曾通旭，楊波，徐倩，蔡小玲，哈小琴

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅省干細(xì)胞與基因藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050)

前期糖尿病(pre-diabetes,Pre-DM)，又稱(chēng)中度高血糖癥，主要包括空腹血糖受損(impaired fasting glucose，IFG)和葡萄糖耐量受損(impaired glucose tolerance，IGT)，是血糖水平高于正常值又低于糖尿病閾值的一種高風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài).Ⅱ型糖尿病(T2DM)又稱(chēng)成人發(fā)病型糖尿病，是一種非胰島素依賴(lài)型糖尿病，其主要原因是胰島素抵抗與分泌不足.據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全球約有4.7億人處于Pre-DM，2.1億人患有T2DM.近20多年來(lái)，全球的糖尿病患者急劇增加，據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)的調(diào)查研究顯示，預(yù)計(jì)到2030年全球T2DM患者將達(dá)到4.72億，其中在東南亞及太平洋地區(qū)上升較快.我國(guó)是T2DM的高發(fā)地區(qū)，發(fā)病率位居全球首位[1].胰島素抵抗過(guò)程中，首先激活的是先天性免疫反應(yīng)，該反應(yīng)能產(chǎn)生炎癥因子.當(dāng)巨噬細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞受到體內(nèi)外各種有害因素干擾時(shí)，使NF-κB信號(hào)通路激活，加劇釋放相關(guān)的炎癥因子如TNF-α、IL-6、hs-CRP以及炎癥介質(zhì)，進(jìn)而引起胰島素抵抗與胰島素分泌不足.Hotamisligi[2]研究發(fā)現(xiàn)，炎癥與胰島素抵抗存在相關(guān)性，并推測(cè)該因素是引起胰島素抵抗相關(guān)疾病的主要原因之一.鼠類(lèi)因自身的特點(diǎn),以及經(jīng)濟(jì)、易于基因修飾等優(yōu)點(diǎn)常被選為T(mén)2DM動(dòng)物模型.T2DM模型主要分為3大類(lèi)：自發(fā)性T2DM模型、誘導(dǎo)性T2DM模型和轉(zhuǎn)基因/基因敲除T2DM模型.通過(guò)飲食能制備存在胰島素抵抗的動(dòng)物模型，但其周期長(zhǎng)，血糖升高用時(shí)長(zhǎng)且不明顯.若只用化學(xué)藥物來(lái)誘導(dǎo)，能夠制備出具有胰島素分泌障礙型的模型小鼠，但其胰島素抵抗癥狀與T2DM不符.鏈脲佐菌素(STZ)為一種特效的抗菌藥，主要作用于試驗(yàn)小鼠的胰島β細(xì)胞，由于小劑量STZ可以破壞部分胰島β細(xì)胞，但不會(huì)完全破壞，是目前應(yīng)用最廣的造模方法.本文采用高脂飲食制備Pre-DM模型.采用飲食和化學(xué)藥物誘導(dǎo)聯(lián)合最終造出周期短，且具有胰島素抵抗和胰島素分泌不足的T2DM動(dòng)物模型.本文的創(chuàng)新點(diǎn)是通過(guò)Per-DM與T2DM的動(dòng)物模型的制備，研究免疫與Per-DM與T2DM的相關(guān)性，嘗試從免疫方面阻止前期糖尿病發(fā)展為糖尿病，以期為臨床方向的干預(yù)提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)采用5周齡C57BL/6J雄性小鼠，于2016年11月購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司(SCXK(京)2016～0011).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于解放軍蘭州軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心清潔級(jí)動(dòng)物房，溫度(22±2)℃，濕度(50±10)%.分組之前適應(yīng)性飼喂一周，分組時(shí)血糖與體質(zhì)量無(wú)差異性.造模期間，試驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食飲水.試驗(yàn)期間所有操作符合蘭州軍區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)的要求.

