細(xì)胞LDH活力測定

        細(xì)胞接種及加樣方法同1.3.3節(jié)。不同質(zhì)量濃度海參腦苷脂處理3T3-L1細(xì)胞4 d后,采用試劑盒測定乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活力。

        1.3.5 3T3-L1細(xì)胞分化過程脂質(zhì)蓄積情況測定

        3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化的方法同1.3.2節(jié)。分別于分化第0、2、4天加入含不同質(zhì)量濃度海參腦苷脂(0、62.5、125、250 μg/mL)的培養(yǎng)液。細(xì)胞分化至第8天時(shí),脂肪細(xì)胞用體積分?jǐn)?shù)10%多聚甲醛固定20 min后,用體積分?jǐn)?shù)0.5%油紅O染液染色30 min,用體積分?jǐn)?shù)60%異丙醇清洗后拍照。每孔加入異丙醇溶解油紅O染液,調(diào)整酶標(biāo)儀于490 nm波長處檢測吸光度。半定量檢測已分化細(xì)胞中含有脂質(zhì)的含量。

        1.3.6 反轉(zhuǎn)錄qPCR法檢測Wnt/β-catenin通路關(guān)鍵基因mRNA的表達(dá)

        調(diào)整細(xì)胞濃度并將其加入24 孔板中,使每孔最終的細(xì)胞量為2h104個。按1.3.2節(jié)方法誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞分化。在細(xì)胞分化第0、2、4、8天時(shí),用RNA提取試劑盒收集細(xì)胞中總RNA。將所提總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。將cDNA 5 倍體積稀釋后進(jìn)行擴(kuò)增,總體系為25 μL,其中SYBR 12.5 μL、稀釋后cDNA 5 μL、上下游引物各0.75 μL、雙蒸水6 μL。PCR條件:95 ℃預(yù)變性10 min;95 ℃變性15 s,60 ℃退火10 s,72 ℃延伸45 s,循環(huán)45 次。所用引物序列如表1所示。以β-actin為內(nèi)參,所測基因的相對表達(dá)量以與β-actin表達(dá)量的比值表示。1.3.7 Western blotting法檢測β-catenin總蛋白以及核蛋白的表達(dá)

        表1 PCR擴(kuò)增關(guān)鍵基因的引物序列Table1 Primer sequences used for PCR amplif i cation of key factors

        調(diào)整細(xì)胞濃度并將其加入24 孔板中,使每孔最終細(xì)胞數(shù)為2h104個。按1.3.2節(jié)方法誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞分化,在細(xì)胞分化到第0、2天時(shí)加入250 μg/mL的海參腦苷脂,每組4 個平行孔。待細(xì)胞分化到第4天后,用D-Hanks液沖洗2~3 次,然后每組加入相應(yīng)裂解液,于低溫條件下使細(xì)胞裂解5~10 min,然后離心取上清液。BCA試劑盒測定蛋白質(zhì)量濃度,按需要補(bǔ)充4×上樣緩沖液,100 ℃水溫下孵育10 min,得到總蛋白。于分化第4天時(shí)收集細(xì)胞,按照試劑盒所述方法收集細(xì)胞核內(nèi)蛋白。取上述所提樣品用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白,將目的蛋白條帶進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,然后進(jìn)行封閉。一抗孵育后,用含有標(biāo)記的二抗孵育2 h。充分洗滌后和超敏發(fā)光液作用,暗室曝光后掃描。細(xì)胞總β-catenin和核β-catenin分別以β-actin和TATA結(jié)合蛋白(TATA-binding protein,TBP)為內(nèi)參。

        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果以fs表示,應(yīng)用SPSS軟件完成統(tǒng)計(jì)分析,并進(jìn)行最小顯著性差異法兩兩比較,P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 海參腦苷脂在3T3-L1細(xì)胞增殖過程中的作用

