莊俊嶸，蔣霜潔，程 佳，王 飛?

（1.上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院，上海 201203；2.復旦大學附屬中山醫(yī)院，上海 200032）

根據(jù)中醫(yī)理論，可將人體體質(zhì)分為9種基本類型，即正常體質(zhì)、陰虛體質(zhì)、陽虛體質(zhì)、痰濕體質(zhì)、濕熱體質(zhì)、氣虛體質(zhì)、瘀血體質(zhì)、氣郁體質(zhì)、特稟體質(zhì)［1］。痰濕證是指因脾胃陽虛導致身體運化水濕、津液輸布能力失常，因此水濕停聚而導致濕濁內(nèi)停，或因外感濕痰失治、滯留不去，臨床表現(xiàn)為以咳嗽痰多、胸部發(fā)悶為主癥的證候，是導致大多數(shù)人群亞健康狀態(tài)的主要原因，多發(fā)于肥胖之人，本虛而標實，其中氣虛陽虛為本，多痰多濕為標［2］，而水液停留在體內(nèi)是衍生多種疾病的危險因素，如高血脂、糖尿病、心腦血管疾病等。隨著現(xiàn)代飲食結(jié)構(gòu)和生活習慣改變，高血脂發(fā)病率逐年升高，是指由于體內(nèi)脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常致使血漿中一種或多種脂質(zhì)，主要指總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）高于正常的疾病，也是誘發(fā)動脈粥樣硬化、冠心病等心腦血管疾病的重要危險因素，對人們身體健康和生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴重影響。

目前，臨床上預防和治療高血脂的藥物主要是他汀類、貝特類，雖然治療效果較好，但也不可避免地存在肝腎損、肌肉損害等副作用，故開發(fā)療效好、副作用低的藥物具有重要意義［3］，而中醫(yī)藥具有標本兼治、毒副作用低等優(yōu)點，故采用中藥治療高血脂癥也成為人們關(guān)注和研究的熱點。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，除濕健脾湯對脾虛痰濕所引起的亞健康狀態(tài)具有良好的預防和治療作用，故本實驗利用現(xiàn)代藥理學技術(shù)對除濕健脾湯治療高脂血大鼠的作用及其作制進行研究，為相關(guān)藥物開發(fā)及臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 動物 SD 雄性大鼠，體質(zhì)量180～200 g，購自北京華阜康公司，許可證號 SCXK（京）2014-0004。入室后維持飼料喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)環(huán)境1 周。

1.2 儀器 低速離心機（Pico 17，美國賽默飛世爾科技公司）；酶標分析儀（ELX808，美國 Bio-Tek 公司）；CP114電子天平（美國奧豪斯公司）；VORTEX-5 旋渦混合器（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司）；HWS-24 電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）；Scientz-ⅡD 超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 試劑 高脂飼料（H10060）、維持飼料（1022）均購自北京華阜康公司；辛伐他丁片（商品名舒降之，規(guī)格20 mg，批號 120987，杭州默沙東制藥有限公司）。TC 試劑盒（批號 20160312）、TG 試劑盒（批號 20160420）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（批號 20160517）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（批號 20160311）、丙二醛（MDA）試劑盒（批號20161115）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（批號20161126）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒（批號20161101）均購自南京建成生物工程研究所。除濕健脾湯提取物為棕色粉末，3.85 g 生藥／g提取物，批號 20160210，自制。

2 方法

2.1 提取物制備與質(zhì)量控制 除濕健脾湯組成為白術(shù)5 g、蒼術(shù) 3 g、白茯苓 3 g、白芍 3 g、當歸 2 g、厚樸 2 g、陳皮2 g、豬苓1.5 g、澤瀉1.5 g、柴胡 2 g、升麻2 g、防風2 g、甘草1 g，按100 倍量配比稱取各藥味，加10 倍量水回流提取 2 次，1.5 h／次，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮，70 ℃下減壓干燥，得干膏 780 g，即得。再對提取物中白術(shù)［4］、茯苓［5］主要活性成分進行質(zhì)量控制，測得白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、茯苓酸、去氫乙酰茯苓酸含有量分別為0.12、0.15、0.06 mg／g。