1.2 試驗(yàn)設(shè)備及試劑

STZ(貨號(hào)S0130)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司.美國(guó)BIOTEK酶標(biāo)儀.美國(guó)BD公司FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀、BD流式細(xì)胞分析用溶血素(349202)、BD小鼠T淋巴細(xì)胞亞類(lèi)分析抗體合劑含同型對(duì)照抗體(7228925).瑞士梅特勒-托利多電子分析天平.高糖高脂飼料由北京博泰宏達(dá)生物技術(shù)有限公司提供(HD001).ACCU-CHEK血糖儀及配套血糖試紙均購(gòu)于Roche公司.日立生化儀由蘭州軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心提供.胰島素Elisa試劑盒購(gòu)于上海酶聯(lián)生物科技有限公司.顯微鏡用Olympus.檸檬酸鹽緩沖溶液配制方法：檸檬酸2.1 g定容至100 mL(0.1 mol/L)配制A液;檸檬酸鈉2.94 g定溶至100 mL(0.1 mol/L)配制B液.A∶B=11.4∶8.6,配制檸檬酸鈉緩沖溶液，pH≈4.5.20%葡萄糖配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取20 g葡萄糖，先少量水溶解，然后定容至100 mL.

1.3 Pre-DM與T2DM模型的制備

根據(jù)前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將80只小鼠隨機(jī)分為4組，每組20只，入組之前體質(zhì)量、血糖無(wú)顯著差異(P>0.05).用高糖高脂(HC)飼料進(jìn)行飼喂，選取0 d(A組)、40 d(B組)、80 d(C組)為Pre-DM組；高糖高脂飼喂聯(lián)合小劑量多次注射STZ為糖尿病組(D組)，D組每次以40 mg/kg的劑量進(jìn)行腹腔注射STZ.造模前需12 h禁食不禁水，注射完畢需禁食2 h之后再進(jìn)行高脂飼喂.多次注射之后，每周測(cè)定1次空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)，用眼科剪剪約0.5 cm尾進(jìn)行尾靜脈采血，第1滴用無(wú)菌棉擦去，第2滴測(cè)定FBG，血與試紙接觸時(shí)間不少于5 s.若空腹血糖值>12.3 mmol/L，則判定T2DM模型制備成功.

1.4 腹腔注射糖耐量試驗(yàn)(IPGTT)

STZ腹腔注射3周之后做IPGTT試驗(yàn).12 h禁食不禁水，采用20%的葡萄糖以2 g/kg的劑量進(jìn)行腹腔注射.分別在0、0.25、0.5、1、1.5、2 h尾靜脈采血測(cè)血糖值.藥動(dòng)學(xué)AUC是衡量藥物在人體內(nèi)被利用程度的一個(gè)重要藥動(dòng)學(xué)參數(shù).以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以體內(nèi)的葡萄糖濃度為縱坐標(biāo)，求得藥-時(shí)曲線(xiàn)圖中函數(shù)曲線(xiàn)下面積(AUC).用AUC來(lái)反映糖耐量與胰島素抵抗程度.AUC越大表示攝入的葡萄糖越多，表示其糖耐量在下降.其計(jì)算公式是：AUC=0.25×(0 min值)+0.5×(30 min值)+0.75×(60 min值)+0.5×(90 min值)+0.25×(120 min值)[3].

1.5 組織病理學(xué)形態(tài)檢查

胰島與肝臟采樣時(shí)一半取分子樣，備用.一半以4%組織固定液固定10 d，期間更換2次組織固定液.由本院病理科做石蠟包埋，病理切片厚度約10 μm，染色用蘇木素-伊紅.胰島及肝臟病理切片的檢測(cè)結(jié)果用光學(xué)顯微鏡來(lái)觀察，進(jìn)一步分析在前期糖尿病及糖尿病發(fā)生過(guò)程中是否伴隨器官的損傷.