        正常增殖細(xì)胞中的琥珀酸脫氫酶能與MTT結(jié)合產(chǎn)生不溶于水的結(jié)晶紫甲瓚,而失去增殖能力的細(xì)胞則無法和MTT相結(jié)合,因此根據(jù)這一原理可反映細(xì)胞的數(shù)目。同時(shí),可根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)來探究受試物對細(xì)胞是否具有毒性作用。

        圖1 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞增殖的影響Fig.1 Effect of cerebroside on proliferation of 3T3-L1 preadipocytes

        由圖1可知,與對照組相比,各質(zhì)量濃度海參腦苷脂處理過的3T3-L1細(xì)胞數(shù)目均有下降趨勢,而且具有時(shí)間劑量效應(yīng)。其中250 μg/mL海參腦苷脂對前脂肪細(xì)胞生長的抑制率較高,作用96 h后,抑制率達(dá)到27.52%。

        2.2 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞LDH分泌情況的影響

        LDH廣泛分布于各種組織內(nèi)。若細(xì)胞受到毒性作用,則會分泌釋放過多LDH。由圖1可知,各質(zhì)量濃度的海參腦苷脂可以不同程度地抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖,為進(jìn)一步驗(yàn)證海參腦苷脂是否存在毒性作用,收集了海參腦苷脂作用96 h后的細(xì)胞上清液。

        圖2 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活力的影響Fig.2 Effects of sea cucumber cerebroside on LDH activity in culture supernatant of 3T3-L1 preadipocytes

        由圖2可知,各質(zhì)量濃度海參腦苷脂對培養(yǎng)上清液中LDH活力均無顯著影響,說明海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞沒有毒性作用。

        2.3 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞分化過程脂質(zhì)蓄積的影響

        圖3 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞分化過程的影響Fig.3 Effect of sea cucumber cerebroside on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes

        3T3-L1細(xì)胞進(jìn)入分化后,細(xì)胞回縮變圓并開始出現(xiàn)脂滴,隨著時(shí)間的推移,細(xì)胞內(nèi)的脂滴會慢慢增多。如圖3A所示,對照組脂肪細(xì)胞大部分具有脂滴,而且所含脂滴比較飽滿,而添加不同質(zhì)量濃度海參腦苷脂的脂肪細(xì)胞脂滴相應(yīng)減少,并且抑制作用具有劑量效應(yīng)。油紅O染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明,海參腦苷脂可以明顯阻抑3T3-L1細(xì)胞的分化,且抑制效果隨質(zhì)量濃度升高而加強(qiáng)。其中,250 μg/mL海參腦苷脂的作用最明顯(圖3B)。同時(shí),測定了海參腦苷脂處理后脂肪細(xì)胞中TG含量的變化。如圖3C所示,經(jīng)不同質(zhì)量濃度的海參腦苷脂處理后,TG含量極顯著下降(P<0.01),且抑制效果隨質(zhì)量濃度升高而加強(qiáng)。其中,250 μg/mL海參腦苷脂作用最明顯,相比于對照組,TG含量降低了30.67%。

        2.4 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞C/EBPα和PPARγ mRNA表達(dá)的影響

        PPARγ、C/EBPα是脂肪細(xì)胞在分化過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在脂肪細(xì)胞分化過程中有十分重要的作用,能夠啟動脂肪細(xì)胞分化有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[13]。PPARγ以及C/EBPα共同作用,使脂肪特異性基因表達(dá)啟動,從而促進(jìn)長鏈脂肪酸的生成和累積[14]。

        圖4 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞分化過程的影響Fig.4 Effect of sea cucumber cerebroside on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes

        由圖4可知,與對照組相比,海參腦苷脂可以極顯著降低脂肪細(xì)胞分化過程中第4、8天時(shí)C/EBPα和PPARγ的mRNA表達(dá)量(P<0.01)。

        2.5 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞Wnt/β-catenin通路基因mRNA表達(dá)的影響