2.2 分組 每只大鼠采尾血，分離血清，測定血脂水平，根據(jù)該指標將大鼠隨機分為空白對照組、模型組、陽性對照組及除濕健脾湯低、中、高劑量組，每組10 只。

2.3 建模 空白對照組大鼠給予維持飼料，模型組、除濕健脾湯組大鼠給予高脂飼料，均自由飲水。4 周后尾靜脈取血，測定血清TC、TG 水平，若給予高脂飼料組的大鼠血脂水平顯著高于空白對照組，表明造模成功。再連續(xù)灌胃給藥8 周，除濕健脾湯提取物低、中、高劑量組給藥量分別為 1.5、4.5、13.5 g／kg，陽性對照組給予 20 mg／kg 辛伐他汀，空白對照組、模型組給予等劑量生理鹽水，給藥體積均為10 mL／kg。給藥過程中除空白對照組大鼠給予維持飼料外，其他各組繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。

2.4 血液指標檢測 末次給藥后大鼠禁食不禁水12 h，眼內(nèi)眥后靜脈叢取血，分離血清，按照試劑盒說明書操作步驟檢測血清 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 水平。

2.5 肝指數(shù)、抗氧化指標檢測 大鼠取血后脫頸處死，迅速取出肝臟，生理鹽水洗凈并用濾紙擦干，稱定質(zhì)量，計算肝指數(shù)，公式為肝指數(shù)=肝臟濕重／體質(zhì)量×100%。取適量肝組織，加入9 倍體積冰冷生理鹽水，組織勻漿，根據(jù)試劑盒說明書操作步驟檢測勻漿液中SOD、GSH-Px 活性及MDA 水平。

2.6 統(tǒng)計學分析 通過SPSS 20.0 軟件進行處理，結(jié)果以（）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05 表示具有顯著差異。

3 結(jié)果

3.1 除濕健脾湯對大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)的影響 整個實驗過程中各組大鼠體質(zhì)量均有增長，并在正常范圍內(nèi)。表1顯示，實驗結(jié)束時模型組大鼠體質(zhì)量略高，但各組之間無顯著差異（P＞0.05）；與空白對照組比較，模型組大鼠肝指數(shù)顯著升高（P＜0.01），除濕健脾湯中、高劑量組及辛伐他汀組該指標顯著降低（P＜0.05）。

表1 除濕健脾湯對大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)的影響（，n=10）

表1 除濕健脾湯對大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，??P＜0.01；與模型組比較，# P＜0.05

組別 體質(zhì)量／g 肝指數(shù)／%空白對照組 409.85±12.42 5.33±1.09模型組 423.63±10.63 11.01±3.22??辛伐他汀組 401.34±14.52 8.54±2.69#除濕健脾湯低劑量組 412.46±13.32 9.33±2.43除濕健脾湯中劑量組 388.45±11.56 8.87±3.21#除濕健脾湯高劑量組 372.58±12.32 8.12±3.08#

