林水城，劉云輝，胡可慧，白丁平，黃小紅

(福建農(nóng)林大學(xué)中西獸醫(yī)結(jié)合與動(dòng)物保健福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州350002)

近年來，抗生素作為飼料添加劑在飼料中的應(yīng)用，很大程度上加速了畜牧業(yè)的發(fā)展，但也由于長期使用、濫用抗生素，使畜禽機(jī)體產(chǎn)生了耐藥性，致使畜禽免疫功能受到不同程度的影響，甚至在畜禽體內(nèi)檢測到藥物殘留，進(jìn)而導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品的安全問題.因此，尋找抗生素替代藥物是當(dāng)下的必然趨勢.由于中草藥添加劑無污染、無殘留及不產(chǎn)生抗藥性的優(yōu)點(diǎn)，深受養(yǎng)殖畜牧業(yè)的關(guān)注；同時(shí)，中草藥添加劑有提高畜禽機(jī)體免疫能力、促進(jìn)畜禽生長發(fā)育的效果，更是為養(yǎng)殖畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展帶來新的希望.筋骨草(Ajuga decumbensThunb)別名白毛夏枯草、金瘡小草和破血丹等.筋骨草性味苦寒，現(xiàn)代藥理研究認(rèn)為，其具有抗菌、抗病毒和抗炎癥的功效[1-2].中草藥超微粉粉體粒徑可以小至10～25 μm，它擁有一般顆粒所不具備的優(yōu)點(diǎn)，如良好的藥物有效物質(zhì)溶出度、藥效學(xué)活性，藥物功能性成分起效迅速、完全[3-4]，研究表明，筋骨草可以提高鼠類抗應(yīng)激能力和抗氧化功能[5-6].目前有關(guān)筋骨草超微粉在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用鮮見報(bào)道，為此，本試驗(yàn)通過在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加筋骨草超微粉，檢測試驗(yàn)肉雞的生產(chǎn)性能及血清的抗氧化功能、生化指標(biāo)、免疫指標(biāo)，研究筋骨草超微粉對肉雞的保健效果，并初步探討其可能的作用機(jī)理，旨在為筋骨草超微粉在家禽生產(chǎn)上的應(yīng)用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 筋骨草超微粉購自福建中農(nóng)牧生物藥業(yè)有限公司.經(jīng)鑒定，筋骨草為管狀花目唇形科筋骨草屬多年生草本，其根部膨大，直立，無匍匐莖，有效活性成分乙酰哈巴苷的含量為0.62%.

1.1.2 試驗(yàn)肉雞 160只1日齡艾維茵白羽肉雞購自福建圣農(nóng)集團(tuán)有限公司.

1.1.3 試劑 總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒和過氧化氫酶(catalase，CAT)試劑盒購自南京建成生物工程研究所；血清甘油三酯、總膽固醇、堿性磷酸酶、尿素氮、總蛋白、白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、鈣和磷等試劑盒購自北京利德曼生化股份有限公司；免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及補(bǔ)體C3、C4檢測試劑盒購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司.

1.1.4 儀器與設(shè)備 主要儀器與設(shè)備有VIS-7200型可見分光光度計(jì)(上海美普達(dá)儀器有限公司)、OLYMPUS AU2700型全自動(dòng)化學(xué)免疫分析儀(OLYMPUS公司)、Sk-1快速混勻器(金壇市科析儀器有限公司)和RT-9900半自動(dòng)生化分析儀(深圳市雷杜生命科學(xué)公司).

1.2 試驗(yàn)處理與日糧配方

選取160只1日齡白羽肉雞隨機(jī)分為4組(對照組、試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組)，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞.對照組飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組分別在飼喂的基礎(chǔ)日糧中添加500、1 000和2 000 mg·kg-1筋骨草超微粉.基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1，日糧均制成粉狀.試驗(yàn)雞籠養(yǎng)，自由采食與飲水，按肉雞一般免疫程序免疫.試驗(yàn)在福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物營養(yǎng)試驗(yàn)場進(jìn)行，為期42 d，1～21 d為試驗(yàn)前期，22～42 d為試驗(yàn)后期.