        Wnt/β-catenin通路在脂肪細(xì)胞的分化過程中扮演著非常重要的角色[15]。研究表明,F(xiàn)Z1作為Wnt/β-catenin通路中不可或缺的一員,是Wnt蛋白在細(xì)胞中的重要受體[16]。LRP5為LRP家族的一員,該家族在Wnt/β-catenin通路中作為輔助受體也占據(jù)著不可或缺的角色[17]。而β-catenin和脂肪細(xì)胞的分化密切相關(guān),當(dāng)其表達(dá)量升高時(shí)可以降低脂肪細(xì)胞的分化水平。

        圖5 海參腦苷脂對3T3-L1細(xì)胞Wnt/β-catenin通路基因mRNA表達(dá)的影響Fig.5 Effect of sea cucumber cerebroside on mRNA expression of genes involved in Wnt/β-catenin signaling pathway in 3T3-L1 preadipocytes

        由圖5可知,與對照組相比,海參腦苷脂可極顯著升高3T3-L1細(xì)胞分化第2、4、8天LRP5 mRNA的表達(dá)量(P<0.01),可極顯著提高細(xì)胞分化第4、8天FZ1 mRNA的表達(dá)量(P<0.01)。同時(shí),海參腦苷脂可以顯著升高3T3-L1細(xì)胞分化第4、8天的β-catenin mRNA的表達(dá)水平,與對照組相比,第4天時(shí)β-catenin mRNA的表達(dá)量升高了64.7%,第8天時(shí)升高了141.2%(P<0.01)。

        2.6 海參腦苷脂對β-catenin表達(dá)及向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響

        Wnt/β-catenin通路啟動之后,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)β-catenin的積累逐漸增加,并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中調(diào)控脂肪細(xì)胞分化[18]。21H7可以抑制β-catenin的表達(dá)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)證明海參腦苷脂可以通過Wnt/β-catenin通路抑制脂肪細(xì)胞的分化,所以進(jìn)一步通過蛋白實(shí)驗(yàn)研究海參腦苷脂對β-catenin向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響。

        圖6 海參腦苷脂對β-catenin表達(dá)及向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響Fig.6 Effect of sea cucumber cerebroside on the expression and nuclear transfer of β-catenin

        由圖6可知,與對照組相比,海參腦苷脂可升高β-catenin蛋白的表達(dá)量,并且可以極顯著促進(jìn)其在核內(nèi)的表達(dá)(P<0.01)。21H7作用之后,細(xì)胞總β-catenin和核β-catenin的蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05,P<0.01);海參腦苷脂對β-catenin蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用也受到抑制,但是其可以顯著改善21H7對總β-catenin的抑制作用(P<0.0 5)。綜上所述,海參腦苷脂可以通過Wnt/β-catenin信號通路抑制3T3-L1細(xì)胞分化。

        3 討 論

        脂肪細(xì)胞在進(jìn)入分化這一進(jìn)程后,首先經(jīng)歷細(xì)胞的擴(kuò)增,同時(shí)體積變大,細(xì)胞質(zhì)中開始出現(xiàn)載有脂質(zhì)的液滴,經(jīng)過一段時(shí)間后,脂滴會慢慢增大,并且聚結(jié)成一個或幾個脂滴[19]。脂肪細(xì)胞數(shù)量的增加以及體積的增大伴隨著更多TG的累積,Kim等研究發(fā)現(xiàn),抑制TG合成酶相關(guān)基因的表達(dá)可以顯著降低脂質(zhì)積累[20]。Huang等研究表明,上調(diào)脂肪生成相關(guān)基因?qū)е耇G含量的增加[21]。本實(shí)驗(yàn)利用3T3-L1細(xì)胞研究了腦苷脂在前脂肪細(xì)胞增殖以及分化中發(fā)揮的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),海參腦苷脂可以明顯地阻抑前脂肪細(xì)胞的增殖,并且LDH實(shí)驗(yàn)證明海參腦苷脂對前脂肪細(xì)胞沒有毒性作用;同時(shí)海參腦苷脂可以顯著降低脂肪細(xì)胞脂滴的聚集,降低脂肪細(xì)胞TG含量。以上研究說明海參腦苷脂可能具有降低脂質(zhì)累積以達(dá)到減肥的目的。