表2 除濕健脾湯對大鼠血液指標的影響（mmol／L，， n=10）

表2 除濕健脾湯對大鼠血液指標的影響（mmol／L，， n=10）

注：與空白對照組比較，??P＜0.01；與相同周次的模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 時間點／周 TC TG LDL-C HDL-C空白對照組 0 1.69±0.22 0.78±0.18 0.33±0.22 1.32±0.28 1.69±0.21 0.77±0.17 0.34±0.28 1.34±0.24 12 1.68±0.20 0.78±0.22 0.34±0.20 1.33±0.32模型組 0 1.69±0.18 0.81±0.33 0.34±0.23 1.33±0.29 4 9.32±2.11?? 1.18±0.20?? 7.16±2.18?? 0.84±0.15??12 10.14±2.16?? 1.31±0.34?? 9.45±1.66?? 0.88±0.26??辛伐他汀組 0 1.63±0.16 0.79±0.15 0.33±0.78 1.37±0.26 4 9.14±2.61 1.35±0.20# 7.25±1.29 0.88±0.34 12 5.47±1.52## 0.86±0.23## 8.12±2.13 1.41±0.25##除濕健脾湯低劑量組 0 1.69±0.19 0.79±0.22 0.33±0.24 1.32±0.19 4 9.37±2.98 1.18±0.22 7.18±2.22 0.86±0.20 12 6.22±1.76# 0.99±0.15# 8.59±2.43 0.96±0.11#除濕健脾湯中劑量組 0 1.68±0.22 0.76±0.19 0.34±0.28 1.32±0.24 4 9.05±2.66 1.17±0.21 7.17±1.98 0.86±0.14 12 5.84±1.61## 0.83±0.16## 8.01±2.88 1.04±0.15#除濕健脾湯高劑量組 0 1.68±0.26 0.78±0.15 0.39±0.27 1.33±0.25 4 8.77±3.01 1.17±0.18 7.15±1.87 0.87±0.19 12 5.51±1.28## 0.80±0.25## 7.55±3.25 1.22±0.15##4

3.2 除濕健脾湯對大鼠血液指標的影響 表2顯示，造模前各組 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平無顯著差異（P＞0.05）；高脂飲食造模4 周后與空白對照組比較，其他組TC、TG、LDL-C 水平顯著增加（P＜0.01），HDL-C 水平顯著降低（P＜0.01）；灌胃給藥8 周后與模型組比較，辛伐他汀組、除濕健脾湯組 TC、TG、LDL-C 水平顯著，HDL-C水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

3.3 除濕健脾湯對大鼠肝臟抗氧化指標的影響 表3顯示，造模前各組MDA 水平及SOD、GSH-Px 活性無顯著差異（P＞0.05）；高脂飲食造模4 周后與空白對照組比較，各組 MDA 水平顯著增加（P＜0.01），SOD、GSH-Px 活性顯著降低（P＜0.01）；灌胃給藥8 周后與模型組比較，辛伐他汀組、除濕健脾湯組 MDA 水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），SOD、GSH-Px 活性顯著升高（P＜ 0.05，P＜0.01）。

表3 除濕健脾湯對大鼠肝臟抗氧化指標的影響（， n=10）

表3 除濕健脾湯對大鼠肝臟抗氧化指標的影響（， n=10）

注：與空白對照組比較，??P＜0.01；與相同周次模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 時間點／周 MDA／（nmol·mg prot-1）SOD／（U·mg prot-1）GSH-Px／（U·mg prot-1）空白對照組 0 1.38±0.76 292.74±16.96 510.33±70.56 1.35±0.38 302.22±20.88 511.21±77.56 12 1.32±0.43 304.79±18.36 516.32±71.23模型組 0 1.37±0.64 303.56±17.55 516.54±67.43 4 2.09±0.32?? 253.67±23.78?? 451.23±63.23?12 2.96±0.65?? 241.88±19.57?? 437.26±55.84??辛伐他汀組 0 1.43±0.41 291.51±18.69 513.47±74.94 4 2.16±0.43 258.16±29.59 456.69±61.47 12 1.66±0.61## 285.83±35.92# 474.15±60.29#除濕健脾湯低劑量組 0 1.39±0.44 304.03±15.56 509.97±78.33 4 2.22±0.27 249.76±26.65 447.56±70.44 12 1.97±0.44## 262.27±22.65# 459.34±67.49除濕健脾湯中劑量組 0 1.37±0.47 298.94±19.06 512.35±74.35 4 2.16±0.25 258.32±26.05 456.34±61.29 12 1.73±0.54## 282.40±38.70# 484.66±58.82#除濕健脾湯高劑量組 0 1.39±0.66 305.29±20.91 507.51±71.28 4 2.11±0.41 251.33±27.63 451.21±66.73 12 1.49±0.25## 292.88±20.78## 499.53±69.35##4