1.3 樣品的采集及處理

試驗(yàn)第42天時(shí)分別從試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組和對照組每個(gè)重復(fù)組中隨機(jī)抽取1只雞進(jìn)行采血，采血前空腹12 h，翅下靜脈采血，每次每只抽取10 mL全血置離心管中，在4℃、3 500 r·min-1下離心10 min，分離血清，分裝于Eppendorf管中，置冰箱(-20℃)中保存，用于血清抗氧化功能、生化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的測定.

1.4 指標(biāo)的測定

1.4.1 生產(chǎn)性能的測定 分別于試驗(yàn)第21和42天對每組5個(gè)重復(fù)雞進(jìn)行稱重，稱重前空腹12 h，測定采食量、平均日增重、日采食量和料重比.

1.4.2 血清抗氧化功能的測定 SOD活性采用羥胺法測定，MDA濃度采用TBA法測定，CAT活性采用可見光法測定，T-AOC和GSH-Px活性采用化學(xué)比色法測定.測定儀器為可見分光光度計(jì)，具體操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行.

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient level of the basal diet(DM basis)

1.4.3 血清生化指標(biāo)的測定 血清中的甘油三酯、總膽固醇、尿素氮、總蛋白、白蛋白、鈣、磷、堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶等指標(biāo)均送往福州市空軍醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測，測定儀器為全自動(dòng)化學(xué)免疫分析儀，具體操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行.

1.4.4 血清免疫指標(biāo)的測定 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及補(bǔ)體C3、C4的含量采用免疫比濁法測定，測定儀器為半自動(dòng)生化分析儀.

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和LSD多重比較.

2 結(jié)果與分析

2.1 筋骨草超微粉對肉雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知：試驗(yàn)前期(1～21 d)，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組肉雞的平均日增重有提高的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組的料重比顯著降低了5.30%(P＜0.05)，其他各組之間則差異不顯著(P＞0.05).試驗(yàn)全期(1～42 d)，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組肉雞的平均日增重、日采食量和料重比均有提高的趨勢，但差異均不顯著(P＞0.05).

表2 筋骨草超微粉對肉雞生產(chǎn)性能的影響1)Table 2 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the growth performance of broilers

2.2 筋骨草超微粉對肉雞血清抗氧化功能的影響

由表3可知：與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組肉雞血清的T-AOC分別提高了40.27%(P＞0.05)、56.06%(P＜0.05)和25.40(P＞0.05)，SOD 活性分別提高了13.97%(P＜0.01)、17.44%(P＜0.01)和 12.61%(P＜0.01)，GSH-Px活性分別提高了 3.23%(P＞0.05)、4.52%(P＞0.05)和 2.61%(P＞0.05)，CAT 活性分別提高了7.14%(P＞0.05)、12.49%(P＞0.05)和 6.19%(P＞0.05)，MDA 濃度分別降低了 7.14%(P＞0.05)、12.49%(P＞0.05)和6.20%(P＞0.05).

表3 筋骨草超微粉對肉雞血清抗氧化功能的影響1)Table 3 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum antioxidant capacity of broilers

2.3 筋骨草超微粉對肉雞血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知：與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組肉雞血清的甘油三酯濃度顯著降低(P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅱ和Ⅲ組極顯著降低(P＜0.01)；試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組的尿素氮濃度極顯著降低(P＜0.01)；試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組的總蛋白含量和磷濃度顯著提高(P＜0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組的白蛋白含量顯著提高(P＜0.05)，試驗(yàn)Ⅱ和Ⅲ組極顯著提高(P＜0.01).試驗(yàn)Ⅰ～Ⅲ組的總膽固醇濃度、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、鈣濃度與對照組的差異不顯著(P＞0.05).

表4 筋骨草超微粉對肉雞血清生化指標(biāo)的影響1)Table 4 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum biochemical indexes of broilers

2.4 筋骨草超微粉對血清免疫指標(biāo)的影響

由表5可知：與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組肉雞血清的IgA含量分別提高了28.72%(P＜0.01)、36.01%(P＜0.01)和31.58%(P＜0.01)，IgG 含量分別提高了8.91%(P＞0.05)、12.29%(P＜0.05)和 9.94%(P＞0.05)，IgM 含量分別提高了 12.13%(P＜0.01)、14.61%(P＜0.01)和 13.46%(P＜0.01)，C3含量分別提高了11.95%(P＜0.05)、17.96%(P＜0.05)和 13.12%(P＜0.05)，C4含量分別提高了 29.25%(P＜0.01)、33.97%(P＜0.01)和31.26%(P＜0.01).表明試驗(yàn)各組血清的免疫指標(biāo)均無顯著差異(P＞0.05).