        脂肪細(xì)胞分化時(shí)很多轉(zhuǎn)錄因子會發(fā)揮各自的作用,這是一個精密復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄級聯(lián)調(diào)節(jié)過程,目前研究認(rèn)為調(diào)節(jié)脂肪形成的主要轉(zhuǎn)錄因子包括PPARγ、C/EBPα[22-24]。PPARγ屬于核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族,是重要的核心調(diào)節(jié)因子,具有調(diào)節(jié)脂肪形成、糖脂代謝和細(xì)胞增殖分化等生物學(xué)功能[25]。Rosen等證明PPARγ缺失的胚胎干細(xì)胞喪失脂肪細(xì)胞分化功能,說明PPARγ是脂肪細(xì)胞胚胎干細(xì)胞或胚胎成纖維細(xì)胞體外分化所必需的[26]。C/EBPα是堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族的一個亞家族成,在脂肪細(xì)胞分化、發(fā)育等諸多過程扮演著重要的角色[27],并可激活眾多脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞中脂肪的累積[28]。本研究表明,海參腦苷脂作用后,PPARγ mRNA和C/EBPα mRNA的表達(dá)水平明顯下降。說明海參腦苷脂可以通過降低PPARγ以及C/EBPα mRNA的表達(dá)水平,阻抑3T3-L1細(xì)胞的分化,從而減少脂質(zhì)的積累。

        Wnt/β-catenin這一通路被認(rèn)為是前脂肪細(xì)胞分化最主要的負(fù)調(diào)控因子,Wnt/β-catenin通路啟動時(shí),前脂肪細(xì)胞的分化受到抑制,而當(dāng)信號關(guān)閉時(shí),前脂肪細(xì)胞就會開始進(jìn)行分化[29]。研究證明當(dāng)Wnt信號通路激活時(shí),Wnt與跨膜受體Frizzled(FZD)和LRP5/6相結(jié)合引發(fā)一系列反應(yīng),激活細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的蛋白,從而引起細(xì)胞核內(nèi)β-catenin蛋白表達(dá)水平的改變[30]。Kennell等的研究也表明,Wnt抑制脂肪細(xì)胞的分化也可能是通過Fzd1介導(dǎo)的,激活Fzd1增加了β-catenin的穩(wěn)定性,抑制了脂肪形成[31]。LRP5是一個單次跨膜蛋白,具有一個相對小的胞內(nèi)區(qū)域以及一個包含了多個蛋白的大的胞外區(qū)域,其胞外區(qū)域介導(dǎo)Wnt與FZD的結(jié)合,從而形成三元復(fù)合物[32]。此外,LRP5還存在多個獨(dú)立的Wnt結(jié)合位點(diǎn),可與多個Wnt同時(shí)結(jié)合,進(jìn)而與FZD結(jié)合[33]。本研究結(jié)果表明,海參腦苷脂可以顯著降低LRP5和FZD mRNA的表達(dá)水平,通過Wnt/β-catenin信號通路抑制脂肪細(xì)胞的分化。而β-catenin作為Wnt/β-catenin通路的核心因子,它的積累量可直接影響Wnt/β-catenin通路發(fā)揮功能。研究發(fā)現(xiàn),海參腦苷脂可以顯著升高β-catenin向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的情況。

        綜上所述,海參腦苷脂可以顯著抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖以及分化過程。其機(jī)制和脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα有關(guān)。并且可以通過增加FZD和LRP5的表達(dá)激活Wnt/β-catenin通路。同時(shí),海參腦苷脂可以使β-catenin更加穩(wěn)定,促進(jìn)其向核內(nèi)的移動來啟動Wnt/β-catenin通路。最終抑制前脂肪細(xì)胞的分化。

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