1.6 生理生化指標(biāo)的測(cè)定

應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群分型，Elisa法測(cè)定胰島素、IL-6、TNF-α的水平及生化指標(biāo)的上機(jī)測(cè)定.根據(jù)分組，在不同的時(shí)間點(diǎn)取材，采血之前，尾靜脈測(cè)FBG，用摘眼球的方法處死采血，抗凝血采用免疫比濁法來(lái)測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白.有研究表明，免疫功能可用T淋巴細(xì)胞亞群的比例進(jìn)行評(píng)價(jià)[4].用流式儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD3+CD8+、 CD3+CD4+的分型，通過(guò)白細(xì)胞計(jì)數(shù)確定流式管中加入抗體20 μL、樣本50 μL，陰性對(duì)照與避光孵育15 min，加溶血素反應(yīng)10 min使細(xì)胞完全裂解，之后加PBS 1 000 r/min，5 min，連續(xù)2次，上機(jī)檢測(cè).根據(jù)說(shuō)明書(shū)，設(shè)置流式細(xì)胞儀PE-CyTM偶聯(lián)CD3+，PE偶聯(lián)CD4+，F(xiàn)ITC偶聯(lián)CD8+，然后對(duì)淋巴細(xì)胞作FITC、PE和PE-CyTM的熒光強(qiáng)度檢測(cè).促凝血離心，3 000 r/min,15 min.用來(lái)做生化指標(biāo)的檢測(cè)及用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)法檢測(cè)小鼠胰島素、IL-6、TNF-α的表達(dá)水平.尿素(UREA)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、游離脂肪酸(FFA)等生化指標(biāo)檢測(cè)用全自動(dòng)生化儀(蘭州軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心)測(cè)定.

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 制備模型過(guò)程中小鼠空腹血糖的變化

各試驗(yàn)組小鼠在造模的過(guò)程中空腹血糖一直穩(wěn)定上升.在Pre-DM 3組，B、C組空腹血糖較A組高，有上升趨勢(shì)，且組間差異顯著(P<0.05).D組注射3周后空腹血糖明顯高于其他3組，差異極顯著(P<0.01).整個(gè)造模過(guò)程80只小鼠，死亡19只，HC+STZ組6只血糖沒(méi)有達(dá)到閾值，造模成功率64.3%.注射STZ 3周后，模型制備成功.整個(gè)造模過(guò)程血糖變化見(jiàn)圖1.

圖1 造模過(guò)程各組的空腹血糖變化情況Figure 1 The fasting blood glucose(FBG) changes of each group in the modeling process

2.2 制備模型過(guò)程中小鼠體質(zhì)量的變化

由圖2可知，與A組相比，B、C組體質(zhì)量明顯上升且差異顯著(P<0.05).D組與C組相比體質(zhì)量差異不顯著.且Pre-DM組小鼠活動(dòng)度降低，取樣過(guò)程發(fā)現(xiàn)脂肪較正常組多.T2DM組小鼠狀態(tài)較差，活動(dòng)度顯著降低，皮毛蓬松，嚴(yán)重缺乏光澤.

圖2 造模過(guò)程各組體質(zhì)量的變化Figure 2 Changes in the body weight during the modeling process

2.3 小鼠糖耐量變化(IPGTT)及胰島素抵抗

各試驗(yàn)組的IPGTT結(jié)果見(jiàn)圖3-A.D組在腹腔注射20%的葡萄糖之后，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血糖值與其余3組差異顯著(P<0.05).B組和C組與A組相比，15 min的血糖值差異顯著(P<0.05).根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)公式計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)圖3-B.

2.4 各模型組肝臟與胰島的病理切片結(jié)果

Pre-DM及T2DM患者一般都是胰島素抵抗伴隨著三大代謝紊亂，即蛋白質(zhì)代謝、脂肪代謝、糖代謝.主要的是機(jī)體糖代謝紊亂.肝臟是蛋白質(zhì)、脂肪和糖的代謝中心，當(dāng)肝功能異常時(shí)，會(huì)引起三大代謝紊亂.本試驗(yàn)中胰腺與肝臟的病理檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4～5.