表5 筋骨草對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響1)Table 5 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum immune indexes of broiler mg·L-1

3 討論

3.1 筋骨草超微粉對肉雞生產(chǎn)性能的影響

大多數(shù)中草藥添加劑能調(diào)節(jié)畜禽機(jī)體的代謝平衡，促進(jìn)畜禽生長發(fā)育，增加經(jīng)濟(jì)效益.何二國等[7]研究表明，黃黨散超微粉能提高肉雞的成活率、平均日增重，降低料重比；施新榮等[8]研究表明，黃芪超微粉能顯著提高肉雞的平均日增重，降低料重比.本試驗(yàn)前期(1～21 d)在飼糧中添加筋骨草超微粉能提高肉雞的料重比，其中，試驗(yàn)Ⅱ組的料重比顯著高于對照組(P＜0.05)，表明筋骨草超微粉能有效促進(jìn)肉雞前期的生長發(fā)育；在試驗(yàn)全期(1～42 d)，筋骨草超微粉有提高肉雞平均日增重的趨勢，但與對照組的差異不顯著(P＞0.05)，對日采食量和料重比也無顯著影響(P＞0.05).可見，在日糧中添加1 000 mg·kg-1筋骨草超微粉能有效提高肉雞前期的料重比.

3.2 筋骨草超微粉對肉雞血清抗氧化功能的影響

機(jī)體在代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基會(huì)導(dǎo)致生物膜中的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化作用，形成MDA和氫過氧基等脂質(zhì)過氧化物，破壞膜結(jié)構(gòu)，最終造成組織細(xì)胞的損傷[9-10].動(dòng)物體內(nèi)存在一套完整的抗氧化系統(tǒng)(酶類和非酶類清除機(jī)制)，其中，酶類系統(tǒng)包括SOD、GSH-Px和CAT等[11]，這些抗氧化物質(zhì)在清除自由基和防止生物分子損傷等方面起著重要作用[12].T-AOC可反映機(jī)體自由基代謝的狀況，是整個(gè)機(jī)體非酶系統(tǒng)抗氧化能力最重要的體現(xiàn)[13].趙香菊等[14]研究表明，添加不同含量的女貞子超微粉能提高肉仔雞血清中的T-AOC及GSH-Px、SOD的活性，降低MDA濃度；鄧文瓊等[15]研究表明，穿心蓮超微粉可有效提高三黃雞血清的抗氧化能力.本試驗(yàn)結(jié)果顯示：在飼糧中添加筋骨草超微粉可提高肉雞血清的T-AOC及GSH-Px、SOD、CAT的活性，降低MDA濃度，T-AOC顯著提高(P＜0.05)，SOD活性極顯著提高(P＜0.01).可見，筋骨草超微粉可通過提高肉雞血清的抗氧化酶活性來增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化功能.