4 討論

隨著人們生活水平提高，一些 “富貴病”的發(fā)病率也逐漸增加，成為危害人類身體健康和工作生活的重要因素。其中，高脂血癥是一種常見病癥，在中老年人中發(fā)病率較高，并已呈現(xiàn)年輕化的發(fā)展態(tài)勢，可引起動脈粥樣硬化、冠心病、腦血栓、腦出血等，甚至危及生命［6］。

中醫(yī)認為，“肥甘厚味”的高血脂癥可導致脾胃受損，進而引起痰濕證，而高脂飲食是導致肥胖和血脂增高的重要原因，故可利用高脂飲食來建造高血脂動物模型。前期研究認為，高脂飲食喂養(yǎng)的大鼠會出現(xiàn)痰濕特征，并具有肥胖、血脂高的特點，可為該動物模型的應(yīng)用提供了一定支持［7-8］，而且脾虛、氣虛是生痰的根本，故欲化濕降濁則必須益氣健脾。

除濕健脾湯是由除濕健脾湯經(jīng)少許改良而成，出自《萬病回春》 卷三，具有健脾除濕之功效，主治久瀉、色蒼而齒疏、倦怠、食減下墜［9］，在臨床應(yīng)用上具有悠久歷史，經(jīng)國家中醫(yī)藥管理局審核組認定為中華名方（“國家中醫(yī)藥名詞術(shù)語成果轉(zhuǎn)化與規(guī)范推廣”項目編號2015GLZX01），方中茯苓、白術(shù)為君藥，前者歸脾腎經(jīng)，既能補脾虛，又是祛濕圣藥，后者歸脾胃經(jīng)，可強脾胃、除濕燥；臣藥陳皮和氣健脾，祛濕化痰［10］；炙甘草為使，調(diào)和諸藥，諸藥合用，相輔相成，標本兼治，共奏益氣健脾、祛濕化濁之功效［11］。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪有效成分具有降壓和降脂的功效［12］；茯苓醇提取物能有效降低高脂血癥小鼠的血脂［13］；白術(shù)精提物具有調(diào)節(jié)高脂大鼠血脂紊亂的作用［14］；薏苡仁水對高血脂模型大鼠具有良好的保護作用［15］，故除濕健脾湯具有健脾補氣、降低血脂的作用。血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平是反映體內(nèi)脂質(zhì)代謝情況的關(guān)鍵性指標［16］，本實驗發(fā)現(xiàn)，除濕健脾湯能明顯降低高脂飲食引起的肝指數(shù)及TC、TG、LDL-C 水平，明顯提高HDL-C 水平，減輕肝臟損傷，表明它能有效治療高脂飲食所引起的脂質(zhì)代謝紊亂。

高血脂癥能引起肝臟中自由基水平增加、抗氧化酶活性降低，導致脂質(zhì)過氧化損傷［17］，故在高血脂防治過程中不僅要關(guān)注對血脂的調(diào)節(jié)能力，更要加強機體抗氧化的能力［18］。MDA 是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)物，可引起細胞損傷，其水平可表明脂質(zhì)過氧化程度［19］；SOD、GSH-Px 是機體內(nèi)具有抗氧化活性的物質(zhì)，可將體內(nèi)形成的過氧化物轉(zhuǎn)換為毒害較低或無害的物質(zhì)，有效抑制自由基氧化損傷，進而實現(xiàn)預防因氧化傷害所造成的各種疾病［20］。本研究發(fā)現(xiàn)，高血脂大鼠肝臟中 MDA 水平增加，SOD、GSH-Px 活性降低，表明高血脂癥可引起脂質(zhì)過氧化水平增加、清除自由基能力降低；給予除濕健脾湯后，可顯著提高肝臟SOD、GSH-Px 活性，降低 MDA 水平，表明該方可能通過抗氧化作用來降低大鼠自由基水平，調(diào)節(jié)機體脂肪代謝。

綜上所述，除濕健脾湯能顯著降低高血脂大鼠的體質(zhì)量、肝指數(shù)，改善肝功能，調(diào)節(jié)體內(nèi)血脂水平，其機制可能與抗氧化作用有關(guān)。