與A組比較，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01).Compared with group A,the * means significant difference(P<0.05),and the ** means extremely significant difference(P<0.01).圖3 小鼠IPGTT及AUC試驗(yàn)結(jié)果Figure 3 The IPGTT test and AUC results

2.5 生化指標(biāo)及胰島素、CRP、IL-6、TNF-α的Elisa結(jié)果

C組CRE與TG與A組無(wú)顯著差異(P>0.05)，D組的UREA、CRE及IL-6與C組之間亦無(wú)顯著差異(P>0.05).UREA各組間無(wú)顯著差異(P>0.05).其余組間均有顯著差異(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表1～2.

2.6 CD3+、CD3+CD8+、 CD3+CD4+等T淋巴細(xì)胞亞群比例的變化

發(fā)現(xiàn)CD3+CD8+、CD3+CD4+其余組間均差異顯著(P<0.05)，CD3+A組與D組顯著差異(P<0.05)，組間差異不顯著.結(jié)果見(jiàn)表3及圖6.

A：與周?chē)倥萁缦耷逦?少量腺泡細(xì)胞伸入胰島內(nèi)；B：胰島輕度萎縮，輕度纖維化.外分泌部的腺泡細(xì)胞之間有較多的脂肪細(xì)胞沉積，部分區(qū)域的腺泡萎縮；C：胰島重度萎縮，胰島內(nèi)可見(jiàn)脂肪沉積.外分泌部的腺泡細(xì)胞之間有少量脂肪細(xì)胞沉積；D：胰島大面積重度萎縮，可見(jiàn)大量透明脂肪和空泡化細(xì)胞.胰島內(nèi)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生.外分泌腺侵入胰島內(nèi)，血管周?chē)杷伤[，部分區(qū)域腺泡萎縮.圖4 小鼠胰島HE染色結(jié)果Figure 4 HE staining of the pancreatic islets of each groups

A：肝細(xì)胞索較明顯，少部分肝細(xì)胞凋亡，部分區(qū)域肝細(xì)胞脂肪變性；B：肝細(xì)胞索基本消失，細(xì)胞界限不清晰.肝細(xì)胞脂肪變性、伴有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；C：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，肝細(xì)胞彌漫型大泡性脂肪變性，細(xì)胞核偏于一側(cè)；D：可出現(xiàn)小灶狀、多灶狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì)胞壞死灶.肝細(xì)胞彌漫型小泡性脂肪變性，有小灶性炎性細(xì)胞浸潤(rùn).圖5 小鼠肝臟HE染色結(jié)果Figure 5 HE staining of the liver tissues of each groups

表1 各試驗(yàn)組炎癥與免疫相關(guān)因子的比較

與A組比較，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01).

Compared with group A,* means significant difference(P<0.05),and the ** means extremely significant difference(P<0.01).

表2 各試驗(yàn)組生化指標(biāo)的比較

與A組比較，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01).

Compared with group A,* means significant difference(P<0.05),and the **means extremely significant difference(P<0.01).

表3 各試驗(yàn)組T淋巴細(xì)胞亞群比例

與A組比較，*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01).

Compared with group A,* means significant difference(P<0.05),and the **means extremely significant difference(P<0.01).

圖6 CD3+、CD3+CD8+、 CD3+CD4+等T淋巴細(xì)胞亞群流式細(xì)胞圖Figure 6 Flow cytometry of CD3+,CD3+CD8+,CD3+CD4+T lymphocyte subsets

3 討論與結(jié)論

本研究探討了小鼠Pre-DM和T2DM模型的制備.T2DM的主要患病原因是胰島素抵抗與胰島β細(xì)胞功能障礙引起的胰島素分泌不足，主要的臨床癥狀是高血糖及各種并發(fā)癥，尤其是對(duì)一些終末器官會(huì)造成嚴(yán)重?fù)p傷，如引起眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)等慢性病變.Pre-DM的血糖水平是處于糖尿病患者與正常之間，25%的Pre-DM患者在5 a之內(nèi)最終會(huì)發(fā)展為T(mén)2DM[5].IDF 2017年全球糖尿病地圖(第8版)發(fā)現(xiàn)我國(guó)T2DM發(fā)病率較高且呈逐年上升趨勢(shì)，有效地防止該疾病的發(fā)生是國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家比較棘手的問(wèn)題.本文通過(guò)研究Pre-DM與免疫的相關(guān)性，旨在為臨床中從免疫方向干預(yù)T2DM提供可靠依據(jù).