3.3 筋骨草超微粉對肉雞血清生化指標(biāo)的影響

血清中的甘油三酯濃度在一定程度上反映了畜禽體內(nèi)的脂肪代謝狀況，濃度過高則顯示脂肪代謝發(fā)生障礙.本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加筋骨草超微粉能降低肉雞血清中的甘油三酯濃度，表明筋骨草超微粉能促進(jìn)肉雞的脂肪代謝，使更多的脂肪氧化，以提供機(jī)體蛋白質(zhì)合成所需的能量，進(jìn)而促進(jìn)肉雞的生長.血清中的總蛋白和白蛋白含量能反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和免疫功能的強(qiáng)弱.血清中的尿素氮濃度作為畜禽蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡的一個(gè)衡量指標(biāo)，直接反映了機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸代謝水平，其濃度下降表明機(jī)體蛋白質(zhì)合成增加，氮素利用提高及尿素合成降低[16].鄧必賢[17]研究表明，在飼糧中添加黃芪超微粉能提高血清中的總蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮濃度.蔡旭斌等[18]研究表明，在飼糧中添加太子參莖葉多糖能提高血清中的總蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮濃度，促進(jìn)斷奶仔豬蛋白質(zhì)的合成.本試驗(yàn)在飼糧中添加筋骨草超微粉可提高肉雞血清中的總蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮濃度，表明筋骨草超微粉能加速機(jī)體蛋白質(zhì)的合成，促使肉雞快速生長發(fā)育.血清中的鈣和磷作為機(jī)體最多的，也是必須的礦物質(zhì)元素，參與機(jī)體的能量代謝，鈣和磷的濃度反映了機(jī)體鈣和磷的代謝水平[19].祝國強(qiáng)等[20]研究表明，中草藥添加劑能提高肉雞血清中的無機(jī)磷濃度，促進(jìn)骨骼鈣化和生長，促使肉雞快速生長發(fā)育.本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加筋骨草超微粉可提高肉雞血清中的磷濃度，表明筋骨草超微粉能加快肉雞骨鹽沉積的速度，刺激骨骼生長，滿足肉雞快速生長的需求.堿性磷酸酶是一種參與消化過程的酶，其活性可反映肝細(xì)胞變性和壞死的程度.谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性也是反映肝細(xì)胞損傷的主要敏感指標(biāo)，當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，血液中這兩種酶的活性會(huì)快速增加[21].本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加筋骨草超微粉對肉雞血清中的谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均無顯著影響(P＞0.05)，表明在飼糧中添加筋骨草超微粉不會(huì)損傷機(jī)體，對肉雞生長安全無害.

3.4 筋骨草超微粉對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白主要存在于機(jī)體血清之中，是家禽體液免疫系統(tǒng)的重要組成物質(zhì)，擁有特異性抗體和非特異性抗體.免疫球蛋白IgA、IgM和IgG具有抗菌、抗病毒和抗毒素的功能，是家禽體內(nèi)重要的免疫球蛋白，保護(hù)家禽免受外界有害物質(zhì)的侵入.范天寶[22]研究表明，在飼糧中添加復(fù)方黃芪能有效提高肉雞的IgA、IgM和IgG含量；王帥兵等[23]將楊樹花超微粉添加到肉雞飼糧中發(fā)現(xiàn)，其可以促進(jìn)雛雞體內(nèi)IgA、IgM和IgG的含量.本試驗(yàn)結(jié)果與上述前人[22-23]的研究結(jié)果相似.本試驗(yàn)在肉雞的飼糧中添加筋骨草超微粉，可提高肉雞血清中的IgA、IgM和IgG含量，尤其對IgA和IgG的增加效果更為明顯.補(bǔ)體是存在于家禽血液和組織液中的經(jīng)過活化后產(chǎn)生的具有酶活性的蛋白質(zhì)，其中，C3和C4作為補(bǔ)體系統(tǒng)重要的組成成分在體液免疫中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用.補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)激活后，產(chǎn)生多類生物活性物質(zhì)，介導(dǎo)一系列生物學(xué)效應(yīng)，發(fā)揮機(jī)體特異性和非特異性的防御功能，如C3和C4含量的提高，則說明了機(jī)體特異性免疫增強(qiáng).林淑慧[24]研究表明，銀杏葉提取物能有效提高肉雞血清中的C3和C4含量，增強(qiáng)肉雞的免疫能力；李杰[25]研究表明，在日糧中添加1%酒蒸女貞子能顯著提高肉雞早期血清中的C3和C4含量.本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加筋骨草超微粉能顯著提高肉雞血清中的C3含量(P＜0.05)，極顯著提高C4含量(P＜0.01).此結(jié)果與上述前人[24-25]的研究結(jié)果一致.

4 結(jié)論

在飼糧中添加筋骨草超微粉能改善白羽肉雞血清的抗氧化功能和生化指標(biāo)，增強(qiáng)免疫功能，提高肉雞前期的生產(chǎn)性能.在本試驗(yàn)條件下，筋骨草超微粉在肉雞飼糧中的適宜添加量為1 000 mg·kg-1.