炎癥因子在T2DM、冠心病、類(lèi)風(fēng)濕疾病、高血壓等許多疾病發(fā)生的過(guò)程中有舉足輕重的作用.20世紀(jì)90年代，就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)促炎因子IL-6、TNF-α在多種組織中影響葡萄糖水平的穩(wěn)定性.近年來(lái)，炎癥在T2DM與Pre-DM的發(fā)生過(guò)程中備受關(guān)注，越來(lái)越多的炎癥及免疫的標(biāo)志物，如Hs-CRP、TNF-α、IL-6等都與該病的發(fā)生具有相關(guān)性.Hs-CRP是機(jī)體受到微生物入侵或組織損傷等炎癥性刺激時(shí)肝細(xì)胞合成的一種全身性炎癥反應(yīng)急性期的非特異性標(biāo)志物，其主要與IL-6和TNF-α的調(diào)節(jié)相關(guān).由脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-6和TNF-α是刺激肝臟合成Hs-CRP的主要細(xì)胞因子.國(guó)際醫(yī)學(xué)界認(rèn)定，Hs-CRP可以作為預(yù)測(cè)T2DM發(fā)病的危險(xiǎn)指標(biāo).本文研究發(fā)現(xiàn)，Hs-CRP與胰島素抵抗綜合征有較強(qiáng)相關(guān)性.有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著體內(nèi)脂肪含量的增加,CRP也有升高的趨勢(shì).本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高脂飼喂的小鼠在Pre-DM發(fā)展為Ⅱ型糖尿病的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，Hs-CRP呈逐漸上升趨勢(shì)，且組間差異較顯著.這表明慢性炎癥也是引起引起胰島素抵抗的因素之一.

IL-6是由活化的T細(xì)胞與成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，其主要作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫活性與激活NK等細(xì)胞免疫細(xì)胞.IL-6是已知的多功能炎性細(xì)胞因子，它能誘導(dǎo)B淋巴與T細(xì)胞增殖、分化，產(chǎn)生抗體，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)，是炎癥發(fā)生的始發(fā)因子.有研究發(fā)現(xiàn)，IL-6可誘發(fā)胰島素抵抗，其主要作用是能減少GLUT-4的表達(dá)，從而降低脂肪細(xì)胞由胰島素介導(dǎo)的葡萄糖、脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)T2DM的發(fā)生.IL-6還可降低IRS-1的酪氨酸磷酸化及下游PI3K的活性，導(dǎo)致胰島素抵抗[7].Devaraj等[7]研究發(fā)現(xiàn)，較高濃度的血糖通過(guò)上調(diào)PKC、MAPK及NF-κB途徑導(dǎo)致IL-6的產(chǎn)生增多，且Pre-DM與T2DM患者單核細(xì)胞中內(nèi)脂素、TNF-α、IL-6 mRNA的表達(dá)水平顯著增高，提示IL-6的升高與Pre-DM及T2DM的IR有關(guān)[7].本研究中，4個(gè)試驗(yàn)組的IL-6與Pre-DM、T2DM有關(guān)，更證實(shí)了 IL-6與胰島素抵抗具有相關(guān)性.

TNF具有調(diào)節(jié)人體免疫與代謝的功能，其不僅是一種有效的腫瘤殺傷因子，而且在調(diào)節(jié)免疫功能時(shí)發(fā)揮重要作用，包括TNF-α和TNF-β.TNF-α是一種由巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞產(chǎn)生的促炎性細(xì)胞因子，特點(diǎn)是靈敏度較高，是觸發(fā)炎癥反應(yīng)的核心.主要功能是參與機(jī)體的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)、炎癥、免疫應(yīng)答等，是多種信號(hào)通路的關(guān)鍵環(huán)節(jié).本文研究發(fā)現(xiàn)TNF-α在Pre-DM及T2DM狀態(tài)下產(chǎn)生增多.Tanaka等[8]研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α能降低過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)mRNA的表達(dá)，減少PPAR-γ產(chǎn)生.PPAR-γ是一類(lèi)核轉(zhuǎn)錄因子，主要表達(dá)在脂肪細(xì)胞，可控制該細(xì)胞內(nèi)不同的代謝水平，其作用是抗炎與促進(jìn)凋亡；同時(shí)，PPAR-γ激活對(duì)leptin的轉(zhuǎn)錄作用的抑制，使leptin水平降低，從而增加了體內(nèi)游離脂肪酸的生成，體內(nèi)胰島素水平上升.Peraldi等[9]認(rèn)為，神經(jīng)鞘磷脂酶的激活與?；拾贝嫉漠a(chǎn)生是TNF-α影響胰島素受體活性的重要途徑.當(dāng)P55TNFR與TNF-α結(jié)合之后，使神經(jīng)鞘磷脂水解為?；拾贝寂c膽堿，從而引起胰島素抵抗.TNF-α可能會(huì)引起胰島巨噬細(xì)胞活化釋放IL-1， 從而使NOS在胰島β細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)增多，進(jìn)一步弱化胰島素的功能.本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)D組的TNF-α水平與其他三組差異較顯著，并與胰島素抵抗指數(shù)呈顯著正相關(guān).由此可見(jiàn)在Pre-DM及T2DM發(fā)生的過(guò)程中，炎癥因子TNF-α起到關(guān)鍵性的作用.

T淋巴細(xì)胞亞群是具有免疫調(diào)節(jié)的細(xì)胞群.CD3+代表全T細(xì)胞、CD4+與CD8+分別代表輔助性T細(xì)胞(Treg)與毒性T細(xì)胞且是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵，彼此之間通過(guò)協(xié)同與拮抗作用維持免疫平衡.Treg表面標(biāo)志較多，特異性最高的是FOXP3+Treg，屬于轉(zhuǎn)錄因子家族中，當(dāng)其基因突變時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重的免疫疾病.近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)T2DM患者FOXP3+Treg表達(dá)較低[10].CD8+受到外來(lái)抗原刺激后，發(fā)揮有效的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫殺傷作用，直接破壞靶細(xì)胞，CD4+細(xì)胞受到外界抗原致敏后，產(chǎn)生淋巴因子，誘導(dǎo)T細(xì)胞、B細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的增殖.研究發(fā)現(xiàn)在Pre-DM及T2DM時(shí)期，CD3+、CD4+、 CD8+等T淋巴細(xì)胞較正常組低且各組間差異顯著，提示長(zhǎng)期處于高血糖狀態(tài)下，抑制了免疫細(xì)胞產(chǎn)生，且CD4+細(xì)胞膜上的IL-2R落入血液循環(huán)，抑制活化T細(xì)胞擴(kuò)增，從而抑制免疫功能.本研究發(fā)現(xiàn)CD3+CD8+、CD3+CD4+組間均差異顯著，A組的CD3+與D組顯著差異，但組間差異不顯著.因此，T2DM發(fā)生的過(guò)程中T淋巴細(xì)胞亞群比例失衡，提示細(xì)胞免疫功能存在缺陷.

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥也是引起胰島素抵抗綜合征的一個(gè)重要因素.雖然越來(lái)越多的流行病學(xué)與臨床研究證實(shí)炎癥參與了胰島素抵抗，但是由于研究的局限性所致，目前關(guān)于炎癥與免疫因子在Pre-DM與T2DM中具體的調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究.本文研究的各項(xiàng)免疫指標(biāo)的水平與Pre-DM和T2DM之間有較強(qiáng)的相關(guān)性，可為今后的相關(guān)研究提供更多的理論依據(jù).